一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用[发明专利]

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 CN 110105331 A(43)申请公布日 2019.08.09

(21)申请号 2019105191.8(22)申请日 2019.06.17

(71)申请人 常熟理工学院

地址 215500 江苏省苏州市常熟市南三环

路99号(72)发明人 郝新宇　任静奥　李言　刘晓意　

杨高文　李巧云　(74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所

(普通合伙) 32204

代理人 王艳(51)Int.Cl.

C07D 401/04(2006.01)A61P 35/00(2006.01)

权利要求书2页 说明书7页 附图2页

(54)发明名称

一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用

(57)摘要

本发明公开了一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物，所述邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物化学结构式为Ca(2-pytzipa)2(H2O)4。本发明还公开了邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的制备方法及其应用。本发明还公开了一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒及其制备方法和应用。本发明公开的制备方法和设计合成的配体在国内外报道较少或未见报道，新颖性强，奠定了基于此类配体合成的配合物研究的意义与价值。合成的配合物不仅结构新颖，更在抗宫颈癌等方面展示了显著的作用，可作为具有潜在应用价值的新型抗癌药物进行深入研究。

CN 110105331 ACN 110105331 A

权　利　要　求　书

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1.一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物，所述邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物化学结构式为Ca(2-pytzipa)2(H2O)4，其特征在于，其X射线衍射主要数据：分子组成 C18H24CaN10O8，分子量 548.55，晶胞参数 a=18.068(4)(Å)，b= 10.012(2)(Å)，c= 13.796(3)(Å)，β= 104.194(2)(°)，α=γ=90.00(°)，配合物主要的键长(Å)：Ca(1)–O(3)=2.3445(10)，Ca(1)–O(4)=2.4460(11)，Ca(1)–N(3)=2.6514(11)，Ca(1)–N(5)=2.7453(11)。

2.根据权利要求1所述的邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物，其特征在于，所述邻吡啶

四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物结构经X-射线单晶衍射数据解析为单核结构。

3.权利要求1或2所述的一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）设计与合成邻吡啶四唑异丙酸配体；2）金属离子Ca(Ⅱ)与邻吡啶四唑异丙酸配体构筑配合物。4.根据权利要求3所述的一种邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征

在于，所述步骤1）设计与合成邻吡啶四唑异丙酸配体的具体步骤如下：将邻吡啶四唑加入丙酮以使固体溶解，缓慢加入三乙胺，将反应在60℃~90℃介质的条件下进行，搅拌，直至反应物溶解；逐滴加入溴异丙酸乙酯，此过程要保持温度稳定，使反应进行30-48h；反应结束后，用旋转蒸发仪将溶剂蒸发至干燥，水温为50℃，得到固体；向固体中加入乙醇并摇动，产生白色沉淀，过滤，然后用乙醇洗涤沉淀，得到白色固体，即得到产物邻吡啶四唑异丙酸乙酯，通过水解和酸化邻吡啶四唑异丙酸乙酯，水解温度70~90℃，水解时间3-6h，水解前用KOH调pH值9-11，水解后溶液用浓盐酸酸化到pH值为1-4，得到邻吡啶四唑异丙酸。

5.根据权利要求3所述的一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2）金属离子Ca(Ⅱ)与邻吡啶四唑异丙酸配体构筑配合物的具体步骤如下：将步骤1）合成的配体邻吡啶四唑异丙酸溶于蒸馏水中，然后用KOH将pH调节至5-6得到配体溶液；用Ca(NO3)2·4H2O和蒸馏水的混合溶液加入配体溶液中，在聚四氟乙烯密封的不锈钢容器中加热至130°C反应24-48h，然后将溶液冷却至室温，过滤，滤液中长出无色块状晶体Ca(2-pytzipa)2(H2O)4，为目标产物邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物。

6.根据权利要求4所述的一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，所述步骤1）合成邻吡啶四唑异丙酸配体的反应原料的摩尔比为邻吡啶四唑:溴异丙酸乙酯:三乙胺=1:1.2~2.0:1.2~2.0，加入适量丙酮溶剂，在60℃~90℃介质的条件下进行反应，反应时间30-48h；水解温度70~90℃，水解时间3-6h，水解前用KOH调pH值9-11，水解后溶液用浓盐酸酸化到pH值为1-4。

