HIV实验室操作规程定

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喀什地区第二人民医院艾滋病初筛实验室技术规范

艾滋病初筛实验室技术规范

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喀什第二人民医院检验科艾滋病初筛实验室技术规范主题内容序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 2 页共 26 页目录代号 JYZX-3 JYZX-3 JYZX-4 JYZX-3 JYZX-4 JYZX-4 JYZX-4 JYZX-4 JYZX-4 JYZX-4 JYZX-4 JYZX-4 页号 4 6 8 9 10 11 13 15 19 21 23 26 HIV初筛实验室管理制度 HIV实验室生物安全防护制度 HIV样品接收、登记和处理 HIV抗体检测筛查实验室保密制度 HIV抗体检测筛查实验室废弃物品消毒处理实验室意外和事故处理艾滋病的职业暴露后预防艾滋病实验室质量控制SOP 人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）检测操作程序人类免疫缺陷病毒抗体（乳胶层析法）操作程序 ELISA标准操作要点附表HIV抗体复检化验单此文件版权属地区第二人民医院检验科 2

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：版本/修订号：生效日期：2010-01-01 第 3 页共 26 页修改页

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-3 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 4 页共 26 页 HIV初筛实验室管理制度 HIV初筛实验室管理制度

1.目的

为加强本实验室艾滋病初筛检测工作的规范化管理，提高检测工作，根据《全国艾滋病检测工作管理办法》，特制定本实验室的管理制度。 2.范围

适用于HIV初筛实验室。

3.人员组成：本实验室由两名参加过地区疾病控制中心HIV初筛检测技术培训，并获得培训证书，人员均具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验的人员承担。 4. HIV初筛实验室为自治区卫生厅省批的二级生物实验室。 5. 管理制度

5.1. 热爱本职工作，遵守卫生人员服务守则与工作原则； 5.2. 坚持不歧视原则，与服务对象建立良好关系，关心他人； 5.3. 做好合格和规范的预防艾滋病传播的宣传工作；

5.4. 严格执行《全国艾滋病检测工作管理办法》；遵照本实验室的相关SOP文件工作； 5.5. 严格执行实验室生物安全通用要求，工作人员要熟悉生物安全操作知识，和消毒技术； 5.6. 不得在实验室内喝饮料，抽烟，吃食物和化妆等，不得在实验室会客；

5.7. 实验室用品（包括工作服）不得用作其他用途；不可将私人用品和无关用品带入实验室；

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喀什地区第二人民医院艾滋病初筛实验室技术规范喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-3 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 5 页共 26 页 HIV初筛实验室管理制度 5.8. 工作时，要戴手套，穿工作服，操作时手套破损应立即丢弃，洗手并戴上新手套； 5.9. 不要用戴手套的手触摸暴露皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等；

5.10.尽量避免使用尖锐物品和器具；宜用不易破碎材料制品；禁止用口吸任何物品； 5.11. 工作认真负责。严格执行本实验室的质量管理控制程序规则；做好室间质评和室内质控工作；保证检测结果准确无误，杜绝差错事故的发生；

5.12. 工作结束后，要对工作台面消毒，如用消毒液清洁后要干燥20分钟以上；操作时要有标本，检测试剂外溅时，应及时消毒；平时要保持环境整洁；

5.13. 工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作服，用肥皂和流动水洗手； 5.14. 遇到意外事故，应立即处理并报告上级，妥善及时处置。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-3 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 6 页共26 页 HIV实验室生物安全防护制度 HIV实验室生物安全防护制度

一、操作注意事项

1、进行HIV操作或有可能接触血液或含有血液的体液时，须戴手套。 2、一旦手套污染就应将其丢掉，洗手并载上新手套。 3、不要用戴手套的手摸暴露的皮肤、眼睛和鼻子。 4、不要戴着手套离开工作的场所或在实验室周围走动。

5、在受到任何污染或工作结束后，立即用肥皂和水洗手，如手套破裂应取下手套后用肥皂和水先手。

6、在实验室内要穿大衣、工作服，离开时脱下留在实验室中。 7、工作时应关闭实验室门，进入，门上应有危险标志。 8、实验室应保持清洁整齐，不要放无关的资料和设备。 9、工作结束后，要对操作台消毒。

