维普资讯 http://www.cqvip.com
ｌ４４ Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎｉ ＨｅＤａｔｏｌ，Ｊｕｎｅ ２ｏｏ２，Ｖｏ１．１８，Ｎｏ．３ 血清金属基质蛋白酶及其 抑制因子检测在肝病中的应用 李 东，杨新英综述于宏审校 （白求恩国际和平医院肝病科，河北石家庄０５００８２） 【中图分类号】Ｒ５７５ 【文献标识码】Ａ 【文章编￣－］１００１—５２５６ ｃ ２００２｝０３—０１４４—０２ １血清金属基质蛋白酶及其抑制园子分类来源及 作用底物 血清金属基质蛋白酶类（ＭＭＰｓ）是一类含有锌 原子的、其活性依赖于钙离子的蛋白酶，可以降解 ＥＣＭ中的主要生物大分子 按作用底物不同主要 分为五大类（１）问质胶原酶 １９６２年发现可分为成 纤维细胞型（又称，间质胶原酶类ＭＭＰ一１）、中性 粒细胞型（＿ⅥＭＰ一８）．ＭＭＰ—１分子量５５ｋＤ，来源 于结缔组织细胞（ＣＴ）肝内ＨＳＣ、ＨＣ、ＫＣ均有分泌。 分解底物为胶原蛋白（ＨＩ＞Ｉ＞１Ｉ）；抗ＭＭＰ一８抗 体可识别ＭＭＰ一１，而抗ＭＭＰ一１抗体则不能识别 ＭＭＰ一８。胶原酶 前体分泌前胶匣酶。激活因子 在蛋白酶及有机汞作用下激活 在最适条件（２５ ） 下，问质胶原酶选择作用于肽中甘氨酸一异亮氨酸 肽键和甘氨酸一亮氨酸肽键，将胶原的肽链切成３／ ４和１／４两个片段；（２）基质分解素类（Ｓｔｒｏｍｅｌｖｓｉｎ） 又称蛋白多糖酶或中性金属酶Ⅳ，可分为分解素 １，２，３和Ｍａｔｒｉｌｖｓ。分别属ＭＭＰ一３、ＭＭＰ一１０、 ＭＭＰ—ｌｌ和ＭＭＰ ７，仅有ＭＭＰ一３在肝脏中存 在，由ＣＴ、Ｍ ，ＨＳＣ分泌，分解Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ、Ｘ、Ⅺ、明 胶、ＬＮ；ＦＮ、ＰＧ、前胶原酶和前明胶酶Ｂ；（３）明胶酶 （Ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ） 分Ａ和Ｂ两类．Ａ为ＭＭＰ一２ ７２ｋＤａ，来源ｆ间质细胞、肿瘤细胞、Ｍ中和ＨＳＣ、 ＫＣ＋分解变性胶原、弹性胶原和胶原Ⅳ、Ｖ、Ⅸ、Ｘ、 Ⅺ；Ｂ为ＭＭＰ一９，９５ｋＤａ，来源于ＣＴ、单桉细胞、肿 瘤细胞，分解底物同ＭＭＰ一２；（４）膜型金属蛋白酶 类（ＭＴ—ＭＭＰ）分为＿ⅥＴ～ＭＭＰ１（ＭＭＰ一１４）， ＭＴ—ＭＭＰ２（ＭＭＰ一１５）；（５）金属弹性蛋白酶 （ＭＭＰ一１２） 不同的ＭＭＰｓ有着结构上的相似 性，它们的一级结构中均含有两个高度保守的区域： 一个在Ｎ一端的前肽医（ＰＲＣＧＶＰＤＰ）；另一个在催 化功能区，是锌原子的结合位点ＨＥＬＧＨ。除了溶 基质蛋白（Ｍａｔｒｉｌｖｓｉｎ）以外，各ＭＭＰｓＣ端均有与玻 璃粘连蛋白（ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ）卡日关的 域，该区域与 收稿日期：２００１—０３—０２ 修订日期：２００１ ０６—１３ ＭＭＰｓ的底物特异性有关 。ＭＴ—ＭＭＰ的ｃ端 还有跨膜区，它可以使ＭＴ—ＭⅥＰ定位于细胞膜 上，而不似其它ＭＭＰｓ分泌到细胞外。ＭＴ—ＭＭＰ 的前肽区与催化功能区之问，以及催化功能区中分 别各有一段插人序列，使其激活机制有别于其它 ＭＭＰｓ ｊ 金属蛋白酶组织抑制因子（ＴＩＭＰ）家族 包括ＴＩＭＰ一１、ＴＩＭＰ一２、ＴＩＭＰ一３（Ｃｈｉｃｋｅｔ７ ＩＭＰ， ＣｈｌＭＫ～３）。