Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＲＡＭＰ１）－ａ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｅ ｅｘｐｒｅｓ— ｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｏｆ Ｒａｔ ＲＡＭＰ１ ０ＲＦ。ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＲＡＭＰ１ ｈｙｐｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ（、 Ｃ）． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ ｗａｓ ｕｔｉｌｉｚｅｄ ｔｏ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｈｅ ＲＡＭＰ１ ＯＲＦ ｖｅｃｔｏｒ ｉｎｔｏ ｒａｔ ｔｈＯｒＢＣＪＣ ａｏｒｔａｓ ｖｓＭＣ，ｓｔａ． ｂｌｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｃｅｌｌ ｃｏｌｏｎｙ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓ ＲＡＭＰ１ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ Ｉ：４ｌ８ ＳｃＩ＇ｅｅｎｉｎｇ．ＲＴ—ＰＣＲ ａｎｄ Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ＲＡＭＰ１．ＶＳＭＣ ｖｉａｂｉｉｌｔｙ ｏｒ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＭＴｒ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｉｎｇ ｔｉｍｅ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｖｅｃｔｏｒ ｏｆ ＲＡＭＰ１ Ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ。ａｎｄ ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ Ｃａｌｌ ｓｔａｂｌｙ ｔｒａｎｓｆｅｃｔ ｔｈｅ ｖｅｃｔｏｒ ｏｆ ＲＡＭＰ１ ｔｏ ＶＳＭＣ。ａｎｄ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＭＰＩ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｄｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｄｏｕｂｌｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ ＶＳＭＣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＲＡＭＰ１ ｏｖｅｍｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃａｒｌ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＣＧＲＰ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆＶＳＭＣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＲＡＭＰ１；ＣＧＲＰ；Ｖａｓｃｕｈｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ 降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ—ｒｅｌａｔｅｄ 剂盒购于北京盖宁生物科技有限公司。 ｐｅｐｔｉｄｅ，ｃｃＲｓ）是辣椒素敏感性感觉神经末稍释放 １．２ ＲＡＭＰ１真核表达载体的构建 的神经递质，其介导的舒血管作用可通过直接舒张 设计大鼠ＲＡＭＰ１基因开放阅读框（ＯＲＳ）ＰＣＲ 血管平滑肌或通过内皮依赖产生ＮＯ发挥作用…。 