中西医结合肝病杂志２０１０年第２０卷第４期 ・２３ｌ－ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５－０２６４．２０１０．０４．０１３ 扶正活血不同组方对肝纤维化 大鼠肝组织 一平滑肌肌动蛋白 和Ｓｍａｄ３表达的影响 王者令刘中景 宋 霆孙晓慧 罗玮敏柳 盛 青岛市传染病医院中西医结合肝病科（山东青岛，２６６０３３） 摘要 目的：观察扶正活血不同组方对肝纤维化大鼠肝组织 —ＳＭＡ（ｅｔ－平滑肌肌动蛋白）、Ｓｍａｄ３表达的影响。方 法：ＳＤ大鼠９０只随机分为６组，采用ＣＣ１ 加橄榄油造摸，治疗组分为扶正活血１号方、２号方、３号方，并设阳性对照组、 模型对照组和正常对照组，通过对各组动物灌服不同药物及生理盐水，分别检测其肝组织 —ＳＭＡ和Ｓｍａｄ３的表达水平。 结果：扶正活血１号方和２号方较模型组和阳性对照组大鼠肝组织仅一ＳＭＡ表达产物减少，差异有显著性意义（Ｐ＜０．Ｏ１、 Ｐ＜０．０５）；而扶正活血３号方较模型组大鼠肝组织仅一ＳＭＡ表达均不明显，其差异无显著性意义。对于Ｓｍａｄ３的影响，扶 正活血１号方、２号方、３号方与模型组比较，差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．ｏ１），其中１号方和２号方与阳性对照 组比较，差异也有显著性意义（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１），而３号方与阳性对照组比较，差异无显著性意义。结论：扶正活血ｌ 号方、２号方、３号方对大鼠肝组织Ｏｔ—ＳＭＡ、Ｓｍａｄ３表达均有显著影响。 关键词 扶正活血不同组方／药理作用；仅一平滑肌肌动蛋白；Ｓｍａｄ３；肝纤维化；大鼠 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ￣－ＳＭＡ ａｎｄ ｓｍａｄ３ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｒａｔｓ ＷＡＮＧ ＺＨＥ—ＬＩＮＧ，ＬＩＵ ＺＨＯＮＧ－ＪＩＮＧ，ＳＯＮＧ ＴＩＮＧ，ｅｔ ａ１．Ｑｉｎｇｄａｏ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｓｅａｓｅ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｈｏｓｐｔｔａｌ（Ｑｉ￣ａａｏ Ｓｈａｎｄｏｎｇ， ２６６０３３）Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄ—ＳＭＡ ａｎｄ Ｓｍａｄ３ ｉｎ ｒａｔ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｎｉｎｔｙ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｉｎ ｓｉｘ ｇｒｏｕｐｓ．Ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ｃａｌ－－ ｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＣ１４）ｐｌｕｓ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎｃｌｕｄｅ Ｎｏ．１ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ，Ｎｏ．２ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ａｎｄ Ｎｏ．３ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ，ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ —ＳＭＡ ａｎｄ Ｓｍａｄ３ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｒａｔ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｉｆｂｒｏｓｉｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏ— ｌｏｇｉｃａｌ ｓａｌｉｎｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｄ—ＳＭＡ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｆｌｙ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｎｏ．１ ａｎｄ Ｎｏ．２ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ｇｒｏｕｐｓ ｔｈａｎ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｏｕｐｓ（Ｐ＜０．０１．ｇＰ＜０．０５）ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｒｅ Ｗａｓ ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ — ＳＭＡ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｎｏ．３ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ａｎｄ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｓｍａｄ３ ｗｅｒｅ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｉｎ ｌｌａ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｒｏｕｐｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）．Ａｌｓｏ，Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ Ｓｍａｄ３ ｗｅｒｅ ｓｉｎｉｇｉｃａｎｔｆｌｙ ｌｏｗｅｒ ｉｎ Ｎｏ．１ ａｎｄ Ｎｏ．２Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｇｒｏｕｐｓ ｗｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｇｏｕｐ（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．Ｏ１）ｗｈｉｌｅ ｎｏ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ Ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｎｏ．３ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｏｓｐｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕｏｘｕｅ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｈａｖｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ —ＳＭＡ ａｎｄ Ｓｍａｄ３． Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ Ｆｕｚｈｅｎｇ Ｈｕａｘｕｅ ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ／ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ；０【一ＳＭＡ；ｓｍａｄ３；ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ；ｒａｔｓ 肝纤维化、肝硬化的防治是一个国际难题，现代医学尚缺 乏理想的治疗药物，而肝纤维化的中医药防治研究是近年来中 基金项目：青岛市中医药科研计划重点资助课题（Ｎｏ．２００９一ＺＹＺＯ０２） ・２３２・ 中西医结合肝病杂志２０１０年第２０卷第４期 组织，用１０％甲醛固定，作病理观察及免疫组化检测。 西医结合防治慢性肝病研究的一大热点。基于“正虚血瘀”是 肝纤维化的基本病机，所以有关肝纤维化复方研究的立法组方 １．４检测方法免疫组化检测方法为ｓＰ法。取大鼠肝左叶 主要集中于扶正与活血两者不同配伍组方。本实验研究拟以 上述思想为指导，观察扶正活血不同组方对实验性肝纤维化大 鼠肝组织 －ＳＭＡ（仅一平滑肌肌动蛋白）、Ｓｍａｄ３指标的影响，并 放入１０％中性磷酸甲醛液中固定，取肝左叶最大横截面石蜡包 埋切片，进行Ｏｔ．ＳＭＡ、Ｓｍａｄ３免疫组织化学染色。免疫组织化 学染色步骤：石蜡切片脱蜡、水化后，ＰＢＳ冲洗３次，每次３分 钟；对组织进行微波修复；ＰＢＳ冲洗３次，每次３分钟；ａｎ试剂Ａ 过氧化酶阻断溶液，阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵 育ｌＯ分钟；ＰＢＳ冲洗３次，每次３分钟；加试剂Ｂ正常山羊血清 探讨其治疗肝纤维化的作用机制。 １材料与方法 １．ｊ 实验药品中药：购置于广州中医药大学第一附属医院 中药房，经广州中医药大学中药学院鉴定教研室鉴定为正品。 