复合因子法建立大鼠肝纤维化模型的实验研究

临床经验谈　ＣＨＩＮＥＳＥ　ＣｏＭＭＵＮｆ　ＤｏＣ１ｏＲＳ　复合因子法建立大鼠肝纤维化模型的实验研究　处死实验动物，取肝组织以１０％甲醛固　后实验动物表现进食减少、体重减轻、活　色音图　于洪玲　闰国珍　杨静平　定，标本大小约ｌｃｍ　Ｘ　１ｃｍ　Ｘ　１ｃｍ。常规　动减少，３８只实验鼠除３只因耐受不良　０１４０００包头钢铁公司预防保健中心　石蜡连续切片，分别进行苏木精一伊红　死亡外，存活３５只纳入最终统计，存活率　（ＨＥ）及Ｍａｓｓｏｎ三色染色进行病理观察。　为９２．１％。　包头医学院第一附属医院　ＨＥ染色方法步骤：将处理好的组织　实验病理结果：分别于造模２、４、６周　包钢医院　切片分别依次进行脱蜡、水化、苏木精染　时经病理检查证实获得不同程度的肝纤　色、酸酒精分化、细胞核返蓝、脱水及伊红　维化。肝脏病理组织学检查证实，随着造　摘要　目的：采用复合因子法建立健康　染色等过程，树胶封片，光镜下观察。　模时间的延长，肝纤维化程度逐渐加重。　ＳＤ雄性大鼠肝纤维化模型，探讨复合因　Ｍａｓｓｏｎ三色染色方法步骤：①切片　２周时以肝细胞脂肪变性，气球样变为　子法建立肝纤维化模型的应用价值。方　脱蜡，按常规处理后用清水冲洗。②用　主，并有少量纤维组织沉积，汇管区出现　法：于０用、２周、４周、６周分别对以复合　Ｗｅｉｇｅｒｔ液，Ｒｅｇａｕｄ苏木素染色５分钟。　不同程度的炎症反应，淋巴细胞聚集；４　因子所建立大鼠肝纤维化模型进行肝组　③流水稍洗。④１％盐酸酒精分化。⑤流　周时除肝细胞脂肪变性，气球样变性仍明　织病理检查及血清纤维化指标检查，以病　水冲洗至蓝黑色。⑥丽春红酸性晶红液　显外，胶原纤维沿肝板延伸呈纤维隔状，　理诊断结果为标准，探讨复合因子法建立　染色５分钟。⑦蒸馏水稍洗。⑧１％磷钼　但无完整分界形成；６周时小叶间隔形成　肝纤维化模型的应用价值。结果：以复合　酸水洗溶液处理５分钟。⑨不用水洗，直　完整纤维隔，部分假小叶形成。Ｍａｓｓｏｎ　因子法成功建立了鼠肝纤维化模型，该模　接入苯胺蓝液或光绿液染５分钟。⑩蒸　三色染色显示汇管区纤维组织沉积明显，　型肝组织病理检查与血清纤维化指标检　馏水洗。⑩１％冰醋酸处理１分钟。⑩　汇管区变大，纤维间隔增粗，重度时纤维　查相关性良好。结论：复合因子法建立健　９５％酒精分化，无水酒精脱水。⑩二甲苯　组织向肝小叶内部延伸分隔肝组织，呈现　康ＳＤ雄性大鼠肝纤维化模型成功率较　透明，中性树胶封固。　出早期假小叶的病理结构特征形成。　高，有较高的应用价值。　染色结果：Ｍａｓｓｏｎ染色胶原纤维呈　血清纤维化指标检测结果：大鼠肝纤　肝纤维化动物模型的制作方法较多，　蓝绿色，细胞核呈蓝黑色。ＨＥ染色细胞　维化模型组血清ＨＡ、ＬＮ水平均显著高于　根据不同的实验目的选用的动物和模型　浆、结缔组织等呈不同程度的红色。采用　空白对照组，血清ＨＡ、ＬＮ与大鼠肝纤维　制作方法也不同…。文献报道较多，经　２０００年　西安全国会议通过的纤维化分　化程度有一定正相关。从Ｓ。一　ＨＡ、ＬＮ分　常应用的经典方法为四氯化碳制作肝纤　期分类标准（ｓｎ．　），至少在光学显微镜下　另０为：Ｓｏ：１８１．０±３８．９；７．９±２．９；Ｓｌ：　维化模型法，选择的实验动物主要是小白　显示包括６个以上汇管区，由两位有经验　２４５．０±８１．７；２０．０±５．８；Ｓ２：２７２．７±　鼠或大白鼠。