10、尽量避免使用针头等锐器，使用过的锐器放在不被刺穿的容器内，不要将针头从针管上退下或重新装上。

11、禁止用口吸任何物质。

12、一切操作程序以尽量避免喷雾、滴漏、外溅或外溢等情况的发生为准。 13、实验室内不得吃喝、吸烟、不得存放食品和个人用品，不得使用化妆品。二、溢出和事故

1、溢出发生时先用吸水材料把其覆盖，把消毒剂倒在周围，然后倒在吸水材料上，十分钟后，用吸水材料将溶液擦净，再用消毒液擦一遍现场，处理时戴手套，并避免直接接触溢出物，扫除碎破璃和塑料品。

2、针刺、切割伤和样品溅出污染皮肤，立即用肥皂和水反复冲洗，尽量让伤口流血。

3、所有事故应立即报告实验室领导，写出书面记录备案，进行适当的医学评价、

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监测和治疗。

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-3 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 7 页共 26 页 HIV实验室生物安全防护制度三、污染材料和垃圾处理

1、反复使用的器械，消毒之前须放在防刺穿的金属或塑料容器内，消毒和清洗时必须戴手套。

2、污染的白大衣应放在单独的容器内消毒并清洗，末污染的衣物也洗涤。 3、一次性使用的器械应放在防刺穿的金属或塑料容器内，所有污染物最好在工作区用高压蒸气煮沸或化学方法消毒，也可将之放入防漏容器内并盖好，运至处理地立即消毒或焚烧。

4、实验室所用一次性等废弃物专人送至高压或使用其它方法消毒。四、对工作人员的卫生和医学监测

1、开始从事HIV工作之前进行临床检测和本底血清取样。

2、如与污染物有非肠道或粘膜接触，应对医用材料进行鉴定，有条件时作病毒或抗体试验，如呈HIV抗体、病毒或抗原阳性，或无条件检验，对接触者12周内出现的急性发烧、皮疹或淋巴结病，必须报告，并做出医学评价，如阳性则应于6周后复查并在6个月内定期复查。

3、工作人员患病和缺勤须坚持登记，工作人员的HIV检测结果保密

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-3 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 8 页共 26 页 HIV样品接收、登记和处理 HIV样品接收、登记和处理

1．目的

确保HIV样品安全有效地到达实验室。 2．适用范围

本SOP适用于HIV实验室安全地接收样品。 3．职责

HIV检测人员负责本SOP的执行，由室负责人监督执行。 4．步骤

4.1 HIV样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。

4.2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。

4.3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。 4.4 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。 4.5 接收样品时应填写样品接收单。

4.6 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（1 周）内进行检测的样品可存放于2-8℃

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-3 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 9 页共 26 页 HIV抗体检测筛查实验室保密制度 HIV抗体检测筛查实验室保密制度

1. 目的:检测人员做好保密工作

2. 适用范围:HIV处筛实验室检测过程和结果

3. 职责：HIV检测人员负责本SOP的执行，由室负责人负责监督执行 4. 要有专人负责妥善保存各种实验记录，感染者档案，不得擅自修改和销毁；严格遵守保密制度，未经有关部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。

5. 初筛检测的阳性结果不是最终结果，应及时做进一步确认，不能出具HIV抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。

6. 经确认实验室确认的阳性结果，应报告当地卫生防疫和卫生形状部门，对阳性者告知检测结果时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。

7. 所确认阳性HIV标本，包括在实验室留存的标本，应送省级HIV抗体确认中

心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得擅自处理。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 10页共 26 页 HIV抗体检测筛查实验室废弃物品消毒处理sop HIV抗体检测筛查实验室废弃物品消毒处理sop

1. 目的：防止试验后废弃物污染环境 2. 适用范围：适用于HIV试验后废弃物 3. 安全操作指南

消毒隔离过程中要严格注意自身保护和防止污染。

1. 血液标本置于合适容器内，加盖盖紧后运送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要

用消毒液消毒。也可将血样置于有盖的塑料管内，外面套上塑料袋，封口，连同送检单一并运送，有血液外溢时，立即用消毒液消毒；

2. 各种试剂和化学品均应贴有标签，放置于合适的位置，实验台上不放置不必要的物品。

任何测试用的样品和试剂不宜置于桌面或架子的边沿，以防滑落打破，污染环境。一旦污染，先在污染区外周围倒入消毒液，逐渐向中心消毒处理；

3. 实验室所有垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于专门污物袋内，经焚烧或有效

消毒处理后丢弃，污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤；

4. 所有用过的实验用品，尤其是血样管和血液标本先在实验室内消毒，再移出清洗，待消

毒后再用；

5. 所有尖锐物品应置于不宜刺破的容器内，消毒后用合适的方法处理；常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒法相同。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 11 页共 26 页实验室意外和事故处理实验室意外和事故处理