引物，引物序列如下：上游引物（２９ ｂｐ）：５ 一ＣＴＡ 新近研究报道，一定浓度的ＣＧＲＰ能抑制１０％胎牛 ＴＣＣ ＡＴＣ ＧＧＡ Ａ１１’ＣＡＴ ＧＧＣ ＣＣＣ ＣＧＧ ＣＣ一３ ，下 血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅ／＇ｌ／ｍ，ＦＢＳ）或血管紧张素Ⅱ 游引物（２９ ｂｐ）：５ 一ＡＣＧ ＧＧＡ ＴＣＣ ＡＡＣ ＡＣＧ ＡＴＧ （ＡｎｇⅡ）刺激的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增 ＣＣＣ ＴＣＴ ＧＴＧ ＣＧ一３ ，在上下游的５ 端分别引入 殖 Ｊ。ＣＧＲＰ受体是由降钙素受体样受体（ｃａｌｃｉ— ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点。用ＴＲＩｚｏｌ法提取大鼠 ｔｏｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＣＲＬＲ）、受体活性修饰 胸主动脉血管平滑肌细胞总ＲＮＡ，进行逆转录一聚 蛋白１（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＡＭＰ１）和 合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ），其简要步骤为：以ＲＮＡ（１ 受体组分蛋白（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＣＰ）３个 ～５ ｇ）为模板加入１０ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ及以上设计大 组分组成。目前认为ＣＧＲＰ的信号主要是通过磷酸 鼠ＲＡＭＰ１基因开放阅读框（ＯＲＦ）的ＰＣＲ引物在合 化ＣＲＬＲ传递至胞内，而ＲＡＭＰ１作为一种分子伴侣 成酶的作用下通过ＰＣＲ合成目的ｃＤＮＡ产物，将 蛋白，是受体调节的限速蛋白，决定了配体的受体表 ＰＣＲ产物和ｐＥＧＦＰ—Ｎ１载体分别用ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ 型及作用强弱 。ＲＡＭＰ１表达多少是否与ＣＧＲＰ 双酶切并连接转化大肠杆菌ＤＨ５ｏＬ，经测序正确后 抑制ＶＳＭＣ增殖方面作用尚未完全阐明，本实验通 大提质粒备用（简要步骤如图１所示）。为了验证 过构建ＲＡＭＰ１真核表达载体，转染大鼠主动脉平 ＲＡＭＰ１目的基因序列是否突变，将含有重组子的菌 滑肌细胞，观察ＲＡＭＰ１过表达后，ＣＧＲＰ抑制ＶＳＭＣ 液送上海生工进行测序，选取无突变的单克隆菌液 增殖情况。 保种。 １．３稳定转染ＲＡＭＰ１细胞及筛选 １ 材料与方法 组织贴块法体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌 细胞，取第３—４代用于实验；先用不同浓度的Ｇ４１８ 培养基培养细胞，以１４天杀死全部细胞的Ｃ￣；１８浓 １．１材料 度为基本浓度，并以此确定筛选浓度和维持浓度。 雄性Ｓｐｒａｇｕｅ～Ｄａｗｌｅｙ大鼠购于南华大学实验 优化转染试剂与质粒的比例，以得到最佳转染效率。 动物中心；标准胎牛血清（ＦＢＳ）购自杭州四季青公 按标准程序转染细胞，转染４８ ｈ后用含Ｇ４１８的培 司。ＡｎｇⅡ、ＣＧＲＰ、ＣＧＲＰ８—３７、ＭＴｒ均购于美国 养基筛选阳性克隆，取筛选ｌ４天后存活的细胞经 Ｓｉｇｍａ公司。ｐＥＧＦＰ—Ｎ１表达载体由湖南师范大学 ＲＴ—ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ鉴定ＲＡＭＰ１的表达，将 发育与遗传研究中心馈赠；大肠杆菌Ｅ．ｃｏｉｌ ＤＨ５ｃｔ 稳定转染的细胞用于后续实验。 由南华大学生物化学教研室胡小波博士馈赠；ＥｃｏＲＩ １．４ ＭＴＹ检测ＲＡＭＰ１过表达对ＶＳＭＣ增殖的影 和ＢａｍＨＩ酶为ＮＥＷ ＥＮＧＬＡＮＤ ＢｉｏＬａｂｓ产品；Ｓｏｆａｓｔ 响 基因转染试剂购于厦门太阳马生物工程有限公司。 用０．１％ＦＢＳ培养转染ＲＡＭＰ１基因的ＶＳＭＣ ＲＡＭＰ１（ＦＬ一１４８）抗体（ｓｃ一１１３７９）购于美国Ｓａｎｔａ ２４ ｈ使其同步化，１００ ｎｍｏｌ／Ｌ ＡｎｇｌＩ刺激２４ ｈ，再用 Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司。