本实验采用复合因子法建　的病理科医生分别观察做出最终纤维化　７７．４；４２．６±７．５；Ｓ３：３６３．０±２６．８；４７．９±　立健康ＳＤ雄性大鼠肝纤维化模型，探讨　诊断。纤维化程度分期诊断标准为：Ｓｏ　２．９；　：４０９．３　４－３１．７；５７．３　４－６．２。　复合因子法建立肝纤维化模型的应用　期：无纤维化；Ｓ．期：汇管区纤维化扩大，　价值。　限局窦周及小叶内纤维化；Ｓ　期：汇管区　讨论　周围纤维化，纤维间隔形成，小叶结构保　本研究揭示，大鼠肝纤维化模型组血　资料与方法　留；Ｓ　期：小叶间隔伴小叶结构紊乱，无　清ＨＡ、ＬＮ水平均显著高于空白对照组。　肝纤维化模型准备：　肝硬化；Ｓ　期：早期肝硬化。　血清肝纤维化指标可在不同程度上反映　实验材料：①实验动物：健康雄性　血清纤维化指标测定：麻醉下行心脏　肝纤维化的进程，但尚无一项指标可反映　Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ大鼠，购白包头医学院　取血５ｍｌ，分离血清后置一４０℃保存待检　肝纤维化的全貌。目前公认的肝纤维化　实验动物中心。②实验试剂：四氯化碳，　测，采用放射免疫法（ＨＡ放射免疫分析　血清学指标为：透明质酸（ＨＡ）、层粘连　９９．９％分析纯；１０％乙醇。　测定盒；ＬＮ放射免疫分析测定盒；均由上　蛋白（ＬＮ），此两项指标联合检测能够反　肝纤维化模型制作：四氯化碳复合肝　海海军医学研究所生物技术中心提供）。　映肝纤维化活动程度，对肝纤维化的发　纤维化模型制备方法：健康清洁级雄性　按各试剂盒说明采用放射免疫分析法，分　生、发展及抗纤维化药物疗效判断均有较　ＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ）大鼠３８只，体质量　别测定血清ＨＡ（单位　ＩＴｌＩ）、ＬＮ（单位　好的参考价值。肝纤维化时，细胞外基质　１５０—２２０ｇ，平均１８０ｇ，随机分５组，根据　ｍＩ）、水平的变化。　的降解产物和参与肝纤维代谢的酶类释　文献报道方法采用复合因子致肝纤维化　统计学分析：所有计量资料均采用平　入血清，血清中这些基质成分可作为肝纤　模型方法，建立鼠肝纤维化模型。　均数±标准差（Ｘ±ｓ）表示并代入统计，　维化的标志物。　造模方法：①以７９．５％纯玉米粉加　应用ＳＰＳＳ１０．０统计软件，不同组分析采　２０％猪油、０．５％胆固醇制成低蛋白高脂　用多组间方差统计分析（Ｆ检验），单因素　参考文献　肪高胆固醇混合饲料喂饲实验大鼠；②以　相关分析采用ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析法。　１刘平，高云华．肝纤维化动物模型的建立．　１０％乙醇为惟一饮用水喂饲实验大鼠；③　世界华人消化杂志，２００２，１０（６）：６９３—６９５　第１次皮下注射４０％四氯化碳石蜡油液　结果　２　中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝　０．５ｍｌ／１００ｇ，以后每隔３天０．３ｍｌ／１００ｇ　肝纤维化实验模型的建立：本实验中　病学分会联合修订．病毒性肝炎防治方　重复皮下注射，为期６周。　采用复合方法制备鼠肝纤维化模型，用药　案．中华传染病杂志，２００１，１９：５６—６２　病理标本制作：各阶段造模结束后，　６２中国杜区医师２００７年第８期（ｇｔ合版）（第９卷总第１５９期