1 意外和事故

1.1 意外是指发生了未导致个人伤害偶然发生的危险，但也可能已经发生了伤害。 1.2 事故是指发生了人身伤害。意外和事故都可被分为小型的和重大的。

1.3 小型意外：少量潜在传染性物质漏到椅子上，常用于这种情况的有效处理措施是消毒污染处。

1.4 重大意外：任何情况下，如果怀疑有严重性的意外，都将被视为重要的，实验室必须被清空，锁上，并且实验室管理者要请教安全专家，听从他们的意见。 2 意外和事故的紧急处理措施

发生意外事故时，应立即进行紧急处理，并报告实验室负责人。

2.1 皮肤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。

2.2 皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。

2.3 粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。 2.4 衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。

2.5 污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。

2.6 低温蒸汽甲醛气体消毒

2.6.1 由于甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消毒。 2.6.2 如果实验室一旦发生了重大泼溅事故，应按严重情况处理，并采取以下措施：（1）从污染处疏散人员，但要防止污染扩散；（2）控制污染——锁门并防止进一步进入；

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（3）通知实验室主管领导、安全负责人等，以便查清情况，确定消毒处理的程序；（4）如果认为合适，可进行生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛气体消毒，但生物安全柜和/或实验室必须有可靠的密闭性能，人员必须完全离开。【生物安全柜：25ml

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 12 页共 26 页实验室意外和事故处理和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6h，最好过夜。实验室：和水的体积根据实验室大小而定】。具体操作可按说明书执行。（5）发生溢出后应离开房间约30 分钟。穿防护服，被溅的地方用经消毒剂浸泡的吸水物质覆盖；消毒剂起作用10－15 分钟后清理该地方。移走吸水性物质，用消毒剂冲洗该地方。

3 意外和事故登记、报告和检测

3.1 重大意外和事故必须进行登记，内容包括： 3.1.1 意外和，事故发生的时间、地点及详细经过。

3.1.2 处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。 3.1.3 随访检测的日期、项目和结果。 3.2 意外和事故的报告和检测

3.2.1 发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测HIV抗体，暴露后4 周、8 周、12 周、6 个月要定期检测。

3.2.2 发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 13 页共 26 页艾滋病的职业暴露后预防艾滋病的职业暴露后预防

2.1 急救处理

全国艾滋病检测技术规范

2.1.1 刺激出血：职业暴露的紧急处理，只要情况允许，应实行急救。如皮肤有伤口，应当反复轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液。

2.1.2 肥皂和清水冲洗伤口或沾污的皮肤。如果是粘膜暴露，应用生理盐水（或清水）反复冲洗。

2.1.3 受伤部位的消毒与包扎：伤口应用消毒液（如75%酒精、2000mg/L 次氯酸钠、0.2%0.5%过氧乙酸、0.5%碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。

2.1.4 由于暴露后有无采取急救措施对职业暴露后HIV 感染有一定影响，故应尽量为受伤者寻找医疗机构，以求正确护理伤口和暴露后急救处理。

2.1.5 可介绍已发生职业暴露的人员到艾滋病防治机构进一步咨询和处理。 2.2 暴露级别（Exposure Code）的评估，分为1、2、3 级。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 14页共 26 页艾滋病的职业暴露后预防

确定HIV 暴露源头严重程度，分为轻度、重度和不明

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根据暴露级别和暴露源病毒载量水平预防性用药的推荐处理方案

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 15 页共 26 页艾滋病实验室质量控制SOP 艾滋病实验室质量控制SOP

1. 目的：建立艾滋病实验室质量控制,保证HIV实验室检验结果的准确性。 2．适用范围：HIV实验室所有样品初筛和复查的质量控制。 3. HIV检测人员负责本SOP的执行，综合科负责监督执行 4 质量控制（QC）

