《中国医学前沿杂志（电子版）》２０１６年第８卷第１１期 ・综述・１５ ＤＯｌ：１０．１２０３７／ＹＸＱＹ．２０１６．１１－０５ 微滴式数字ＰＣＲ技术进展 王琦，范颖（首都医科大学附属北京地坛医院肝病中心，北京 １０００１５） １９８５年，美国科学家Ｋａｒｙ Ｍｕｌｌｉｓ发明了聚合 ２技术发展历史 酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）。ＰＣＲ １９９９年，美国约翰・霍普金斯大学Ｌｕｄｗｉｇ中 是现代生命科学研究中最常规的实验方法之一，其 心的Ｋｉｎｚｌｅｒ和Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ等口 通过纯手工操作将 发展经历了３个主要阶段：①操作烦琐、只适用 直肠癌患者粪便样品基因组ＤＮＡ稀释并等分至 于定性研究的琼脂糖电泳ＰＣＲ；②实时荧光定量 ３８４孔微量滴定板的各个孔中，然后通过ＰＣＲ扩 ＰＣＲ，也是目前应用最广泛的ＰＣＲ技术；③数字 增，结果在超过１００个孔中发现了基因组ＤＮＡ， ＰＣＲ（ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ，ｄＰＣＲ），属于第３代ＰＣＲ，最 其中４个显示出ＫＡＳ基因突变。这一研究被认为 早出现于１９９９年，目前正逐渐被广大科研工作者 是ｄＰＣＲ理念的开端之作。此后，研究人员开始从 熟知与接受。本文将从ｄＰＣＲ的原理、发展及应用 操作简化及检测便捷等方面对系统进行了优化，并 等角度进行综述。 开发出了下列３种样品分散模式： １技术核心原理 （１）磁珠模式：主要包括以９６孔板、３８４孔 ｄＰＣＲ核心原理如下：将含有核酸分子的反应 板甚至１５３６孔板作为分散反应的载体模式，以及 体系处理为纳升级的微滴，使每个微滴含或不含待 利用“小珠、乳浊液、扩增、磁性”为主要操作流 检靶分子，且每个微滴都作为一个的ＰＣＲ反 程的磁珠乳液扩增法（Ｂｅａｄｓ，Ｅｍｕｌｓｉｏｎ，Ａｍｐｌｉｆ－ 应器，经ＰＣＲ扩增后采用微滴阅读仪逐个对微滴 ｉｃａｔｉｏｎ，Ｍａｇｎｅｔｉｃｓ，ＢＥＡＭｉｎｇ）。但上述两种方法 进行检测，并以终点信号的有或无作为判断标准（有 无论在分散程度和数据群体的体量方面均无法达到 荧光信号的微滴判读为“１”，无荧光信号的微滴判 更加精细的要求。 读为“０”）。最后，根据泊松分布原理及阳性微滴 （２）微滴模式：微滴模式是随着纳米制造技术 的比例，利用分析软件计算待检靶分子的浓度或拷 （ｎａｎｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、微流体技术（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ），特 贝数， 从而获得最终结果。 别是二代测序技术发展起来的新模式，因此ｄＰＣＲ 域值循环数（ｃｙｃｌｅ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ，Ｃｔ）是实时荧 通常也被称为“微滴式数字ＰＣＲ（ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇａｔｉｌ 光定量ＰＣＲ的重要概念，是指每个反应管内的荧 ＰＣＲ，ｄｄＰＣＲ）”。 光信号到达设定的域值时所经历的循环数。对实时 ＱｕａｎｔａＬｉｆｅ公司最早开发了ｄｄＰＣＲ平台。２０１１年， 荧光定量ＰＣＲ和ｄＰＣＲ的原理进行比较后可以发 Ｂｉｏ．Ｒａｄ公司收购了ＱｕａｎｔａＬｉｆｅ公司后更名为ＱＸＩＯ０ ＴＭ 现，ｄＰＣＲ通过统计学原理直接给出靶序列的起始 微滴式数字ＰＣＲ仪【３］。２０１３年，升级为ＱＸ２００。 浓度，其结果不再依赖于Ｃｔ值［１］，可以避免实时 ２０１２年，ＲａｉｎＤａｎｃｅ公司推出了Ｒａｉｎｄｒｏｐ型号设备， 荧光定量ＰＣＲ在低拷贝靶分子、细微模板浓度差 这一设备可以将每个标准反应体系分割为包含１００ 异中灵敏度和精确度相对较差的缺陷。 万至１０００万个皮升级别微滴的反应乳液，从而获 基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（８１５００４３９）；首都医科大学基础．临床科研合作基金（１５ＪＬ８０） 通讯作者：范颖Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｏｆｙ５５＠１６３．ｃｏｒｎ ｆ １６・综述・ 《中国医学前沿杂志（电子版）》２０１６年第８卷第１１期 得超高的微滴数目。 开展了一项研究，证实非小细胞肺癌ＥＧＦＲ．ＴＫＩ 耐药患者ｃｔＤＮＡ中的ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ突变是一种不 良结局的预测因子¨３】。Ｉｓｏｂｅ等㈣也证实，通过 ｄＰＣＲ可以高效检出肺腺癌患者癌组织、复发肿瘤 组织以及血清游离ＤＮＡ中的Ｔ７９０Ｍ突变，且复 发灶Ｔ７９０Ｍ突变阳性患者原发灶突变频率远高于 阴性患者。 （３）芯片模式：１９９７年，Ｋａｌｉｎｉｎａ等＿４ 应用纳 升级芯片进行了单克隆模板ＰＣＲ扩增。２０１３年，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ公司推出了最新型号的ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏＴＭ ３Ｄ数字ＰＣＲ系统。