高纯质粒小量快速提取试 １０ ｎｍｏｌ／Ｌ ＣＧＲＰ处理２４ ｈ后观察细胞的生存率。 ２ 见分子量４６７ ｂｐ条带（图２），测序鉴定碱基对无突 变，表明成功构建了ｐＥＧＦＰ—Ｎ１一ＲＡＭＰ１真核表 总ＲＮＡ 达载体。 Ｍ Ｉ ２ ３ ４ 吾二 ｌ ＲＴ ］Ⅱ田Ⅱ团阳班皿 Ｉ珂Ｉｒ鸯Ｅ∞融扁Ｂ世ｍ囊切投序 ‘的上ｆ神弓ｆ铆谨扦ＰｅＲ¨盯 １ ２０００ 卫皿翻旺 Ｉｍ珊ｌｌｌｌ阿ｌｌｌｌｌ珥ｌｌｆ卫咖ｍ旺卫砸啦 卫田珊旺 啊翻眦卫岫嘲吐 图１ ｐＥＧＦＰ—Ｎ１一ＲＡＭＰ１重组质粒构建流程图 １．５观察ＲＡＭＰ１过表达对血管平滑肌细胞倍增 时间的影响 取正常细胞和ＲＡＭＰ１转染细胞各一瓶，用胰 酶消化并吹匀，在２４孔板中每孔种细胞１×１０ 个， 培养２４ ｈ后改用０．１％ＦＢＳ同步化２４ ｈ，按分组要 求加入处理因素（每组平行６孔），实验结束后用胰 酶消化并用移液吹下细胞，制成细胞悬液，在血细 胞计数板中计数，重复实验３次后取平均值，按下面 的公式计算细胞倍增时间：ＴＰ＝ｔ［１ｏ ／（ＩｏｇＮｔ— ｌｏｇＮ０）］，Ｔｐ：细胞倍增时间；ｔ：培养时间；ＮＯ：接种 后的细胞数；Ｎｔ：培养ｔ时间后的细胞数。 １．６统计分析 采用ＳＰＳＳ １０．０软件进行分析，所有数据均用 ±ｓ表示。组间比较用单因素方差分析（ｏｎｅ—ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）检验，用Ｐ＜０．０５判断差异有无显著性。 ２ 结 果 ２．１ ＲＡＭＰ１真核表达载体 将ＲＡＭＰ１基因的ＯＲＦ克隆进ｐＥＧＦＰ—Ｎ１载 体，重组子经ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ双酶切后琼脂糖电泳可 ５００ｂｐ Ｒ Ｐｌ 【．８７ ） 图２重组质粒的ＥｃｏＲ１／ＢａｍＨＩ双酶切琼脂糖凝胶电泳 Ｍ：ＤＩ２０００ Ｍａｒｋｅｒ；１－４：均为重组质粒双酶切 ２．２ ｐＥＧＦＰ—ＮＩ的瞬时表达 采用本室长期建立的组织贴块法培养原代ＳＤ 大鼠血管平滑肌细胞－３ Ｊ，把第３～５代细胞用于实 验。将转染复合物加入６孔板与ＶＳＭＣ共同孵育５ ｈ后，加人含１Ｏ％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ，３７℃５％ＣＯ 继续 培养４８ ｈ，于荧光倒置显微镜下观察转染状态和效 率。可见ｐＥＧＦＰ—Ｎ１转人ＶＳＭＣ后在蓝光激发下 发出绿色荧光，并随细胞状态的不同而表现出荧光 强弱不同。按１００倍镜下绿色荧光阳性细胞数／同 一视野内的总细胞数比值进行荧光计数，随机计算 ４个视野下的比值平均数，转染效率约为１２％。通 过Ｇ４１８筛选ＲＡＭＰ１稳定转染的细胞用于实验 （图３）。 图３ ｐＥＧＦＰ—Ｎ１转染ＶＳＭＣ ４８ ｈ ｐＥＧＦＰ—Ｎｌ转入ＶＳＭＣ后在蓝光激发下发出绿色荧光，并随细胞状 态的不同而表现出荧光强弱不同。Ａ：荧光视野（×１００）；Ｂ：荧光视 野（×２ｏｏ） ２．３ ＶＳＭＣｓ高表达的ＲＡＭＰ１检测 转染组与正常对照组比较，ＲＡＭＰ１的ｍＲＮＡ表 达明显增加，经凝胶成像分析系统分析灰度扫描后， 比值有统计学意义，可认为重组载体在细胞内已有 ３ 较高转录水平（图４）。Ｗｅｓｔｅｎｒ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ确定已稳定 转染ＲＡＭＰ１基因载体的ＶＳＭＣ有ＲＡＭＰＩ蛋白高 表达。灰度扫描结果表明稳定转染的ＶＳＭＣ ＲＡＭＰ１蛋白表达明显高于对照组（图５）。 ｎｍｏｌ／Ｌ Ａｎｇ ｌＩ能刺激血管平滑肌细胞增殖，而空载 体组对细胞的增殖无影响；通过１０ ｎｍｏｌ／Ｌ的ＣＧＲＰ ｊ Ｊ 用，而空载体对这种作用无影响；稳定转染ＲＡＭＰ１ ｊ 作用于细胞，可见ＣＧＲＰ能抑制Ａｎｇ ＩＩ的促增殖作 ＝ Ｊｎ 程重ｃ弩 ＿． ｌ－ｕ０ｈ， ２５ｇ ： ｔ２ Ｂ．誊２¨ ∞ 嚣．一 霍： 刍Ｊ ＿ 图４稳定转染ＶＳＭＣ后ＲＡＭＰ１ ｍＲＮＡ的表达 Ａ：琼脂糖电泳图；Ｂ：相对灰度密度比值（ＲＡＭＰ１／￣一ａｃｔｉｎ）。１ Ｃｏｎｔｒｏｌ；２：ＲＡＭＰ１；Ｍ：ＤＩ２０００ Ｍａｒｋｅｒ．与对照组比较，｝：Ｐ＜０．０５ ｌ ２ ＲＡｈＩｌ＇ｌ ｔＩ７Ｋ卫’ Ａ Ｂ ２．４ ＲＡＭＰ１高表达对ＣＧＲＰ抗ＡｎｇⅡ诱导ＶＳＭＣｓ 增殖的影晌 将细胞分组种于９６孔板内，待细胞长至６０％ 汇合状态时，更换为含０．