ＴＩＭＰ—ｌ是一分子量为２９（２５～３６） ｋＤａ的蛋白质，其分子中有１８４个氨基酸，其中含 ｌ２个半胱氨酸残基，构成６个双硫键 成熟的 ＴＩＭＰ—ｌ序列上有两个保守位点被糖化。ＴＩＭＰ一 ２分子量约２２：（２０～２４）ｋＤａ，人的ＴＩＭＰ一２的ｃＤ． ＮＡ序列分析发现其４３％的序列与ＴＩＭＰ一１相同 ＴＩＭＰ一２可与ＭＭＰ一２酶原相结合；其性质与 ＴＩＭＰ—ｌ相似。最近从鸡胚成纤维细胞中分离出 来的、分子量约为２２ｋＤａ的ＴＩＭＰ一３是由１８８个 氨基酸残基组成；亦具有１２个高度保守的半胱氨酸 残基；与ＴＩＭＰ一１和ＴＩＭＰ一２分别有２８％和４２％ 的同源性，但相互之间无免疫交叉反应，它与ＴＩＭＰ 一２均为非糖基化的蛋白质 ＴＩＭＰ主要具有２个 功能：对ＭＭＰ活性进行抑制，对细胞增殖进行抑制 作用。 ２临床应用 ２．１慢性肝炎 Ｍｕｒａｗａｋｉ等对慢性肝炎患者血清ＭＭＰ—ｌ浓 度进行了测定，应用最近发明的特异的ＭＭＰ一１， ＴＩＭＰ一１复合物酶联免疫吸附试验观察血清ＭＭＰ —ｌ蛋白浓度的变化。以阐明血清ＭＭＰ—ｌ浓度 检测的临床实用性。应用免疫吸附试验检测了６４ 例经病理证实的慢性肝病患者的ＭＭＰ一１浓度及 ＭＭＰ—ｌ与ＴＩＭＰ—ｌ复合物的比值，结果：血清 ＭＭＰ一１的浓度也与慢性肝病程度反向相关（Ｐ＜ ０．０００１）：门脉周围坏死的程度（Ｐ＜０．０００１），小叶 问坏死程度（Ｐ＜０．００５），门脉炎症程度（Ｐ＜ ０．０００１）＋肝纤维化程度（Ｐ＜０．０５），ＭＭＰ一１／ ＴＩＭＰ—ｌ复合物的浓度也与慢性肝炎组织学的严 重程度相关（Ｐ＜０．０００１），门脉炎症程度（Ｐ＜ 维普资讯 http://www.cqvip.com
临床肝胆病杂志２００２年６月第１８卷第３ ０ ０５）。所以血清ＭＭＰ—ｌ与坏死程度密切相关。 数据以受试者工作曲线（Ｒｏｃ）分析法分析，按ｓ 一 ｓ４各期的诊断临界值（ＣＵＴ ＯＦＦ）值对肝纤维化炎 症坏死程度的诊断敏感度７６％，特异度７０％Ｅ３Ｊ Ｍｕｒａｗａｋｉ等的实验发现与正常人相比，慢性肝 炎中度患者血清ＴＩＭＰ一１水平增加２ ２倍，慢性肝 炎重度患者血清ＴＴＭＰ—Ｉ水平增加２ ９倍，肝硬化 患者血清ＴＩＭＰ—ｌ水平增４．１倍，慢性肝炎轻度患 者血清ＴＩＭＰ—ｌ水平无变化。血清ＴＩＭＰ—ｌ水 平与门脉周围坏死程度，门脉炎症程度及肝纤维化 程度密切相关 实验提示随着肝病进展血清ＴＩＭＰ 一１的水平增加，细胞外基质蛋白的降解减少导致 肝纤维化Ｌ４Ｊ Ｍｕｒａｗａｋｉ等的实验包括５８例慢性肝炎患者， ２２例肝硬化患者，４５例肝癌患者，１２４正常人。结 果：正常男性血清ＭＭＰ一３水平的是女性的两倍， 慢性肝炎患者的血清ＭＭＰ一３平均降低５５％，肝 硬化患者的血清ⅥＭＰ一３水平平均降低５３％，肝 癌患者的血清ＭＭＰ一３平均降低４６％，三组之间 无显著差异；血清ＭＭＰ一３水平与肝脏炎症坏死程 度，纤维化程度无关；血清ＭＭＰ一３与肝功能严重 程度无关 结沦：血清ＭＭＰ一３水平检测对于评价 慢性肝炎患者纤维化降解程度意义不大 Ｊ。 ２．２慢性丙型肝炎及对干扰素的反应 血清ＭＭＰ一２水平与门脉周围坏死程度正相 关（ｒ（ｓ）＝０ ３２，Ｐ＝０．