该系统可以使样本均匀分配至 ２万个完全单独隔离的反应孔中，能够在尽可能简 化操作步骤的同时有效防止交叉污染，并有效避免 了微滴式系统可能面临的管路堵塞问题『５］。 Ｒｅｉｄ等『１ｑ采用ｄＰＣＲ研究了恶性黑素瘤患者 ３数字ＰＣＲ的主要应用 ｄｄＰＣＲ具有诸多优点ｌ６］，近年关于以ｄｄＰＣＲ 为核心技术平台的报道越来越多，本文将对其中几 个主要领域的应用情况进行介绍。 ３．１ 突变位点检测（ｍｕｔａｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ） 随着个 体化治疗理念的深入推进，突变基因检测及突变 位点癌细胞比例分析越来越受到个体化治疗研究 人员的重视和关注。研究表明，循环肿瘤ＤＮＡ （ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ＤＮＡ，ｃｔＤＮＡ）是实体瘤治疗效 果和预后评估的重要监测指标之一，而高筛查能 力、多分子检测则是ｃｔＤＮＡ应用于临床需要迫切 解决的关键技术问题 。２０１３年，Ｈｉｎｄｓｏｎ等 在Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄ发表文章，首次将ｄｄＰＣＲ和实 时荧光定量ＰＣＲ在分析微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）表达 水平的重复性进行了系统的统计学比较，证明了 ｄｄＰＣＲ技术可于不同情况下准确、可重复性地定 量检测血浆和血清ｍｉＲＮＡｓ，并为ｍｉＲＮＡｓ及其他 核酸用于循环生物标志物的检测提供了更多依据。 表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃ． ｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）的Ｔ７９０Ｍ突变被认为是ＥＧＦＲ．酪氨 酸激酶抑制剂（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＴＫＩ）耐药 性产生的重要原因。吉非替尼（如易瑞沙）和厄洛 替尼（如Ｔａｒｃｅｖａ）是ＴＫＩ的典型代表。多项研究 表明，ｄｄＰＣＲ在ＥＧＦＲ相关突变检测方面具有显著 优势［１０－１３］。Ｗａｔａｎａｂｅ等 “ 利用ｄＰＣＲ建立了一种具 有超高检测敏感性的ＥＧＦＲ突变检测方法。Ｏｘｎａｒｄ 等［ １对９例接受厄洛替尼一线治疗的非小细胞肺 癌患者的血浆ｃｔＤＮＡ进行了检测，结果显示，６ 例患者中检出Ｔ７９０Ｍ突变；随着治疗周期的延长， 突变浓度呈递增趋势，且在时间上较影像学确认 的肿瘤恶化提前了１６周。Ｚｈｅｎｇ等［１ 利用ｄｄＰＣＲ 循环肿瘤细胞中ＢＲＡＦ基因 Ｄ 和Ｖ６ＯＯＫ突变， 结果表明，ｄＰＣＲ在灵敏度上高出实时荧光定量 ＰＣＲ ２００倍，检测下限为０．０００５％，表明ｄＰＣＲ高 灵敏度检测的强大优势。 伊马替尼是一种ＢＣＲ．ＡＢＬ酪氨酸激酶抑制剂， 可用于ＢＣＲ－ＡＢＬ阳性慢性粒细胞白血病的分子靶 向治疗。Ｍｏｒｉ等 研究发现，利用ｄＰＣＲ可以非 常有效地预测伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病的复 发率。 ３．２基因表达分析长期以来，如何对多等位基 因拷贝数变异（ｍｕｌｔｉ．ａｌｌｅｌｉｃ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｖａｒｉａｔｉｏｎ， ｍＣＮＶ）进行准确的遗传学分析是困扰科研人员的 难题之一。２０１５年，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ报道了Ｈａｎｄ— ｓａｋｅｒ等【１踟在这一领域的突破性进展，他们通过 全基因组测序和ｄｄＰＣＲ证实，人与人之间９０％己 观察到的基因拷贝数差异均属于ｍＣＮＶ。这一研 究也从技术层面证实，ｄｄＰＣＲ是一个非常有效的、 可用于ｍＣＮＶ精确分析的技术平台。 因样本中含有大量ＰＣＲ反应的抑制物及无 法找到合适的定量标准物质等原因，石蜡包埋组 织、血液、粪便、食品、土壤等样本的基因分析往 往较困难。而ｄＰＣＲ可以完美解决上述问题［１９－２ｔ１。 Ｄｉｎｇｌｅ等 系统比较了十二烷基硫酸钠（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ ｓａｌｔ，ＳＤＳ）、乙二胺四乙酸二 钠及肝素等常见ＰＣＲ抑制物对ｄｄＰＣＲ和实时荧光 定量ＰＣＲ的影响，结果显示，ｄｄＰＣＲ对ＳＤＳ和肝 素的耐受程度远高于实时荧光定量ＰＣＲ。姜羽等［２ 、 Ｗｉｔｗｅｒ等 、Ｍｏｒｉｓｓｅｔ等［２５１研究均证实，ｄｄＰＣＲ 的灵敏度、重复性均优于实时荧光定量ＰＣＲ，具 有实时荧光定量ＰＣＲ无可比拟的优势。 Ｆｅｒｒａｃｉｎ等 利用Ｂｉｏ Ｒａｄ公司的ＱＸ２００ＴＭｄｄＰＣＲ 《中国医学前沿杂志（电子版）》２０１６年第８卷第１１期 ・综述・１７ 系统，确定了多种癌症患者的血浆和血清样本中关 键ｍｉＲＮＡ分子的绝对水平，他们通过比较癌症患 者和健康个体的数据证实ｍｉＲ－１８１ａ．５ｐ有望成为乳 腺癌的标志物。 ３＿３ 高通量测序结果的验证与深入 高通量测序 技术与ｄｄＰＣＲ的联合表现在下述两方面： （１）高通量测序技术中样品制备流程和针对低 含量核酸分子的成单分子测序对ｄｄＰＣＲ系统革新 具有重要的推动作用，这也是ｄｄＰＣＲ技术不断创 新发展的重要基础。 （２）数据量大、可拓展性强是高通量测序的主 要特点，但这也造成后续结果分析困难、验证难度 大以及假阳性率高的缺陷。ｄＰＣＲ对二代测序结果 的高性能验证和分析可以为后续研究的准确性奠定 坚实基础。ＢｏｅＲｇｅｒ等 首先通过高通量测序技 术对人１７号染色体的１７ｑ２ｌ＿３１区域进行了深入分 析，之后采用ｄＰＣＲ对结果进行了大样本量的验证， 结果显示，ｄＰＣＲ的结果与高通量测序数据高度吻 合，相关性＞９９％。目前，ｄＰＣＲ与高通量测序、“阵 列”联用来进行ＣＮＶ位点发现及确认已经逐步成 为一种标准化流程【３］。 ３．４病原学研究ｄｄＰＣＲ由于其绝对定量的特点 在病毒的核酸检测中也有很好的应用前景。 “功能性治愈”是人类免疫缺陷病毒／艾滋病 （ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）领域非常重要的临床概念。２０１３年， Ｒｉｃｈｍａｎ等报道了一项具有里程碑意义的研究成果： ＨＩＶ感染患儿出生３Ｏ小时后便开始接受组合式抗 逆转录病毒治疗，２９天后患儿ＨＩＶ常规检测结果 呈阴性；随后，应用ｄＰＣＲ技术分别于出生后第 ２４个月和第２６个月对患儿血液中ＨＩＶ ＲＮＡ水平 进行了反复检测，结果仅能发现部分ＨＩＶ ＲＮＡ片 段，未检测到具有复制能力的ＨＩＶ。在该项研究中， ｄＰＣＲ发挥了关键作用。目前，ｄＰＣＲ应用于ＨＩＶ 相关核酸检测的报道越来越多，重点应用的仍然是 其灵敏度和绝对定量两方面［２８－３０］。 乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉＳ Ｂ ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）慢性 感染是导致原发性肝癌发生的重要原因。ＨＢＶ共 价闭合环状ＤＮＡ（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｃｌｏｓｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｒ ＤＮＡ， ｃｃｃＤＮＡ）仅存在于被感染的肝细胞核内，拷贝数 极低，被认为是ＨＢＶ感染慢性化及抗病毒治疗停 止后复发的最主要原因，也是目前ＨＢＶ药物研究 的核心靶点之一。２０１５年，Ｍｕ等ｐ 采用基于绝 对定量的ｄＰＣＲ对ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡ进行了检测，结 果发现，ｄＰＣＲ的检测灵敏度可达单拷贝水平；基 于ｄＰＣＲ的核酸检测能够对ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡ实现灵 敏并精确的定量。此外，由于ＨＢＶ表面抗原突变 和低病毒载量等原因，原发性肝癌组织标本中的 ＨＢＶ相关研究较为困难。Ｈｕａｎｇ等［３ 利用ｄＰＣＲ 检测了固定后石蜡包埋的肝癌组织标本 中的ＨＢＶ特征，结果证实，ｄＰＣＲ能够高效地检 出此类标本中的ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡ，其线性范围良好， 具有很好的研究示范价值。 魏飞力等［３ 评价了ｄＰＣＲ在ＨＣＶ ＲＮＡ定量 检测中的应用价值，特别是其对低拷贝ＨＣＶ ＲＮＡ 的定量检测能力，结果提示，ｄＰＣＲ在线性范围、 精密度、准确度和检测灵敏度方面均表现良好。目 前临床检测中的ＨＣＶ ＲＮＡ定量试剂可以直接应用 于ｄＰＣＲ中，但其检测结果，特别是极低检测下限 在临床中的实际应用价值尚需进一步研究。 ３．５ 无创产前诊断 无创ＤＮＡ产前检测（ｎｏｎ— ｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ｔｅｓｔｉｎｇ，ＮＩＰＴ）是一项非常具有应 用前景，但目前仍处于尝试阶段的产科诊断平台。 通常所谓的ＤＮＡ产前检测技术是指通过高通量测 序技术对母体外周血浆中的游离胎儿ＤＮＡ（ｃｅｌｌ—ｆｒｅｅ ｆｅｔａｌ ＤＮＡ，ｃｆｍＮＡ）进行测序，再通过测序结果 的生物信息分析获得胎儿遗传信息的方法。一般认 为，ｃｆｆＤＮＡ是胎盘细胞凋亡的结果，最早可在妊 娠５周时检测到，其浓度随着孕周增加而增加［３ 。 由于ｃｆｆＤＮＡ数量极少，能够在多少拷贝的 水平顺利实现ＤＮＡ或ＲＮＡ分子稳定检出是影响 其临床应用前景的关键性技术问题。传统的基因 组ＤＮＡ大多采用商品化的核酸提取试剂盒进行。 ２０１３年，Ｈｏｌｍｂｅｒｇ等口 比较了ｋｏｎｎｉ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ 公司的ＴｒｕＴｉｐ核酸提取技术和ＱＩＡＧＥＮ公司的 Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ试剂盒对于ｃｆｆＤＮＡ提 取的效果，结果显示，ＴｒｕＴｉｐ试剂盒对片段化的 ｃｆｆＤＮＡ提取率较ＱＩＡＧＥＮＯ试剂盒提高了约８７％， 且定量ＰＣＲ结果与ｄｄＰＣＲ结果相关性良好。这一 １８・综述・ 《中国医学前沿杂志（电子版）》２０１６年第８卷第１１期 结果也为ｄｄＰＣＲ用于产前诊断提供了成功的范例。 