１％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ培养２４ ｈ使细胞同步化。按实验要求加入处理因素，观察 ＲＡＭＰ１过表达对细胞增殖的影响；结果显示：１００ ４ 的细胞对ＣＧＲＰ的反应明显增强，具有更高的抑制 率（图６）。细胞倍增时间如表１所示，ＲＡＭＰ１过表 达的细胞的增值时间明显比对照组延长。 图６ ＲＡＭＰ１转染对血管平滑肌细胞增殖的影响【ｎ＝５） 与０．１％ＦＢＳ组比较，｝：Ｐ＜０．０５；与ＡｎｇⅡ和ｐＥＧＦＰ—Ｎｌ＋ＡｎｇＩＩ 组比较，＃：Ｐ＜０．０５；与ＡｎｇｌＩ＋ＣＧＲＰ和ｐＥＧＦＰ—Ｎ１＋ＡｎｇＩＩ＋ ＣＧＲＰ组比较，＋：Ｐ＜０．０５ 表１ ＲＡＭＰ１过表达对ＶＳＭＣ倍增时间的影响（／ｔ＇＝６） 分组 细胞倍增时间（ｈ） ０．１％ＦＢＳ组 １７．９８±０．７８ ＡｎｇＩＩ组 ９．３５±３．６２‘ ＡｎｇＩＩ＋ＣＧＲＰ组 １３．Ｏ１±１．５ ＲＡＭＰ１＋Ａｎｇ１Ｉ＋ＣＧＲＰ组 ｌ５．７４±２．８３ 与０．１％ＦＢＳ组比较，ａ：Ｐ＜Ｏ．０１；与ＡｎｇＩＩ组比较，ｂ：Ｐ＜０．Ｏｌ； 与ＲＡＭＰ１＋ＡｎｇＩＩ＋ＣＧＲＰ组比较。ｃ：Ｐ＜Ｏ．０５ ３ 讨 论 研究验成功构建了ＲＡＭＰ１真核细胞表达载 体，并将其转染给原代培养的大鼠ＶＳＭＣ。ＭＴＩ＂结 果表明转染了ＲＡＭＰ１的细胞能显著增强ＣＧＲＰ抗 Ａｎｇ ｌＩ诱导的血管平滑肌细胞增殖作用，说明 ＲＡＭＰ１的高表达能增强ＣＧＲＰ受体对ＣＧＲＰ的敏 感性。 研究报道ＲＡＭＰ１作为一种分子伴侣蛋白，是 受体调节的限速蛋白，决定了配体的受体表型及作 用强弱 ，如何构建将ＲＡＭＰ１转人细胞是目前急 需探索的根本问题。本实验的结果表明ＲＡＭＰ１一 ＧＦＰ汇合蛋白，并通过ＧＦＰ来观察转染效率。在瞬 时转染的基础上，通过Ｇ４１８筛选，再用ＲＴ—ＰＣＲ 和Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＲＡＭＰ１的表达，从而确定 得到稳定表达ＲＡＭＰ１的细胞集落，这为研究 ＲＡＭＰ１在ＶＳＭＣ膜上ＣＧＲＰ受体信号转导和基因 干预提供了实验探索。 有证据表明，主动脉瓣狭窄诱导的大鼠心衰模 型中发现ＲＡＭＰ１的ｍＲＮＡ在心房和心室表达水平 增高 Ｊ，在冠状动脉结扎所致的充血性心力衰竭大 鼠模型中也有同样的变化 Ｊ，在一定浓度的Ａｎｇ ＩＩ 存在下，大鼠心肌细胞ＲＡＭＰ１的ｍＲＮＡ水平表达 增高¨引，这都说明ＲＡＭＰ１的表达在多种病理生理 模型中被调节。用人ＲＡＭＰ１腺病毒载体转染大鼠 原代主动脉平滑肌细胞后，导致ＣＧＲＰ激活受体的 ＥＣ５０降低，增加胞内ｃＡＭＰ的生成¨¨，这也说明异 源性ＲＡＭＰ１可以增加受体效应并有效促进胞内信 号传递。本实验结果看出ＲＡＭＰ１高表达的平滑肌 细胞可能使ＣＧＲＰ受体对ＣＧＲＰ的敏感性增加，延 长细胞对Ａｎｇ １Ｉ刺激细胞增长的倍增时间和降低了 ＶＳＭＣ的生存率，说明ＲＡＭＰ１高表达增强了ＣＧＲＰ 抑制细胞的增殖能力。这说明ＲＡＭＰ１作为ＣＧＲＰ 受体的重要调节蛋白，通过转入基因疗法可增强内 源性ＣＧＲＰ的抗细胞增殖作用，这为逆转高血压或 动脉粥样硬化导致的血管重构、寻找受体药理学作 用的新靶点提供了依据。 参考文献： ［１］ Ｂｒａｉｎ ＳＤ，Ｇｒａｎｔ ＡＤ．Ｖａｓｃｕｌａｒ Ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ Ｇｅｎｅ—Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ［Ｊ］．Ｐｈｙｓ－ ｉｏｌ Ｒｅｖ，２００４，８４：９０３—９３４． ［２］ “Ｙ，Ｆｉｓｃｕｓ ＲＲ，Ｗｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ—ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐａｓｓａｇｅｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９９７，３１（５）：５０３—５０９． ［３］Ｑｉｎ ｘＰ，Ｙｅ Ｆ，Ｈｕ ＣＰ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ— ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｏｎ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｐｍｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｆｏ ｒａｔ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ， ２００４，４８８（１—３）：４５—４９． － ， ［４］张晓一，刘玉环，廖端芳，等．