7.根据权利要求5所述的一种邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征

在于，合成邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的反应原料的摩尔比为Ca(NO3)2·4H2O：邻吡啶四唑异丙酸配体=1：2~4， pH调节至5-6，130°C反应24-48h。

8.一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒，其特征在于，所述邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒包括权利要求1或2所述的邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物。

9.权利要求7所述的邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括权利要求3或4或5的步骤1）和步骤2），还包括步骤3）配合物纳米颗粒的制备：具体包括以下步骤：将PEG-5000和步骤2）得到的配合物溶解在THF中，超声10-20分钟得到样品，然后在搅拌下将样品注入水中，之后将溶液用氮气吹以除去THF和氧气，得到

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权　利　要　求　书

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配合物的纳米颗粒。

10.权利要求1或2所述的邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物、权利要求8所述的邻吡啶四唑异丙酸- Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒在制备抗宫颈癌细胞活性药物方面的应用。

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一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用

技术领域

[0001]本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002]近年来，配位化合物在生物，医学，化工，材料等领域研究与应用受到科技工作者极大地青睐。寻找合适的配体与不同的金属离子进行配合物的合成，已经成为当前配位化学工作者的主要任务，近年来含氮杂环配体越来越受到大家的重视，其中以四唑类配体的应用最为明显。四唑是一个含有四个N原子一个C原子的五元环，高氮含量让它具有丰富的配位点，并且配位的方式也极为灵活，该种配体可以与金属离子配位形成结构新颖多种多样的配合物。

[0003]目前在我国，癌症已成为疾病死因之首，且发病率和死亡率还在攀升，对公众健康造成巨大威胁。据统计，中国2015年约有430万人确诊癌症；280万人死于癌症(平均每天7500人)。然而，治疗癌症的主要手段依旧是放疗和化疗，因此开发高效且有选择性的抗癌药物依旧是当前治疗癌症最热门的一个研究方向。在众多的药物中，有许多已经被开发过的光敏剂，比如第一代光敏剂卟啉和第二代光敏剂酞菁，它们都被实验证明是用作于诊断治疗的良好的药物。配位化合物作为一类被广泛应用于癌症治疗的材料已经被设计并制备。在众多的配合物中，Ca(Ⅱ)配合物被广泛的用于癌症治疗，因为它们很好的生物相容性。但是，基于四氮唑羧酸配合物的抗癌活性的研究相对来说比较少。[0004]本发明设计合成了邻吡啶四唑异丙酸作为配体，这种配体从结构上讲具有刚柔并济、配位点多等特点，是构筑新颖配合物的卓越材料。根据文献查询，设计合成的邻吡啶四唑异丙酸Ca(Ⅱ)构建的金属有机骨架材料在国内外未见报道，另外选用人体宫颈癌细胞(HeLa)作为研究对象，探究配合物的抗癌活性。这是一项开创性的发明，具有重要的研究价值。

发明内容

[0005]发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供了一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物。

[0006]本发明还要解决的技术问题是提供了一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的制备方法和应用。

[0007]本发明还要解决的技术问题是提供了一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒及其制备方法和应用。[0008]技术方案：为了解决上述技术问题，本发明采取了如下的技术方案：一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物，所述邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物化学结构式为Ca(2-pytzipa)2(H2O)4，其X射线衍射主要数据：分子组成C18H24CaN10O8，分子量548.55，晶胞参数a＝18.068(4)

b＝10.012(2)

c＝13.796(3)

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β＝104.194(2)(°)，a＝γ＝90.00

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(°)，配合物主要的键长Ca(1)-O(3)＝2.3445(10)，Ca(1)-O(4)＝2.4460(11)，Ca(1)-N

(3)＝2.6514(11)，Ca(1)-N(5)＝2.7453(11)。配合物结构经X-射线单晶衍射数据解析为单核结构(见图1)，主要结构数据见表1和表2。

[0009]本发明内容还包括一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的制备方法，包括以下步骤：