中药以“桃红活血汤”为基本方（赤芍、丹参、桃仁、红花）， 并结合２００６年８月中国中西医结合学会肝病专业委员会《肝 纤维化中西医结合诊疗指南》…临床肝硬化常见辨证分型，以 肝郁脾虚、肝肾阴虚、脾肾阳虚３种分型组成扶正活血共３个 不同方剂（简称ｌ号方、２号方、３号方）。１号方：（活血化瘀健 脾益气）桃红活血汤加黄芪、党参、白术、炙甘草；２号方：（活血 化瘀滋养肝肾）桃红活血汤加熟地、白芍、麦冬、枸杞子；３号 方：（活血化瘀温补脾肾）桃红活血汤加附子、干姜、炙甘草、肉 苁蓉、菟丝子。药物制备：将扶正活血方原药浸泡２０分钟（水 浸过药面２ｃｍ），武火煮沸后改用文火煎３０分钟，冷却３０分钟 后滤渣取汁。将滤渣如上法再煎煮２次取汁，将３次药汁混 合，用文火适度，浓缩至浓度为０．７５ｋｇ／Ｌ，制成扶正活血方水煎 剂，置冰箱４℃备用。 西药：秋水仙碱（昆明制药集团有限公司），购于广州中医 药大学第一附属医院西药房。秋水仙碱灌胃药液的制备：秋水 仙碱，成人（６０ｋｇ）的日用量为１ｍｇ，大鼠的剂量为成人用量的 ３０倍（即０．２５ｍｇ／ｋｇ），使用时以蒸馏水调制药液成０．０２５ｇ／Ｌ。 １．２主要试剂 单克隆即用型鼠抗人仅一平滑肌肌动蛋白（仅一 ＳＭＡ）购自北京中山生物试剂公司；羊抗大鼠Ｓｍａｄ３多抗购自 美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司；即用型免疫组织化学Ｓ－Ｐ试剂盒及ＤＡＢ 显色剂购自福州迈新生物技术开发公司；兔抗ＰＳ试剂盒购自 北京中山生物制剂；ＡＤＢ显色液，武汉博士德生物工程有限公 司产品。 １．３动物分组及造模给药ＳＤ大鼠９０只，体重１６０～２００ｇ， 雌雄各半，由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号 ＳＣＸＫ２００８００２０）。９０只动物随机分为正常对照组、模型组、秋 水仙碱阳性对照组（简称秋水仙碱组）、中药给药组（简称１号 方组、２号方组、３号方组），共６组，每组Ｉ５只。除正常对照组 外的其他５组大鼠造模：用ＣＣ１ 与橄榄油（购于广州光明化学 试剂公司），两者以４：６（体积比）配成４０％油剂，首剂按０．５ｍｌ／ １００ｇ体重腹腔注射，以后按０．３ｍｌ／１００ｇ体重腹腔注射，２次／ 周，第４周末，大鼠中期肝纤维化形成并开始治疗，治疗期问继 续ＣＣ１ 腹腔注射，以维持病因刺激至第ｌ２周末。正常对照组 大鼠腹腔注射生理盐水０．２ｍｌ／Ｋｇ。于造模后第４周开始给药， 正常对照组以生理盐水灌胃２ｍｌ／次，２次／ｄ；阳性对照组给秋 水仙碱按大鼠０．１ｍｒｅ＇ｋｇ剂量灌胃给药；其余各组均按２ｍｌ／ｋｇ， ２次／ｄ给药。疗程８周。８周后各组动物在戊巴比妥麻醉下腹 主动脉采血测定肝纤维化等血清学指标，并将动物解剖，取肝 封闭，室温下孵育１０分钟；甩去血清，加相应的一抗１：１００稀释， ４￣Ｃ过夜；ＰＢＳ冲洗３次，每次３分钟；加试剂Ｃ生物素标记的 第二抗体１：６０稀释，室温下孵育２５分钟；ＰＢＳ冲洗３次，每次３ 分钟：加试剂Ｄ链霉菌抗生物素一过氧化物酶溶液，室温下孵育 ２５分钟；ＰＢＳ冲洗３次，每次３分钟；加新鲜配置的二氨基联苯 二胺盐酸盐（ＤＡＢ）溶液显色；自来水冲洗，苏木素复染，分化返 蓝，切片经梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 １．５统计学方法 在全自动图像分析系统上，采用ＨＰＩＡＳ． ２０００型图像分析软件进行定量分析，实验数据以ｘ±ｓ表示，随 机选取每张切片１Ｏ个视野（×２ｏｏ）测定阳性细胞的灰度值与 所占视野面积，灰度值在０～２４９之间，灰度值越高，染色越浅， 表达产物越少；灰度值越低，染色越深，表达产物越多。 ２结果 各实验组在造模结束后，共有１６只大鼠死亡，各组选择１２ 只大鼠统计结果。各组大鼠肝组织 —ＳＭＡ、Ｓｍａｄ３染色灰度值 及染色阳性面积见表１、表２。 表１各组动物肝组织ａｔ—ＳＭＡ、Ｓｍａｄ３染色灰度值（；±ｓ） 与模型组比较，△Ｐ＜０．０５，△ＡＰ＜０．０１；与秋水仙碱组比较，｝Ｐ＜ ０．０５． Ｐ＜０．Ｏｌ 表２各组动物肝组织Ｏｔ－ＳＭＡ、Ｓｍａｄ３染色阳性面积（ｘ±８１％） 与模型组比较，△△ＪＰ＜Ｏ．Ｏ１；与秋水仙碱组比较，｝｝Ｐ＜ｎ ０１ 中西医结合肝病杂志２０１０年第２０卷第４期 ３讨论 ・２３３・ 对于Ｓｍａｄ３的影响，扶正活血各组及秋水仙碱组与模型组比 较，其表达产物均明显减少（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．Ｏ１）；而与秋水仙 碱组比较，扶正活血１号方组和２号方组的表达产物也显著降 低（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。提示扶正活血各方组可能通过抑制 —目前认为，ＨＳＣ（肝星状细胞）的活化、增殖、过度分泌是肝 纤维化形成的中心环节。ＨＳＣ激活后转化为肌纤维母细胞 （ＭＦｂ）样细胞表型，合成大量细胞外基质（ＥＣＭ）沉积于肝脏， 最终导致纤维化的发生 ’ 。 