Ｌｏｓａｒｔａｎ和ＣＧＲＰ对血 管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖作用的影响 ［Ｊ］．中国药理学通报，２００６，２２（１）：１０１—１０５． ［５］ 邓水秀，曾泗宇，任俊芳，等．降钙素基因相关肽对血 管平滑肌细胞增殖及小凹蛋白１表达的影响［Ｊ］．中 国动脉硬化杂志，２ｏｏ７． ［６］秦旭平，任俊芳，田海宏，等．降钙素基因相关肽对血 管平滑肌细胞脂质代谢及ＡＭＰＫ的影响［Ｊ］．南华大 学学报，２００９，３７（１）：ｌ一４． ［７］Ｈａｙ ＤＬ，Ｐｏｙｎｅｒ ＤＲ，Ｓｅｘｔｏｎ ＰＭ．ＧＰＣＲ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＲＡＭＰｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２００６，１０９： １７３—１９７． ［８］ＣｕｅｉＵｅ Ｃ，Ｐｉｄｏｕｘ Ｅ，ｄｅ Ｖｅｍｅｊｏｕｌ ＭＣ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＭＰ１ ａｎｄ ＲＡＭＰ３ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｂｉｃｏｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍ． ｍｕｎ，２００２，２９４（２）：３４０—３４６． ［９］Ｔｏｔｓｕｎｅ Ｋ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｋ，ＭａｃＫｅｎｚｉｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅｓａｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＭ ａｎｄ ＡＭ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ，ｒｅ— ｃｅｐｔｏｒ—ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＲＡＭＰ）２ ａｎｄ ｅａｌｅｉｔｏ— ｎｉｎ—ｒｅｃｅｐｔｏｒ—ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＲＬＲ）ｉｎ ｔｈｅ ｈｅａｒｔｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ，２０００，９９ （６）：５４１—５４６． ［１０］Ｍｉｓｈｉｍａ Ｋ，Ｋａｔｏ Ｊ，Ｋｕｗａｓａｋｏ Ｋ，ｅｔ ａ１．ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎⅡ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡＭ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｒａｔ ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２００３，７３（１３）：１６２９ —１６３５． ［１ １］ Ｚｈｏｎｇｍｉｎｇ Ｚｈａｎｇ ＩＭＤ，Ａｎｄｒｅｗ ＦＲ．Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｇｅｎｅ— ｒｅｌａｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ— ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ一１ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００６，１４７（４）：１９３２ —１９４ｏ． （此文编辑朱雯霞） ５