[0010]1)设计与合成邻吡啶四唑异丙酸配体；

[0011]2)金属离子Ca(Ⅱ)与邻吡啶四唑异丙酸配体构筑配合物。[0012]其中，所述步骤1)设计与合成邻吡啶四唑异丙酸配体的具体步骤如下：将邻吡啶四唑加入丙酮以使固体溶解，缓慢加入三乙胺，将反应在60℃～90℃介质的条件下进行，搅拌，直至反应物溶解；逐滴加入溴异丙酸乙酯，此过程要保持温度稳定，使反应进行24-48h；反应结束后，用旋转蒸发仪将溶剂蒸发至干燥，水温为50℃，得到固体；向固体中加入乙醇并摇动，产生白色沉淀，过滤，然后用乙醇洗涤沉淀，得到白色固体，即得到产物邻吡啶四唑异丙酸乙酯，通过水解和酸化邻吡啶四唑异丙酸乙酯，水解温度70～90℃，水解时间3-6h，水解前用KOH调pH值9-11，水解后溶液用浓盐酸酸化到pH值为1-4，得到邻吡啶四唑异丙酸。[0013]其中，所述步骤2)金属离子Ca(Ⅱ)与邻吡啶四唑异丙酸配体构筑配合物的具体步骤如下：将步骤1)合成的配体邻吡啶四唑异丙酸溶于蒸馏水中，然后用0.2mol/L的KOH将pH调节至5-6得到配体溶液；用Ca(NO3)2·4H2O和蒸馏水的混合溶液加入配体溶液中，在聚四氟乙烯密封的不锈钢容器中加热至130℃反应24-48h，然后将溶液冷却至室温，过滤，滤液中长出无色块状晶体Ca(2-pytzipa)2(H2O)4，为目标产物邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物。

[0014]其中，所述步骤1)合成邻吡啶四唑异丙酸配体的反应原料的摩尔比为邻吡啶四唑：溴异丙酸乙酯∶三乙胺＝1∶1.2～2.0∶1.2～2.0，加入适量丙酮溶剂，在60℃～90℃介质的条件下进行反应，反应时间30-48h；水解温度70～90℃，水解时间3-6h，水解前用KOH调pH值9-11，水解后溶液用浓盐酸酸化到pH值为1-4。[0015]其中，所述合成邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的反应原料的摩尔比为Ca(NO3)2·4H2O：邻吡啶四唑异丙酸配体＝1∶2～4，蒸馏水体积是4-8ml，pH调节至5-6，130℃反应24-48h。

[0016]本发明内容还包括一种邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒，所述邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒包括所述的邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物。[0017]本发明内容还包括邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒的制备方法，所述制备方法包括步骤1)和步骤2)，还包括步骤3)配合物纳米颗粒的制备：具体包括以下步骤：将PEG-5000和步骤2)得到的配合物溶解在THF中，超声10-20分钟得到样品，然后在搅拌下将样品注入水中，之后将溶液用氮气吹以除去THF和氧气，得到配合物的纳米颗粒。[0018]本发明内容还包括所述的邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物、所述的邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物纳米颗粒在制备抗宫颈癌细胞活性药物方面的应用。[0019]有益效果：相对于现有技术，本发明具有以下优点：[0020]1、本发明公开的方法设计合成的配体在国内外报道较少或未见报道，新颖性强，奠定了基于此类配体合成的配合物研究的意义与价值。[0021]2、本发明原料成本低，本发明公开的制备方法简易清晰。

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3、本发明合成的配合物不仅结构新颖，更在抗宫颈癌等方面展示了显著的作用，

在X-射线单晶衍射的表征下显示结构是单核；选用人体宫颈癌细胞(HeLa)作为研究对象，测试了配合物的体外抗癌活性，结果表明它们具有较低的半致死量(17-48.12μg/mL)，显示了对HeLa细胞有较高的毒性，同时划痕实验显示了配合物能够有效地抑制HeLa细胞的迁移。

[0023]4、本发明可作为具有潜在应用价值的新型抗癌药物进行深入研究，对新型四氮唑羧酸类有机化合物的拓展、新型配合物物种的创新以及这类配合物新功能的开发都具有积极而重要的意义。