4.1 质控血清的制备和保存（以ELISA 试验检测HIV 抗体为例）

在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。

内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基

础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。

外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由

实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2--3 倍为宜。

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4.1 外部对照质控血清的使用

每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。 4.1.4 外部对照质控物的质量要求

质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（cv＜20%＝，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA 反应的防腐剂。 4.2 质控图的建立及应用（以ELISA 试验检测HIV 抗体为例）

最常用的质控图是Levey-Jennings 质控图，使用累计和技术或趋势分析技术的图形可提供系统偏移和漂移的状况。 4.2.1 建立质控图参数

外部对照质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20 个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做5 个批次的检测，每个批次中不少于4 个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到20 批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 17 页共 26 页艾滋病实验室质量控制SOP 4.2.1.1 算术平均值（）：代表一组S/CO 值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20 次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO 值结果计算出平均值。

4.2.1.2 标准差(s)：是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清S/CO 值均值有关的预期范围。一组S/CO 值的标准差以s 表示。

4.2.1.3 变异系数(cv)：是反映各次S/CO 值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。

4.2.1.4 控制限：由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。例如12S 质控规则的控制限为外部对照S/CO 平均值加减2 个标准差；13S 质控规则的控制限为外部对照S/CO 平均值加减3 个标准差。 4.2.2 绘制质控图

质控图是把检测数据与已确定的（计算出的）“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每次试验质控血清的测定值。质控图的绘制步骤：

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4.2.2.1 在常规条件下，对同一批血清连续测定20 次（天）或以上，获得一组S/CO 值，求均数( )和标准差(s), 超出2s 或3s 的数据不应删除。

4.2.2.2 将均值( )和标准差(s)分别在质控框架图中标示出来。以S/CO 值作纵座标(Y 轴)，每一次(天)试验作横座标(x 轴)，绘制质控图。

4.2.2.3 从第21 次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。

4.2.3 质控规则及使用

实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前许多质控规则已被采用，常用的是12S 和13S 规则。

4.2.3.1 告警（12S）：当外部对照的S/CO 值超出x +2s 范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S 做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。

4.2.3.2 失控（13S）：当外部对照的S/CO 值超出x +3s 范围时，系统处于失控状态，本次

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 18 页共 26 页艾滋病实验室质量控制SOP 实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。

4.2.3.3 位移：连续几次（3～5 次）外部对照S/CO 值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。

4.2.3.4 趋势：连续几次（5～7 次）外部对照S/CO 值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。

质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。其要点为：

出现一次2s 范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。

出现下列情况时，应暂停检测查找原因：出现一次3s 范围的变化、连续两次出现同一方向

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2s 范围的变化、连续四次出现同一方向的1s 范围的变化、连续10 次结果都在1s 范围内，但落在均值线的同一侧。 4.2.4 质控图的分析及失控处理

实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。

当质控已有计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。 4.2.5 绘制和分析质控图的要点

4.2.5.1 要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO 比值绘制质控图。对同一批质控物连续测定得到20 个数据，求均值( )和标准差(s), 超出2s 或3s 的数据不应删除。

4.2.5.2 由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。 4.2.5.3 建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。

4.2.5.4 发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 18 页共 26 页艾滋病实验室质量控制SOP 测报告。

4.2.5.5 使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数(cv)小于20％，表示外部对照处于稳定状态。

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文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 19页共 26 页喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）检测操作程序人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）检测操作程序

1.目的：指导人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）的检测，保证结果的准确、可靠。 2.适用范围：北京万泰科技有限公司的人类免疫缺陷病毒抗体试剂盒。 3.实验方法

酶联免疫吸附试验（ELISA）。 4.实验原理

本试剂盒采用双抗原夹心ELISA方法检测血清或血浆中人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体。预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV（1+2型），然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中HIV抗体的存在与否。 5.标本采集

5.1采集前病人的准备：受检者应空腹

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5.2标本种类：血清或血浆

5.3 标本要求采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温下放置不超过4小时，分离血清备用。

5.4 标本运输：密封，室温运输。

5.5标本拒收标准：污染，标本量不足，严重溶血或脂血标本不宜做此项检测。 6.试剂组成

1.HIV微孔反应板 2. HIV酶标记抗原 3. HIV阳性对照 4. HIV阴性对照 5.显色剂 A 6.显色剂B 7.终止液 8.封片

9.浓缩洗涤液（用前以蒸馏水作20倍稀释，如有晶体应充分溶解） 7.实验仪器

anthos24200型洗板机

普朗DNM-9602G型酶标仪

8.操作步骤

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 20 页共 26 页人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）操作程序 1. 标本准备：收集病人及体检者的全血，待血完全收缩后离心，检测前认真查对（查编号、姓名、床号、住院号、检验目的）。