００２），与肝纤维化程度正相 关【ｒ（ｓ）＝０ ２６，Ｐ＝０．０１）与病理活动指数评分正 相关（ｒ（ ）＝０ ２４，Ｐ＝０ ０２）。ＴＩＭＰ一血清水平与 肝纤维化程度正相关（ｒ（ｓ）＝０ ３０，Ｐ＝０．００４）。对 干扰素无反应患者的血清ＭＭＰ一２水平明显高于 对于扰素持续反应及有暂时反应的患者（Ｐ＜０．０ｌ 和Ｐ＜０．０５），三组之间血清ＭＭＰ—ｌ水平无区别。 与对干扰素持续反应患者相比，暂时反应及无反应 患者血清ＴＩＭＰ—ｌ水平明显偏低，（Ｐ＜０．０ｌ和Ｐ ＜０ ００１） 暂时反应及无反应患者血清ＴＩＭＰ一２ 水平也明显偏低（Ｐ＜０．叭） 暂时反应及无反应患 者血清ＭＭＰ一２与ＴＩＭＰ—ｌ的比值明显高于持续 反应患者（Ｐ＜０ ００１）即使是ＨＣＶＲＮＡ量较低的基 因亚型１ｂ患者或者基因亚型２ａ和２ｂ的患者情况 １４５ 也一样。基因亚型１ｂ患者ＭＭＰ一２与ＴＩＭＰ—ｌ 的比值大于６时不会出现持续反应 多元回归分析 显示ＭＭＰ一２与ＴｌｂｌＰ一１的比值（Ｐ＝０．０００１）， 基因亚型ｔＰ＝０．００５１ＴＩＭＰ ２水平（Ｐ＝０．０３）是 丙型肝炎对干扰素持续反应的预测因素。血清 ＭＭＰ一２水平是对干扰素无反应的惟一预测因素 （Ｐ＝０ ０００６） 结论：血清ＭＭＰ一２及ＴＩＭＰ一１ 可以估计肝纤维化程度，血清ＭＭＰ一２与ＴＴＭＰ一 １比值可以作为一熳性肝炎对干扰素反应的一个新的 预测指标 一。 ２．３重症肝炎 研究观察了１５名暴发性肝炎患者，１４名较重 的急性肝炎患者，２０名正常人对照 ｌ０名暴发性肝 炎患者，ｌ４名较重的急性肝炎患者存活 暴发性肝 炎血清ＴＴＭＰ—ｌ水平显著高于较重的急性肝炎的 水平（Ｐ＜０．０１）。这些数据表明ＴＩＭＰ—ｌ水平增 高可以反映肝脏炎症程度严重 ［参考文献］ ［１］Ｍａｔｒｌｓｉ￣ＬＭ Ｆｈｅ ｍａｔｔｌｘ—ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｍｅｔａ］］ｏｐｍｔｅｉ￣［Ｊ］ ．Ｂｉｏ￣ｙｓ．１９９２，１４：４５５—４６３ ［２］Ｔａｋｉｂｏ Ｔ．Ｓａｔｏ Ｈ ｓ ｎｎ Ａ ｅｔ ａｌ Ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｒｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｍｅｍｂ㈣一ｔｙｐｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｕｐｍｔｅｔｉａｉｅｓｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ａ ｈｕｍａｎ ｐｌａ。 。啊ｌｋ ｅＤＮＡ Ｊ ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９５．２７０：２３０１３—２３０２０． ［３］Ｍｕｒａｗａｋｉ Ｙ，ｌｋｍａ－ｆ．Ｋａｗｍ，￣ａｌｄ Ｈ Ｓｅｒｕｍ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ— ｔｅｉｎａｗｅ一１ ｉｎ ｐａｉｔｅｎｔｓ ｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｘｉｆ￣ａｌ ｈｅｐａｔｉｔｌｓ［］］．