一ＳＭＡ作为ＨＳＣ活化的特有标 志性蛋白，与ＨＳＣ增殖、肝纤维化程度呈正相关，ｄ—ＳＭＡ的存 ＳＭＡ与Ｓｍａｄ３的表达，阻止纤维化的发生。 参考文献 ［１］中国中西医结合学会肝病专业委员会．肝纤维化中西医结合诊疗 指南［Ｊ］．中西医结合肝病杂志，２００６，１６（５）：３１６—３２０． ［２］胡爱荣，丁一生，程明亮．丹芍化瘀胶囊对肝纤维化大鼠肝星状细 胞增殖、活化及凋亡的影响［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２００６，１４（２）：１４１ —在可作为ＨＳＣ是否激活的重要标志物。而Ｓｍａｄ３作为肝纤维 化时细胞内主要信号传导介质，其作用是将信号由胞浆传递至 胞核内目的基因的表达，是肝纤维化发生发展所必需的过 程，其具有活化ＨＳＣ、促进胶原合成等效应Ｈ 。活化后的ＨＳＣ 必须在Ｓｍａｄ３参与下方能产生最大效应的胶原合成。本研究 结果显示，模型组大鼠肝脏 —ＳＭＡ免疫组化染色灰度值明显 １４３． ［３］陈尉华，陆伦根，曾民德，等．异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞增殖和 氧应激的影响［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２００６，１４（６）：４２６—４３０． ［４］ＳＣＨＮＡＢＬ Ｂ，ＫＷＥＯＮ ＹＯ，ＦＲＥＤＥＲＩＣＫ ＪＰ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆＳｍａｄ３ ｉｎ 降低，说明其表达产物增加，显著高于正常组。而扶正活血１ 号方组、２号方组、秋水仙碱组较模型组的 —ＳＭＡ灰度值升高， 说明其表达产物减少，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０１）。其中，扶 正活血１号方组和扶正活血２号方组较秋水仙碱组表达产物 也显著降低，差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）；而扶正活血３号方 组与模型组之问，其 —ＳＭＡ表达不明显，差异无显著性意义。 ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｍｏｕｓｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｓｔｅｌｌａｔｅ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００１； ３４：８９—１００． （收稿日期：２０１０—０４—２８编辑：胡肃平） （上接第２３０页）ＭＭＰ－２的表达与活性都增加。ＭＭＰ－９在肝脏 ｌｉｖｅｒ ｉｆｂｍｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｐａｔｈｏｌ，１９９９，１８（９）：９２—９ ８． ［５］ＺＡＮＧ ＧＱ，ＺＨＯＵ ＸＱ，ＹＵ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ— ｄｕｃｅｄ ｂｙ ＴＮＦｍ ｏｎ ａｃｕｔｅ ｓｅｖｅｒｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏ，２０００，１ｌ（６）：６８８—６９２． 主要由库否细胞分泌 Ｊ，但ＭＭＰ一９活性不能反映肝纤维化程 度，却与组织炎症密切相关。在慢性丙型肝炎患者可见肝组织 ＭＭＰ－９ｍＲＮＡ水平与ＭＭＰ－９活性升高 ＇ ］。 总之，我们通过研究，成功建立了ＤＭＮ致小鼠肝损伤模型 ［６］ＷＡＴＡＮＡＢＥ Ｔ，ＮＩＩＯＫＡ Ｍ，ＩＳＨＩＫＡＷＡ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＭＭＰ－２ ｍＲＮＡ ａｎｄ ＭＴ１一ＭＭＰ ｍＲＮＡ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ 并完成了其动态指标观察，该模型基本机理与ＴＮＦ・ 升高密切 相关，而与Ｆａｓ无明显相关。该模型肝损害后ＭＭＰ显著升高， 破坏了正常的细胞外基质，促进了肝组织炎症的扩散，这可能 是肝损害的发生机理之一。 参考文献 ［１］ＨＯＮ ＴＬ，Ｏ ＢＲＩＥＮ ＴＤ，ＳＣＨＯＯＫ ＬＢ，ｅｔ ａ１．Ａｃｕｔｅ ｈｅｐａｔｏｔｏｘｉｃａｎｔ ｅｘｐｏ— ｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ＴＮＦＲ—ｍｅｄｉａｔｅｄ ｈｅｐａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ／ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｌｉｖｅｒ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ［Ｊ］．Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，２００１，３５（４）：４６５—４７３． ［７］朱跃科，王宝恩，申风俊，等．实验性肝纤维化基质金属蛋白酶＿２基 因表达与酶活性的变化［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２００５，１３（７）：５０９— ５１２． ［８］ＫＮＩＴＩ３ｇＬ Ｔ，ＭＥＨＤＥ Ｍ，ＫＯＢＯＬＤ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｍａ— ｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｐａｒｅｎｃｈｙｍａｌ ａｎｄ ｕｏｎ—ｐａ－ ｅｎｃｈｙｍａｌｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ．ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＴＮＦ—ａｌｐｈａ ｎｄ ＴＧＦ—ａｂｅｔａｌ［Ｊ］． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，１９９９，３０（１）：４８—６０． ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｓｃｉ，２０００，５４（１）：２６２—２７３． ［２］ＯＹＡＩＺＵ Ｔ，ＳＨＩＫＡＴＡ Ｎ，ＳＥＮＺＡＫＩ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｄｉｍｅｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｔｏｘ－ ｉｃｏｌ Ｐａｔｈｏｌ，１９９７，４９（５）：３７５—３８０． ［９］ＬＩＣＨＴＩＮＧＨＡＧＥＮ Ｒ，ＢＡＨＲ ＭＪ，ＷＥＨＭＥＩＥＲ Ｍ，ｅｔ ｎＬ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｎｄ ａｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｉｘ ｍｅｔｒａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ａｎｄ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｌｉｖｅｒ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ（Ｌｏｏｄ）， ２００３，１０５（３）：３７３—３８２． ［３］ＫＵＳＴＥＲＳ ｓ，ＴＩＥＧＳ，Ｇ，ＡＬＥＸＯＰＯＵＬＯＵ，Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ｂｏｔｈ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓ— ［１０］ＲＥＩＦ ｓ，ＳＯＭＥＣＨ Ｒ，ＢＲＡＺＯＶＳＫＩ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔｌａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ２ ａｎｄ ９ ａｒｅ ｍａｌ＇ｋｅｉ￣ｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｂｕｔ ｎｏｔ ｏｆｔｈｅ ｄｅｇｒｅｅ ｏｆｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎ ｍｅｍｂｒａｎｄ ＴＮＦ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９７，２７ （１１）：２８７０—２８７５． ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ［Ｊ］．Ｄｉｇｅｓｉｔｏｎ，２００５，７１（２）：１２：４—１３０． ［４］ＰＩＡＣＥＮＴＩＮＩ Ｍ，ＦＡＲＲＡＣＥ ＭＧ，ＨＡＳＳＡＮ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉ— ｎａｓｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｏ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｉｒｘ ｄｕｒｉｎｇ ｈｕｍａｎ （收稿日期：２０１０—０４—１２编辑：李晓东）