2 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

3．编号：将微孔条放平在框架上，按顺序编号。每孔加入等测标本血清100ul，每版应

设阴性对照3孔，阳性对照I型，II型2孔，空白对照1孔。 4 加样：分别在相对应孔中加入待测样品或阴，阳性对照100ul 5 温育：用封版膜封板膜后置37ºC ±1℃温育30+2分钟.

6 洗涤小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干. 7 加酶每孔加如酶标试剂100ul，空白孔除外. 8 温育操作同5 9 洗涤操作同6

10显色每孔加显色剂A液、B液各50ul，轻轻振荡混匀混匀，避光显色15分钟。

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11 测定每孔加终止液50ul，轻轻振荡混匀，设定酶标仪波长于450nm处（建议使用双波长检测，可不设空白对照），测定各孔A值. 9.质量控制

每次试验用含2NCU/mlHIV的质控血清同步检测，以S/CO值绘制指控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期，储藏温度，试验温度是否正常，操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。 10.结果判断

CUT OFF值

CO=阳性对照平均值*0.1+阴性对照平均值，当S/CO值≥1时判为阳性，否则为阴性， S为标本OD值。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算，>0.1时应重新试验。正常情况下阳性对照孔OD值≥0.5 11.参考值阴性 12.临床意义

在血清中H I V 抗体的存在表明可能有人类免疫缺陷病毒感染。

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 21页共 26 页人类免疫缺陷病毒抗体（乳胶层析法）操作程序人类免疫缺陷病毒抗体（乳胶层析法）

1 操作程序目的

用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体中的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。 2. 适用范围

艾康生物技术有限公司的人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒。 3. 实验方法乳胶层析法 4 实验原理

本品系用特异性重组HIV1/2抗原gp41和gp36及兔抗HIV1/2多克隆抗体包被纤维素膜，配以红色乳胶标记重组HIV1/2抗原gp41和gp36及其他试剂组成，应用双抗原夹心反应原理， 5.标本采集

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5.1采集前病人的准备：受检者应空腹 5.2标本种类：血清或血浆

5.3 标本要求采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温下放置不超过4小时，分离血清备用。

5.4 标本运输：密封，室温运输。

5.5标本拒收标准：污染，标本量不足，严重溶血或脂血标本不宜做此项检测。 6 试剂组成

a) 试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒。 b) 试剂生产厂家：艾康生物技术有限公司 c) 包装规格：40人份测试/包装袋

d) 试剂盒组成：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（乳胶层析法）40人份一次性塑料吸管40人份使用说明书1份 7 操作步骤

a) 将诊断试剂置于干净平坦的台面上，用塑料吸管吸取1滴待测标本于加样孔S中，随

喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 22 页共 26 页人类免疫缺陷病毒抗体（乳胶层析法）操作程序

b) 后再加入1滴缓冲液。

c) 等待红色条带的出现，在15分钟是读取测试结果。 8 结果判断

阳性（+）：两条红色条带出现。一条带位于测试区内（T），另一条带位于质控区内（C）. 阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区内（T）无红色条带出现。无效：质控区（C）未出现红色条带。 9 质量控制

阴性对照显示为阴性，阳性对照显示为阳性。 10 干扰和交叉反应

其他体液或混合样品可干扰反应，不可用EDTA抗凝的全血血浆。 11 生物参考区间

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 23页共 26 页 ELISA标准操作要点正常人为阴性

12 患者检验结果的可报告区间

阴性，阳性。 13 临床意义

检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。

ELISA标准操作要点

1.正确的操作： 1.标本采集：

⑴避免溶血：红细胞溶解时释放具有过氧化酶活性以HRP为标记的ELISA测定中可增加

非特异性显色。

⑵避免污染：细菌污染时可能导致抗原抗体分解而产生非特异性干扰。

（3）质控品不宜反复冻融：会使Ab的效价跃落，测Ab的血清标本需保存作多次检测，宜

少量分装冻存。

（4）冻融血清溶解后充分混匀后测定，因冻结溶解后，蛋白质浓缩，分布不均影响检测。 2.试剂的准备：

（1）从冰箱中取出试剂待温度与室温平衡后使用（不用部分及时放回冰箱）。（2）洗液的配制所用蒸馏水应保证质量。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 24页共 26 页 ELISA标准操作要点（3）不能使用过期的试剂盒，不同批号的试剂不可混用。 3.加样：

