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用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度
实验目的：
通过对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数，将两个结果做标准曲线。标准曲线做出后，通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓
度，用于指导菌悬液的制备。
波长为600nm
比色皿厚度： cm
实验材料：空白对照液：0.9%无菌氯化钠溶液 稀释液：0.9%无菌氯化钠溶液
营养肉汤培养基
实验菌种：金黄色葡萄球菌（新鲜培养物）
实验步骤：
1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，在30～
35℃恒温培养箱中培养18～24h。
2.在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液。具体为分别吸取营养肉汤培
养液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml到10ml0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释成7种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为1-7号。
2.1平板菌落计数法测活菌浓度
-
取14 个营养琼脂培养基平板，分别从每个原始菌液中，取0.2ml |
的菌悬液，用平板涂布法，涂于平板中，标明序号，每个稀释度涂2
-
块平板. 37℃培养箱培养72 h 后，可见菌落形成，选取菌落数在30~3 |
00间的平板进行计数，每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数.
计算出原菌液细菌浓度，作为细菌菌液的标准浓度。
2.2分光光度法测菌悬液吸收值
同时将以上5种原始菌液在波长为600nm下测定吸光度。用0.9%
无菌氯化钠溶液作为空白对照，记录各原始菌液的吸光度值。
表一：平板菌落计数与吸光度值对比记录
序号 | 吸取原培养液的量（ml）---原始菌液 | 加样到平板上的量（ml） | 稀释 倍数 | 平板计数菌落数（cfu） | 吸光度值 | 原始菌液的
含菌量（cfu） |
1 | 0.1 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.018 |
|
2 | 0.2 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.029 |
|
3 | 0.3 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.049 |
|
4 | 0.4 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.058 |
|
5 | 0.5 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.076 |
|
6 | 0.6 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.082 |
|
7 | 0.7 | 0.2 | 5 倍 |
|
| 0.102 |
|
3结果计算
对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数，将平板菌落计数所得菌液浓度作为细菌标准浓度c.根据所测出A值以及相对应的标准浓度c值，作出标准曲线。
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