目前，还有更多的类似研究和应用正在开展＿３ 。 位于５ｑ１３的ＳＭＮ１基因和ＳＭＮ２基因是脊髓 性肌萎缩（ｓｐｉｎａｌ ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ，ＳＭＡ）的致病 基因，其中ＳＭＮ２基因拷贝数的准确检测是ＳＭＡ 诊断的重要依据内容。Ｚｈｏｎｇ等 首先成功应用 ｄＰＣＲ技术对ＳＭＡ样本进行了ＳＭＮ２基因拷贝数 的检测。Ｓｔａｂｌｅｙ等【３踟也利用ｄＰＣＲ技术开展了针 对ＳＭＮ１和ＳＭＮ２基因拷贝数的精确检测，结果提 示，该技术可以精确检测０～３拷贝的ＳＭＮ１基因 和０～５拷贝的ＳＭＮ２基因，且变异系数分别仅 为１．６～３．７％和２．１～２．７％，其检测下限和变异 度均远低于实时荧光定量ＰＣＲ技术。Ｔｓｕｉ等『３ ９］应 用ｄＰＣＲ和相对突变剂量方法对血友病关键致病基 因Ｆ８基因或Ｆ９基因杂合性突变携带孕妇进行了 研究，结果提示，ｄＰＣＲ在以血友病为代表的ｘ一 连锁遗传性疾病检测中具有非常好的检测性能。此 外，ｄＰＣＲ在镰状细胞性贫血和２２ｑ１１．２微缺失综 合征等疾病诊断方面的研究尚在不断开展和深入过 程中。 ｄＰＣＲ作为一项新的技术，还有许多问题需要 进一步探讨，包括技术本身以及应用方面。相信随 着应用的深入，ｄｄＰＣＲ技术一定会以更好的性能 在生命科学领域发挥更多、更好的作用。 参考文献 ［１］ Ｗａ￣ｅｎ ＲＭ，Ｇｅｙ ｖａｎ Ｐｉｔｔｉｕｓ ＮＣ，Ｂａｍａｒｄ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅ— ｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｃｏｍｐｌｅｘ ｂｙ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｔｕｂｅｒｃ Ｌｕｎｇ Ｄｉｓ，２００６，１０（７）：８Ｉ８—８２２． 【２］ Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ Ｂ，Ｋｉｎｚｌｅｒ ＫＷ．Ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ｕ ｓ Ａ，１９９９，９６（１６）：９２３６—９２４１． ［３］Ｈｉｎｄｓｏｎ ＢＪ，Ｎｅｓｓ ＫＤ，Ｍａｓｑｕｅｌｉｅｒ ＤＡ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ［Ｊ］．Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ，２０１ ｌ，８３（２２）：８６０４—８６ｌ０． ［４］ Ｋａｌｉｎｉｎａ Ｏ，Ｌｅｂｅｄｅｖａ Ｉ，Ｂｒｏｗｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎａｎｏｌｉｔｅｒ ｓｃａｌｅ ＰＣＲ ｗｉｔｈ ＴａｑＭａｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，１９９７，２５（１Ｏ）： ｌ９９９—２００４． ［５】 Ｍａｒｘ Ｖ Ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ ｅｐｉｇｅｎｏｍｉｃ ｄａｔａ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１５， １２（６）：４９９—５０２． ［６］ 詹成，燕丽，王琳，等．数字ＰＣＲ技术的发展和应用［ＪＪ． 复旦学报（医学版），２０１５，４２（６）：７８６—７８９． ［７］Ｔｈｒｅｓｓ ＫＳ，Ｂｒａｎｔ Ｒ，Ｃａｒｒ ＴＨ，ｅｔ ａ１．ＥＧＦＲ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃｔＤＮＡ ｆｒｏｍ ＮＳＣＬＣ ｐａｔｉｅｎｔ ｐｌａｓｍａ：Ａ ｃｒｏｓｓ－－ｐｌａｔｆｏｒｍ ｃｏｍｐ－－ ａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｔｏ ｓｕｐｐｏｒｔ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｅｖｅｌｏ－ ｐｍｅｎｔ ｏｆＡＺＤ９２９１［Ｊｔ．Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ，２０ｌ５，９０（３）：５０９－５ｌ５． ［８］ Ｏｓｈｉｒｏ Ｃ，Ｋａｇａｒａ Ｎ，Ｎａｏｉ ｅｔ ａ１．ＰＩＫ３ＣＡ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ＤＮＡ ａｒｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｏｆ ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ，２０１５，１５０（２）：２９９・３０７． ［９］ Ｈｉｎｄｓｏｎ ＣＭ，Ｃｈｅｖｉｌｌｅｔ ＪＲ，Ｂｒｉｇｇｓ ＨＡ，ｅｔ ａ１．Ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑｕａｎｔｉｌｆ， ｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ｖｅｒｓｕｓ ａｎａｌｏｇ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ［Ｊ］． Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１３，１０（１０）：１００３ １００５． ［１Ｏ】 Ｚｈａｎｇ ＢＯ Ｘｕ Ｃ Ｓｈａｏ ｔ；ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ａｎｄ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ＥＧＦＲ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ Ｍｅｄ，２０ｔ５，９ｆ４）：１３８３－１３８８． Ｗａｔａｎａｂｅ Ｍ，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ Ｔ，ｌｓａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｕｌｔｒａ—Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ Ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｎｏｎ． Ｓｍａｌｌ Ｃｅｌｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｎ ＥＧＦＲ・Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２Ｏｌ５．２１（１５）：３５５２—３５６０． ［１２】 Ｘｕ Ｑ，Ｚｈｕ Ｂａｉ ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｔｈｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＯｎｔｏＴａｒｇｅｔｓＴｈｅｒ，２０１５ ８：１５３３—１５４１． Ｚｈｅｎｇ Ｄ，Ｙｅ Ｘ，Ｚｈａｎｇ ＭＺ，ｅｔ ａ１．Ｐｌａｓｍａ ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ ｃｔＤＮＡ ｓｔａｔｕｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ＮＳＣＬＣ ｐａｔｉｅｎｔＳ＊ｉｔｈ ａｃｑｕｉｒｅｄ ＥＧＦＲ－ＴＫ１ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．Ｓｃｉ Ｒｅｐ，２０１６， ６：２０９１３． ［１４］ Ｏｘｎ￣ｄ ＧＲ，Ｐａｗｅｌｅｔｚ ＣＰ，Ｋｕａｎｇ ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｄｃｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ＥＧＦＲ—ｍｕｔａｎｔ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｕｓｉｎｇ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｎｅｘｔ・ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌ—ｆｒｅｅ ｐｌａｓｍａ ＤＮＡ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１４，２０（６）：１６９８—１７０５． ［１５］ Ｉｓｏｂｅ Ｋ，Ｈａｔａ Ｔｏｃｈｉｇｉ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ｏｆ ｎａｎｏｆｌｕｉｄｉｃ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ａｒｒａｙｓ ｔｏ ｑｕａｎｔｉｆｙ Ｔ７９０Ｍ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ＥＧＦＲ— ｍｕｔａｎｔ ｌｕｎｇ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ， ２Ｏｌ５，１２（１）：３１－３７． ［１６］ Ｒｅｉｄ ＡＬ，Ｆｒｅｅｍａｎ ＪＢ，Ｍｉｌｌｗａｒｄ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＢＲＡＦ— Ｖ６００Ｅ ａｎｄ Ｖ６００Ｋ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１５，４８（１５）：９９９—１００２． ［１７］ Ｍｏｒｉ Ｓ，Ｖａｇｇｅ Ｅ，ｌｅ ＣＰ，ｅｔ ａ１．Ａｇｅ ａｎｄ ｄＰＣＲ ｃａｎ ｐｒｅｄｉｃｔ ｒｅｌａｐｓｅ ｉｎ ＣＭＬ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｄｉｓｃｏｎｔｉｎｕｅｄ ｉｒｎａｔｉｎｉｂ：ｔｈｅ ＩＳＡＶ Ｓｔｕｄｙ【Ｊ］． Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ，２０１５．９０（１０）：９１０—９１４． ［１８］ Ｈａｎｄｓａｋｅｒ ＲＥ，Ｖａｎ Ｄｏｒｅｎ、‘Ｂｅｒｍａｎ ＪＲ，ｅｔ ａ１．Ｌａｒｇｅ ｍｕｌｔｉ— ａｌｌｅｌｉｃ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，２０１５， ４７（３）：２９６—３０３． ［１９］ Ｔａｄｍｏｒ ＡＤ，Ｏｔｔｅｓｅｎ ＥＡ，Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ ＪＲ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｂｉｎｇ ｉｎｄｉｖｉ— ｄｕａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｖｉｒｕｓｅｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１１，３３３（６０３８）：５８—６２． ［２Ｏ］ Ｓｔｒａｉｎ ＭＣ，Ｌａｄａ ＳＭ，Ｌｕｏｎｇ ｔ ｅｔ ａ１．Ｈｉｇｈｌｙ ｐｒｅｃｉｓｅ ｍｅａｓｕｒ ｅｍｅｎｔ ｏｆＨＩＶ ＤＮＡ ｂｙ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０ｔ３， ８（４）：ｅ５５９４３． ［２１］ Ｋｉｓｅｌｉｎｏｖａ Ｍ，Ｐａｓｔｅｒｎａｋ ＡＯ，Ｄｅ Ｓｐｉｅｇｅｌａｅｒｅ Ｗ ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐ— ａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ａｎｄ ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｏｆｒ ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆｃｅｌｌ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＨＩＶ－１ ＲＮＡ【ＪＪ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ， ２０１４，９（１）：ｅ８５９９９． ［２２］ Ｄｉｎｇｌｅ ＴＣ，Ｓｅｄｌａｋ ＲＨ，Ｃｏｏｋ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｏｆ ｄｒｏｐｌｅｔ— ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ｖｓ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ｔｏ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｓｕｂｓｔ－ ａｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２０１３，５９（１ １）：１６７０—１６７２． ［２３］ 姜羽，胡佳莹，杨立桃．利用微滴数字ＰＣＲ分析转基因生 物外源基因拷贝数ｆＪ１．农业生物技术学报，２０１４，２２（１Ｏ）： ｌ２９８．】３０５． 《中国医学前沿杂志（电子版）》２０１６年第８卷第１１期 ・综述・１９ ［２４］ Ｗｉｔｗｅｒ ＫＷ，ＭｃＡｌｅｘａｎｄｅｒ ＭＡ，Ｑｕｅｅｎ ＳＥ，ｅｔ ａ１．Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ２０１５．３７（１０）：２０６３—２０７３． ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎｄ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ｆｏｒ ｐｌａｎｔ ｍｉＲＮＡｓ ｉｎ ［３２］ Ｈｕａｎｇ ＪＴ，Ｌｉｕ ＹＪ，Ｗａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｘｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｂｌｏｏｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｌｉｔｔｌｅ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｇｅｎｅｒａｌ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｉｎ ｆｏｒｍａｌｉｎ— ｄｉｅｔａｒｙ ｍｉＲＮＡｓ：ｌｉｍｉｔｅｄ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆｒ ｇｅｎｅｒａｌ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｆｉｘｅｄ ｐａｒａｉｆｎ—ｅｍｂｅｄｄｅｄ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ］． ｐｌａｎｔ ｘｅｎｏｍｉＲｓ［Ｊ］．