附图说明

[0024]图1邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物晶体结构图；[0025]图2不同浓度下宫颈癌细胞的存活率(蓝色为配体，绿色为配合物)；[0026]图3台盼蓝实验结果示意图(左图为空白组，右图为给药组)；[0027]图4宫颈癌细胞迁移实验结果图(上两图为空白组，下两图为给药组)。

具体实施方式

[0028]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会权利要求书中所详细描述的本发明。

[0029]实施例1邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及配合物的纳米颗粒的制备[0030]将0.06mol(8.6g)的邻吡啶四唑(2-pytz)加入到250mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入150mL丙酮以使固体溶解，用标有刻度的塑料滴管将0.09mol(约10mL)三乙胺缓慢滴加到烧瓶中。将反应在80℃到90℃条件下进行，搅拌，直至反应物溶解。[0031]称量0.09mol(约6mL)溴异丙酸乙酯，逐滴加入到烧瓶，此过程要保持温度稳定(80～90℃)，使反应进行48h。反应结束后，取出三口烧瓶，用旋转蒸发仪将溶剂蒸发至干燥，使水温为50℃，得到固体。

[0032]把固体加入烧杯中，向烧杯中加入约50mL乙醇并摇动4至5次，产生白色沉淀，过滤，然后用乙醇洗涤沉淀3至4次，得到白色固体，即得到产物邻吡啶四唑异丙酸乙酯。将得到的邻吡啶四唑异丙酸乙酯固体溶于100mL水和50mL乙醇的混合物中，并向其中加入5mol/L KOH溶液以将pH调节至11，使用90℃水浴加热进行水解，水解时间为6h，最后使用旋转蒸发仪旋干溶液，得到白色固体。

[0033]将得到的白色固体用蒸馏水完全溶解，并逐滴加入浓盐酸以将滤液的pH调节至1。此时，烧杯壁上出现了明亮的固体，此固体即为目标产物。然后将烧杯放入冰箱中冷冻，2小时后拿出过滤，收集固体并干燥。获得目标产物邻吡啶四唑异丙酸(H2-pytzipa)12.17g，转化率(以邻吡啶四唑为基准)为86％。[0034]将配体H2-pytzipa(0.1mmol，0.0219g)溶于2mL蒸馏水中，然后用0.2mol/L的KOH将pH调节至6得到配体溶液。用Ca(NO3)2·4H2O(0.1mmol，0.0236g)和2mL蒸馏水的混合溶液加入配体中，在25mL聚四氟乙烯密封的不锈钢容器中加热至130℃反应48h。然后将溶液冷却至室温，过滤，滤液中长出无色块状晶体[Ca(2-pytzipa)2(H2O)4]0.0205g即为配合物。

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将5毫克PEG-5000分别和5毫克配合物溶解在1mLTHF(四氢呋喃)中，超声20分钟得

到样品。然后在搅拌下将200μL样品注入10mL水中形成待处理溶液。之后将溶液用氮气吹20分钟以除去THF和可能的氧气，得到配合物的纳米颗粒。

[0036]实施例2邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及配合物的纳米颗粒的制备[0037]将0.06mol(8.6g)的邻吡啶四唑(2-pytz)加入到250mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入150mL丙酮以使固体溶解，用标有刻度的塑料滴管将0.09mol(约10mL)三乙胺缓慢滴加到烧瓶中。将反应在70℃到80℃介质的条件下进行，搅拌，直至反应物溶解。[0038]取0.072mol(约6mL)溴异丙酸乙酯，逐滴加入到烧瓶，此过程要保持温度稳定(70～80℃)，使反应进行38h。反应结束后，取出三口烧瓶，用旋转蒸发仪将溶剂蒸发至干燥，使水温为50℃，得到固体。

[0039]把固体加入烧杯中，向烧杯中加入约50mL乙醇并摇动4至5次，产生白色沉淀，过滤，然后用乙醇洗涤沉淀3至4次，得到白色固体，即得到产物邻吡啶四唑异丙酸乙酯。将得到的邻吡啶四唑异丙酸乙酯固体溶于100mL水和50mL乙醇的混合物中，并向其中加入5mol/L KOH溶液以将pH调节至10，使用80℃水浴加热进行水解，水解时间为4.5h，最后使用旋转蒸发仪旋干溶液，得到白色固体。