Ｊ Ｇａｓｔｍ￣一 ｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏ１．Ｉ９９９，１４（２ ：１３８一Ｉ４５ ｌ４ Ｍｕｒａｗａｋｉ Ｙ，Ｉｋｕｔａ Ｙ ｌｄｏｈｅ Ｙ ｅｔ Ｔｉ￣ｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌ０一 ｐｒｏｔｅｎｉａｓｅ一１ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｖｅｒ ｏｆ ｐａｔｌｅｒｌｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉ￣［Ｊ］ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，Ｉ９９７ ２６（６）：１２１３一Ｉ２１９ ５ ｊ Ｍｕｒａ￣ａｋｉ Ｙ ｌｋｕｔａ Ｙ，Ｏｋ￣ｍｔｏ Ｋ Ｓｅｒｕｍ￣ｔｒｌｘ ｍｅｔａ１］ｏｐｍ— ｔｅｉｎ￣ｅ一３（ｓｔｍｍｅｌｙｓｉｎ—Ｉ１ ｃｏｎｃｕ ｒ ｒａｔｉｏｎ】“ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｍｉｎｃ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ １９９９．３１（３）’４７４—４８１． ［６］Ｋａｓａｈａｒａ Ａ Ｈａｙ￣ｈｉ Ｎ，Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ Ｋ．ｅｔ ａｌ Ｃ］￣ｕｌａｔｂｉｇ￣ｔｒｉｘ ｍ融ａＵ０ＤＴ …２ ａｎｄ ｆｉ￣ｓｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｍｔｅｉｎａｓｅ一１ ａｓ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉＪｒ ｐａｔｉ￣ｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ Ｒｅｉｎ— ｔｉｏｎｓｈｉｐ ｔｏ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｒ￣ｐｏｎｓｅ［Ｉ］．Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ，１９９７，２６（３）５７４— ５８３ ｌ７ ＪＨ ａｍｕｒ＆一Ｔ，Ｕｓｈｉｙａｍａ—Ｃ．Ｓｕｚｕｋｉ—Ｓ Ｅｆｆ￣ｔ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｅｘ— ｃｈ￣ｇｅ ｏｔｌ ｓｅ“ｍ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｉｏｐｒｏｔｅｉｎ￣ｅ １ ａⅡｄ ｅｙｔｏｋｉｎｅ …ｃｒａｃ ＪｕＩＩｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆｕｌｍｉｎ￣ｔ ｈｅａｐｔｉｔｉｓ［Ｉ］Ｂｌｏｏｄ Ｐｕ ， ２０００，１８（１Ｉ）５０—５４