ＲＮＡ Ｂｉｏｌ，２０１３，１０（７）：１０８０—１０８６． Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２０１５，６１（１）：２９０—２９６． ［２５】 Ｍｏｒｉｓｓｅｔ Ｄ，Ｓｔｅｂｉｈ Ｄ，Ｍｉｌａｖｅｃ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ［３３］ 魏飞力，黄彦翔，殷继明，等．微滴式数字ＰＣＲ用于 ｏｆ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｆｅｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈ ｄｒｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．ＰＬｏＳ ＨＣＶＲＮＡ定量检测的评价［Ｊ］．中华检验医学杂志，２０１６， Ｏｎｅ，２０１３，８（５）：ｅ６２５８３． ３９（３）：２２５．２２７． ［２６］ Ｆｅｒｒａｃｉｎ Ｍ，Ｌｕｐｉｎｉ Ｌ，Ｓａｌａｍｏｎ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ａｂｓｏｌｕｔｅ ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ［３４］ 熊丽，，刘思平，等．Ｂ地中海贫血的无创性产前诊断 ｏｆｃｅｌｌ—ｆｒｅｅ ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１５， 研究进展［Ｊ］．中华妇产科杂志，２０１５，５０（６）：４６２．４６５． ６ｆｌ６１：１４５４５—１４５５５． ［３５］ Ｈｏｌｍｂｅｒｇ ＲＣ，Ｇｉｎｄｌｅｓｐｅｒｇｅｒ Ａ，Ｓｔｏｋｅｓ Ｌ ｅｔ ａ１．Ａｋｏｎｎｉ ＴｒｕＴｉｐ ［２７］ Ｂｏｅｔｔｇｅｒ ＬＭ，Ｈａｎｄｓａｋｅｒ ＲＥ，Ｚｏｄｙ ＭＣ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｈａｐｌｏ— ｎａｄ Ｑｉａｇｅｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｔａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＤＮＡ一 ｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｒｅｃｅｎｔ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｈｕｍａｎ １７ｑ２１．３１ ｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］． 一ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ａｎｄ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１３， Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ，２０１２，４４（８）：８８１—８８５． ８（８）：ｅ７３０６８． ［２８］ ｄｅ Ｏｌｉｖｅｉｒａ ＭＦ，Ｇｉａｎｅｌｌａ Ｓ，Ｌｅｔｅｎｄｒｅ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ［３６］ Ｓｃｈｕｌｅｒ Ｅ Ｔｒｏｔｔｅｒ Ｍ，Ｇｅｌｔｍａｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｇｉｔａｌ ｄｒｏｐｌｅｔ ＰＣＲ ｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｅｌｌ—Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ＨＩＶ ＤＮＡ Ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｄｉｓｋ［Ｊ］．Ｌａｂ Ｃｈｉｐ，２０１ ５，１６（１）：２０８—２１６． Ｆｌｕｉｄ ａｎｄ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｂｌｏｏｄ ｂｙ Ｄｒｏｐｌｅｔ Ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．ＰＬｏＳ ［３７］ Ｚｈｏｎｇ Ｑ，Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ Ｓ，Ｋｏｔｓｏｐｏｕｌｏｓ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ Ｏｎｅ，２０１５，１０（１０）：ｅ０１３９５１０． ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ：ｂｒｅａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｏｎｅ ｔａｒｇｅｔ ｐｅｒ ｃｏｌｏｒ ｂａｒｒｉｅｒ ｏｆ ｑｕａｎｔ— ［２９］ Ｂｏｓｍａｎ ＫＪ，Ｎｉｊｈｕｉｓ Ｍ，ｖａｎ Ｈａｍ ＰＭ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆｄｉｇｉｔａｌ ｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｌａｂ Ｃｈｉｐ，２０１１，１１（１３）：２１６７—２１７４： ＰＣＲ ｐｌａｔｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｓｅｍｉ—ｎｅｓｔｅｄ ｑＰＣＲ ａｓ ａ ｔｏｏｌ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ［３８】 Ｓｔａｂｌｅｙ ＤＬ，Ｈａｒｒｉｓ Ａｖｅ，Ｈｏｌｂｒｏ０ｋ Ｊ，ｅｔ ａ１．ＳＭＮ１ ａｎｄ ＳＭＮ２ ｓｉｚｅｏｆｔｈｅＨＩＶ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０１５，５：１３８１１． ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒｓ ｉｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｐｉｎａｌ ［３０】 Ｒｕｅｌｌｅ Ｊ，Ｙｆａｎｔｉｓ Ｄｕｑｕｅｎｎｅ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｕｌｔｒａｓｅ— ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ ａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ａｒｒａｙ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ［Ｊ］．Ｍｏｌ ｎｓｉｔｉｖｅ ｄｉｇｉｔａｌ ｄｒｏｐｌｅｔ ＰＣＲ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ＨＩＶ－２ ｐｌａｓｍａ ＲＮＡ ｑｕａ— Ｇｅｎｅｔ Ｇｅｎｏｍｉｃ Ｍｅｄ，２０１５，３（４）：２４８—２５７． ｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｔ ＡＩＤＳ Ｓｏｃ，２０１４，１７（４ Ｓｕｐｐｌ ３）：１９６７５． ［３９］ Ｔｓｕｉ ＮＢ，Ｋａｄｉｒ ＲＡ，Ｃｈａｎ ＫＣ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ［３１］ ＭｕＤ，Ｙａｎ Ｌ，ＴａｎｇＨ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｑｕａｎｔｉｉｆ－ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ ｂｙ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｃａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｕｒｓ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｏｆｍａｔｅｍａｌ ｐｌａｓｍａ ＤＮＡ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２０１１，１１７（１３）：３６８４—３６９１． ｃｌｏｓｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｒ ＤＮＡ ｂｙ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｒｄｏｐｌｅｔ ｄｉｇｉａｔｌ ｐｏｌｙ－ ｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｌｅｔｔ， 收稿日期：２０１６－０９—２５ －信息窗－ 《中国医学前沿杂志（电子版）》征稿启事 中国医学前沿杂志（电子版） 创刊于２００８年９月，由国家卫生和计划生育委员会主管，人民卫 生出版社主办，集光盘版、纸版、网络版、手机报、微博、微信等多位一体的出版形式，现为月刊， ＩＳＳＮ１６７４—７３７２，ＣＮ １１．９２９８／Ｒ，全国公开发行，邮发代号：８２．１３６，光盘定价：２０元／期，先后被中国 科技核心期刊、 中国学术期刊影响因子年报 统计源期刊、中国核心学术期刊（Ａ）等收录。 据２０１６年版 中国科技期刊引证报告 （扩刊版）显示，我刊２０１５年度扩展影响因子为１．０８８；据 ２０１６年版 中国科技期刊引证报告 （核心版）显示，我刊２０１５年度核心影响因子为Ｏ．６３６。我刊多项期 刊评价指标位居学科前列。 常设栏目：述评、专题笔谈、论著、国际循证指南共识、国内循证指南共识、病例报告、会议纪要、 百家讲坛（视频）等。 主编：霍勇沈琳 编辑部主任：刘兆平 陆明 白桦 征稿栏目：论著 征稿方向：医学各学科 投稿方式：ＷＷＷ．ｙｉｘｕｅｑｉａｎｙａｎ．ｃｎ 微信公众号：ｙｉｘｕｅｑｉａｎｙａｎ１ ３