[0040]将得到的白色固体用蒸馏水完全溶解，并逐滴加入浓盐酸以将滤液的pH调节至2。此时，烧杯壁上出现了明亮的固体，此固体即为目标产物。然后将烧杯放入冰箱中冷冻，1小时后拿出过滤，收集固体并干燥。获得目标产物邻吡啶四唑异丙酸(H2-pytzipa)10.62g，转化率(以邻吡啶四唑为基准)为75％。[0041]将配体H2-pytzipa(0.15mmol，0.0329g)溶于3mL蒸馏水中，然后用0.2mol/L的KOH将pH调节至5得到配体溶液。用Ca(NO3)2·4H2O(0.15mmol，0.0354g)和3mL蒸馏水的混合溶液加入配体中，在25mL聚四氟乙烯密封的不锈钢容器中加热至130℃反应36h。然后将溶液冷却至室温，过滤，滤液中长出无色块状晶体[Ca(2-pytzipa)2(H2O)4]0.0294g即为配合物。[0042]将5毫克PEG-5000分别和5毫克配合物溶解在1mL THF(四氢呋喃)中，超声20分钟得到样品。然后在搅拌下将200μL样品注入10mL水中形成待处理溶液。之后将溶液用氮气吹20分钟以除去THF和可能的氧气，得到配合物的纳米颗粒。

[0043]实施例3邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物及配合物的纳米颗粒的制备[0044]将0.06mol(8.6g)的邻吡啶四唑(2-pytz)加入到250mL三口烧瓶中，并向三口烧瓶中加入150mL丙酮以使固体溶解，用标有刻度的塑料滴管将0.09mol(约10mL)三乙胺缓慢滴加到烧瓶中。将反应在60℃到70℃介质的条件下进行，搅拌，直至反应物溶解。[0045]称量0.12mol(约6mL)溴异丙酸乙酯，逐滴加入到烧瓶，此过程要保持温度稳定，使反应进行30h。反应结束后，取出三口烧瓶，用旋转蒸发仪将溶剂蒸发至干燥，使水温为50℃，得到固体。

[0046]把固体加入烧杯中，向烧杯中加入约50mL乙醇并摇动4至5次，产生白色沉淀，过滤，然后用乙醇洗涤沉淀3至4次，得到白色固体，即得到产物邻吡啶四唑异丙酸乙酯。将得到的邻吡啶四唑异丙酸乙酯固体溶于100mL水和50mL乙醇的混合物中，并向其中加入5mol/L KOH溶液以将pH调节至9，使用70℃水浴加热进行水解，水解时间为3h，最后使用旋转蒸发仪旋干溶液，得到白色固体。

