十大功劳叶药材的质量标准提高研究
目的：提高十大功劳叶药材的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对药材样品进行定性鉴别。测定药材样品水分、灰分、醇浸出物。采用高效液相色谱法测定药材样品中盐酸小檗碱的含量，色谱柱为WondaSil C18，流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（25 ∶ 75，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为2 nm，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。结果：药材样品TLC图斑点清晰，分离度好。药材样品水分为3.92%～7.03%，总灰分为3.65%～6.95%，酸不溶性灰分为0.05%～1.03%，醇浸出物为10.87%～33.14%。盐酸小檗碱检测进样量线性范围为0.183～0.915 μg（r=0.999 9）；定量限、檢测限分别为0.143、0.095 μg；精密度、稳定性、重复性试验的RSD5 000；基线分离良好，分离度>1.5，详见图2。
2.5.6 线性关系考察 精密量取“2.5.2”项下对照品贮备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成系列对照品溶液。精密量取上述系列对照品溶液各10 μL，按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以盐酸小檗碱进样量（x，μg）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得盐酸小檗碱回归方程y=43 421x+11 613（r=0.999 9）。结果表明，盐酸小檗碱检测进样量线性范围为0.183～0.915 μg。
2.5.7 定量限与检测限考察 精密量取“2.5.2”项下对照品溶液适量，倍比稀释，并按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，当信噪比为10 ∶ 1时，得定量限；当信噪比为3 ∶ 1时，得检测限。结果显示，盐酸小檗碱定量限、检测限分别为0.143、0.095 μg。
2.5.8 精密度试验 取“2.5.2”项下对照品溶液适量，按“2.5.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.00%（n=6），表明仪器精密度良好。2.5.9 稳定性试验 取“2.5.3”项下供试品溶液（编号：S-4）适量，分别于室温下放置0、2、4、6、8、10 h时按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.68%（n=6），表明供试品溶液室温放置10 h内基本稳定。
2.5.10 重复性试验 精密称取药材样品（编号：S-4）适量，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，共6份，再按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算药材样品含量。结果，盐酸小檗碱含量平均值为0.9%，RSD为1.62%（n=6），表明本方法重复性良好。
2.5.11 加样回收率试验 取已知含量药材样品（编号：S-4）6份，每份80 mg，分别加入一定量的盐酸小檗碱对照品溶液，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表3。
2.5.12 药材样品含量测定 取13批药材样品各适量，分别按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.5.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算药材样
品含量。结果显示，药材样品含量为0.21%～2.25%，平均值为1.48%。拟定十大功劳叶药材中盐酸小檗碱含量不得低于1.0%。
3 讨论
笔者参考相关文献[7-8]，对TLC鉴别中供试品溶液的制备方法进行了考察，比较了甲醇浸渍24 h、甲醇超声15 min、乙醇回流3 h 3种提取方法。结果，以甲醇浸渍和超声方法提取时，盐酸药根碱斑点不清晰，而乙醇回流提取3 h后，待测成分斑点清晰，杂质干扰小，故选择后者进行提取。同时，笔者比较了甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨溶液（6 ∶ 3 ∶ 1.5 ∶ 1.5 ∶ 0.5，V/V/V/V/V）[8]、正丁醇-乙酸-水（7 ∶ 1 ∶ 2，V/V/V）[9]、氯仿-甲醇-氨溶液（9 ∶ 1 ∶ 0.5，V/V/V）[10]、苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨溶液（6 ∶ 3 ∶ 2 ∶ 2 ∶ 0.3，V/V/V/V/V）[11]4种展开剂，发现待测成分在甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨溶液（6 ∶ 3 ∶ 1.5 ∶ 1.5 ∶ 0.5，V/V/V/V/V）中展开良好、斑点清晰、无边缘效应，因此以其作为TLC的展开剂。
十大功劳叶药材药效成分以生物碱类为主[7]，故按“烘干法”测定水分。生物碱类成分易溶于乙醇，控制醇浸出物含量，对确保药材样品质量稳定具有重要意义。笔者在醇浸出物测定时比较了冷浸、热浸2种方法，发现热浸法优于冷浸法；同时，考察了不同体积分数乙醇的提取率，结果显示50%乙醇溶液提取率最高。检测十大功劳叶药材样品总灰分和酸不溶性灰分含量，可控制药材样品中泥土、砂石等外来无机物的量，对确保药材样品净度具有重要意义。
在HPLC含量测定中，通过二极管阵列检测器扫描，笔者发现盐酸小檗碱在229、2、345 nm处均有吸收峰，而在229 nm处峰面积虽然最大，但接近末端吸收，易受到杂峰的干扰，故选择2 nm作为检测波长。在供试品溶液制备中，笔者比较了回流、超声2种提取方法，发现后者较前者待测成分含量更高，故采用超声提取。而超声提取45、60 min效果相当，从保证提取率和节约时间两方面综合考虑，将超声提取时间确定为45 min。在流动相选择过程中，笔者尝试过不同系统及比例[8，12]，发现以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（25 ∶ 75，V/V）为流动相时，色谱峰分离度和峰形均较好。
综上所述，所建标准可用于十大功劳叶药材的质量控制。
参考文献
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