加样的准确性是减少误差的先决条件。

1.冷藏标本与试剂盒反应板应置室温30分钟平衡后测定与使用。

2.加样时应加在反应孔底部，避免加在孔壁上，并注意不可溅出，不可产生气泡。 3.加样要准确按规定量加入相应孔。

4.一个样品使用一个加样头，吸头必须与加样器配套使用避免发生交叉污染。 5.加样不易过快，否则致吸量少，排出不完全。 4.加试剂：

(1).滴加前应将滴瓶倒置数次充分混匀,弃去前两滴，以弃去可能干结浓缩滴瓶口的液

体。

(2).滴加时应将滴瓶垂直，用力均匀，注意勿使试剂溅出或滴在孔壁上。 5.混匀：加入样品试剂要充分混匀置振荡器振荡5-10秒，勿使板内液体溅出。

6. 温育：

Ag、Ab的完成需要有一定的温度、时间这一保温过程称为-温育。

ELISA属固相免疫测定, Ag、Ab的结合只在固相表面发生。以Ab包被的夹心法为例：加入板孔中的标本，其中的Ag并不是都有均等的和固相Ab结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的Ag直接与Ab接触发生反应，其余部分的Ag则需经扩散才能与固相接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经较长时间才能达到反应的终点。在其后加入酶标记Ab与固相Ag的结合也同样如此。这就是为什么ELISA反应总是需要一定时间和温度。 6.1.温育常采用的温度是37oC，也是大多数Ag、Ab结合的最适温度。注意：温箱温度是否符合试剂盒的要求。 6.2. 严格按照说明书的要求控制温育时间。

6.3. 温育时，一般采用水浴，将板置于水浴箱中，反应板底应直接接触水面，确保温度平衡。

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喀什第二人民医院检验科免疫室作业指导书主题内容文件编号：JYZX-4 版本/修订号：B/0 生效日期：2010-01-01 第 25页共 26 页 ELISA标准操作要点为避免蒸发，反应板应严格封板，用封条将板封好或盖好，防止蒸气水滴入板孔内。 6.4. 温箱：反应板应放在温盒内，要选用传热性良好的材料。温盒应先预热至规定温度。注意：

反应板不宜叠放，以保证各板温度迅速平衡。

按规定时间要准确，准确定时，同时取放。为保证这一点，一人操作时，一次不宜多于两块板同时测定。 7.洗涤：自动洗涤自动洗涤

需设置合适的仪器参数（见洗板机操作规范） .拍板时，板面向下垂直用力，在干净吸水纸上拍干。 8.显色

显色：是ELISA反应中最后一步温育反应步骤，此时酶催化无色的底物生成有色的产物。

• 注意： 1.加入显色剂后，一定要在规定的时间内读取结果。（在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔随时间廷长而呈色加强）.

2. 终止液的加入应准确，因关系到酶标仪读取吸光度值。（酶标仪吸光度值，读取是通过液体的厚度来测定的，因此每孔中加入的量不同会影响吸光度值。 9.比色：

⑴比色前用洁净的吸水纸拭干板底附着液体。 ⑵将板正确放入酶标仪中以450nm读取吸光度值。 10.结果判断

不宜用目视判断结果，肉眼很难辫别弱阳性反应与阴性对照的显色差异，用酶标仪测

定吸光值，这样可以得到客观的数据。

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附表

HIV抗体复检化验单

秘密

编号：

送检单位送检标本姓名现住址国籍或民族初筛试验性别年龄送检日期送检人群户籍所在地既往病史职业年月日复检试验第一次检测日期检测方法 26

第二次此文件版权属地区第二人民医院检验科

喀什地区第二人民医院艾滋病初筛实验室技术规范试剂厂家批号有效期空白 ELISA法 OD值审核者阴性对照均值阳性对照临界值送检标本结果检测者送检单位（公章）电话邮编备注：本表全部由送检单位填写此文件版权属地区第二人民医院检验科 27

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