siRNA敲减REG Iα对结直肠癌细胞生物学行为和化疗敏感性的影
响
目的:通过验证REG Iα在结直肠癌细胞株中的表达,筛选出表达最高的两株细胞,构建敲减REG Iα后的结直肠癌细胞系。研究siRNA敲减REG Iα对结直肠癌细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡及迁移能力以及对5-Fu敏感性的影响,为结直肠癌治疗提供新的依据。
方法:使用Q-PCR方法检测SW480、HCT 116、LOVO、HT-29与HIEC细胞株中REG Iα的表达,筛选出REG Iα表达量较高的两株结直肠癌细胞,然后通过siRNA敲减两株结直肠癌细胞的REG Iα表达,Q-PCR验证敲减效率。将两株细胞各分为siRNA组、NC组(阴性对照组)、control组(空白对照组),使用CCK-8法分析各组细胞对5-Fu的敏感性。
再根据是否存在5-Fu处理,将上述分组细分为:siRNA组、NC组、control组、siRNA组+5-Fu、NC组+5-Fu、5-Fu组;流式细胞仪测定各组细胞凋亡和细胞周期,流式EdU检测各组细胞增殖,用Transwell检测各组细胞的迁移能力,Western blot实验分析各组细胞中Cyclin D1/CDK4和Bax/Bcl-2的蛋白水平。选用GraphPad Prism5和SPSS 21.0软件进行数据统计分析。
结果:在SW480、HCT 116、LOVO、HT-29与HIEC五株细胞中,REG Iα在HCT 116与LOVO细胞株中的表达量最高(P<0.01),Q-PCR验证与NC组、control组相比,siRNA组的REG Iα表达量显著下降(P<0.01)。敲减REG Iα促进了细胞周期阻滞与细胞凋亡(P<0.05),也抑制了其细胞增殖和迁移,而这种趋势在5-Fu处理下更加明显(P<0.05)。
siRNA敲减REG Iα后,Cyclin D1、CDK4与Bcl-2蛋白水平下降,Bax蛋白水平升高,经5-Fu处理后,该表现更为显著(P<0.05)。敲减REG Iα后,结直肠癌细胞对5-Fu的敏感
性明显增强(P<0.05)。
结论:研究证实siRNA敲减HCT 116与LOVO细胞株中REG Iα的表达,能抑制结直肠癌细胞株的增殖、迁移能力,促进细胞周期阻滞与细胞凋亡,并能增加对5-Fu的化疗敏感性,可能为后期结直肠癌患者的治疗提供新的靶点和更多策略。