[0047]将得到的白色固体用蒸馏水完全溶解，并逐滴加入浓盐酸以将滤液的pH调节至4。

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此时，烧杯壁上出现了明亮的固体，此固体即为目标产物。然后将烧杯放入冰箱中冷冻，1小时后拿出过滤，收集固体并干燥。获得目标产物邻吡啶四唑异丙酸(H2-pytzipa)7.78g，转化率(以邻吡啶四唑为基准)为55％。[0048]将配体H2-pytzipa(0.2mmol，0.0438g)溶于4mL蒸馏水中，然后用0.2mol/L的KOH将pH调节至5即得配体溶液。用Ca(NO3)2·4H2O(0.2mmol，0.0472g)和4mL蒸馏水的混合溶液加入配体中，在25mL聚四氟乙烯密封的不锈钢容器中加热至130℃反应24h。然后将溶液冷却至室温，过滤，滤液中长出无色块状晶体[Ca(2-pytzipa)2(H2O)4]0.0392g即为配合物。[0049]将5毫克PEG-5000分别和5毫克配合物溶解在1mLTHF(四氢呋喃)中，超声20分钟得到样品。然后在搅拌下将200μL样品注入10mL水中形成待处理溶液。之后将溶液用氮气吹20分钟以除去THF和可能的氧气，得到配合物的纳米颗粒。[0050]实验例1 MTT实验[0051]1、培养宫颈癌细胞：HeLa细胞购自细胞生物学和生物化学研究所，将它们用含10％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s modified Eag1e’s medium)高糖培养基在5％CO2、37℃环境下培养。[0052]2、进行MTT实验：把实施例1合成的配合物纳米颗粒分散在去离子水中，然后用DMEM溶液把它稀释成不同的浓度。邻吡啶四唑异丙酸作为对照。将细胞转移至96孔板中培养，待细胞浓度生长至80％左右给药干扰24h之后用5mg/mL，20μL的3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)加到每一个孔里面在同样的条件下培养4小时。4h后弃去母液，然后用200μL DMSO(二甲亚枫)溶解紫晶(存活细胞与MTT形成紫晶)。在酶标仪上测取吸光度值并取平均值，通过以下公式来计算细胞存活率：存活率％＝[(给药组的平均吸光度/空白组的平均吸光度)×100％]/n，n为重复实验的组数。图2为不同浓度下宫颈癌细胞的存活率(蓝色为邻吡啶四唑异丙酸配体，绿色为配合物纳米颗粒)当邻吡啶四唑异丙酸浓度为0、10、20、30、40、50μg/mL时，相应宫颈癌细胞的存活率分别为100.0％、96.3％、94.6％、94.5％、87.5％、88.4％。当邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒的浓度为0、10、20、30、40、50μg/mL时，相应宫颈癌细胞的存活率分别为100.0％、94.2％、.2％、72.6％、43.3％、28.5％。[0053]实验例2台盼蓝实验[0054]台盼蓝(Trypan Blue，分子组成为C34H24N6O14S4Na4)可以选择和死细胞结合，将细胞染成蓝色。将实验例1步骤1中培养的HeLa细胞用配合物纳米颗粒培养24小时，弃去母液并用PBS(磷酸缓冲液)清洗三次。然后将台盼蓝溶液(1μg/mL，200μL)加入这些细胞中染六分钟，之后在显微镜下记录图像(见图3，左图未加邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒，右图加入邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒)。观察到右图有大面积的蓝色现象，表明邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒能杀死宫颈癌细胞。[0055]实验例3宫颈癌细胞迁移实验[0056]用划痕实验来研究配合物纳米粒子对细胞迁移的抑制作用。在12孔板中培养将实验例1步骤1中的HeLa细胞，待细胞浓度约为80％时用移液的头人为地制造一道通道。加入相应半致死量浓度的纳米颗粒培育24小时。用显微镜观察细胞是否能够移动或者填满通道。在0h和24h时间点用显微镜拍摄记录图像(见图4)。空白组为未加邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒，给药组为加入邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒；反

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应24h后，观察到空白组的宫颈癌细胞显著向通道迁移，给药组宫颈癌细胞迁移不明显，表明邻吡啶四唑异丙酸-Ca(Ⅱ)配合物的纳米颗粒能够抑制宫颈癌细胞的迁移。[0057]实验例4 X-射线的单晶衍射

[0058]

用配备石墨单色镜Mo-Kα辐射Rigaku SCX CCD衍射仪收集单晶X-

射线晶体数据，使用ω扫描技术收集了强度数据(见表1和表2)，并用Crystal-Clear程序还原强度数据，并进行了吸收校正(多扫描)。用洛伦兹和极化效应校正反射数据。用直接法求解，用SHELXTL对F2进行全矩阵最小二乘法精修。所有的非氢原子都是从傅里叶变换定位，并从各向异性上进行了精修。所有氢原子均被精修为各向同性，其各向同性振动参数与非氢原子有关。

[0059]表1配合物主要的晶体数据

[0060]

9

CN 110105331 A[0061]

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[0062][0063][00]

备注见表1

表2配合物主要的键长

和键角(°)

对称码：A：l-x；l-y，l-z

[0066]以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

[0065]

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CN 110105331 A

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图1

图2

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CN 110105331 A

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图3

图4

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