第３ｌ卷，第２期 ２ ０ １ １年２月 光谱学与光谱分析 Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．２，ｐｐ５４７—５５０ Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１１ 油橄榄叶中总黄酮含量测定方法探讨 郑媛媛 。，李 辰 ～，封士兰 ，黄新异 ，刘永峰 一，陈小芬 一，邸多隆 １．兰州大学药学院，甘肃兰州７３００００ ２．中国科学院兰州化学物理研究所，中国科学院西北特色植物资源化学 重点实验室和甘肃省天然药物重点实验室，甘肃兰州 ７３００００ ３．五邑大学应用物理与材料学院分析测试中心，广东江门 ５２９０２０ ４．中国科学院研究生院，北京１０００４９ 摘要 建立以芦丁为对照品的油橄榄叶中总黄酮含量的测定方法。采用Ａ１（ＮＯ３）ｓ～ＮａＮＯｚ—ＮａＯＨ和 Ａ１Ｃ１ｓ两种显色法测定油橄榄叶中总黄酮的含量，并分别考察了两种方法对测定结果的影响。结果表明， Ａ１Ｃ１ｓ显色法适宜于油橄榄叶总黄酮的含量测定。该法操作简便，线性关系良好，准确度、重复性和稳定性 较好，可用于油橄榄叶总黄酮含量测定，并为中药和天然产物中总黄酮的含量测定提供参考。 关键词油橄榄叶；总黄酮；紫外一可见分光光度法；ＡＩＣ１。显色法 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—０５９３（２０１１）０２—０５４７—０４ 中图分类号：０６５７．３ 量时，该方法需要较多的黄酮化合物对照品＿ｇ］。薄层色谱扫 引 言 油橄榄（Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｒｅ Ｌ．）为木犀科（Ｏｌｅａｃｅａｅ）木樨榄属 （Ｏｌｅａ）植物，主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美国加州地 区。自６Ｏ年代起，油橄榄开始在我国引种，甘肃陇南市是我 国油橄榄最大的种植基地之一＿１ ］。现代药理学研究表明， 油橄榄叶提取物具有抗氧化、抗真菌、降血压、降血脂等活 性 一】。油橄榄叶中的化学成分包括裂环烯醚萜类、黄酮类、 描法和超临界流体色谱法存在灵敏度低，重现性差的缺点， 也需要较多的黄酮化合物对照品。紫外分光光度法是测定天 然产物中总黄酮最常用的方法之一，具有仪器廉价、操作简 便，检测成本低等优点，不需要总黄酮中各黄酮化合物对照 品，在分析工作中无需对总黄酮中各黄酮化合物同时定性定 量，因此得到广泛应用。但由于中药和天然药物提取物成分 复杂，在应用紫外分光光度法测定含量时很难避免基质对测 定结果的干扰。本文针对油橄榄叶中的总黄酮，选用紫外分 光光度法在不同显色体系中进行含量测定，探讨干扰测定的 主要基质因素，以期为中药或天然产物复杂基质中总黄酮含 量测定方法提供参考。 游离醇、甾醇、烷烃类及挥发性成分等。其中，裂环烯醚萜 类和黄酮类是其主要有效成分。油橄榄叶所含裂环烯醚萜类 主要是橄榄苦苷。黄酮类化合物主要有木犀草苷、芹菜苷、 槲皮素、芦丁、山奈酚等【１ ］。油橄榄叶中黄酮类化合物含 量丰富，其药理活性主要表现在抗氧化及清除自由基作用， 对心血管系统的作用，抗肿瘤、抗癌作用，对平滑肌的作用， １仪器、试剂与材料 Ｔ６新世纪紫外一可见分光光度计（北京普析通用仪器有 限责任公司），ＲＥ－５２Ｃ型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限 抗炎、抗菌、抗病毒作用，雌激素作用，对中枢神经系统的 作用，降血糖作用，镇痛止泻、防治溃疡的作用。此外，还可 作为功能食品添加剂、天然抗氧化剂食用［ 。 目前，总黄酮的含量测定方法主要有分光光度法、薄层 色谱扫描法、高效液相色谱法、超临界流体色谱法和毛细管 电泳法等几种主要的方法＿７ ］。其中，高效液相色谱法和毛 细管电泳法具有较高的准确性和灵敏度，但在测定总黄酮含 收稿日期：２ＯｌＯ一０５—１０，修订日期：２ｏ１０—０８—２０ 责任公司），ＢＴ ２２４Ｓ型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有 限公司）。 芦丁对照品（批号为１０００８１—２００７０７）购于中国药品生物 制品检定所。橄榄苦苷对照品为本实验室自制：油橄榄叶乙 酸乙酯部位提取物，以氯仿一甲醇（９：１， ）为洗脱液经硅胶 基金项目：中国科学院“百人计－戈０”项目和中国科学院“科技支甘”项目资助 作者简介：郑媛媛，女，１９８６年生，兰州大学药学院在读硕士研究生 ＊通讯联系人 ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉｄｌ＠ｌｉｃｐ．ｃａｓ．ｃｎ ｅ－ｍａｉｌ：ｈｎ＿ｚｙｙ＠１６３．ｃｏｍ ５４８ 光谱学与光谱分析 第３１卷 柱色谱反复分离重结品得到化合物，经 Ｈ ＮＭＲ和”Ｃ－ＮＭＲ 确定化合物为橄榄苦苷，并由ＨＰＬＣ－ＤＡＤ法一面积归一化法 测得其含量大于９５％。油橄榄叶（干燥品）采于甘肃省陇南 市。 为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程、相关系数分别Ｙ 一８．３５５ｘ＋０．０３６９，Ｒ。一Ｏ．９９３ ９， 一６。由此可知，芦丁对 照品溶液在０．００７ ８８—０．０４７ ３ ｍｇ・ｍ 的浓度范围内呈 现良好的线性关系。 ２．３．２ Ａ１Ｃ１３显色法 ＡＩ（Ｎ０３）。，ＮａＮＯ２，ＮａＯＨ和Ａ１Ｃ１３为分析纯，实验用 乙醇为工业纯。实验用水为蒸馏水。 ２实验部分 ２．１溶液制备 ２．１．１对照品溶液 精密称取芦丁对照品１９．７ ｍｇ，用６Ｏ％乙醇定容于５０ Ｉｌ＿ｌＬ容量瓶中，即得芦丁对照品储备液（０．３９４ ｒａｇ・ｍＬ ）。 精密量取５ ｎ也芦丁对照品储备液，置于２５ ｎ 容量瓶中， 用６Ｏ 乙醇稀释定容，即得芦丁对照品溶液Ｉ（０．０７８ ８ ｍｇ ・ｍＬ ）。精密量取２５ ｍＬ芦丁对照品储备液，置于５Ｏ ｎ 容量瓶中，用６Ｏ 乙醇定容，即得芦丁对照品溶液Ⅱ（Ｏ．１９７ ｍｇ・ｍＬ’）。 精密称取橄榄苦苷对照品１０．１ ｍｇ，用６Ｏ 乙醇定容于 ２５ ｍＬ容量瓶中，得橄榄苦苷对照品溶液ＩＩＩ（０．４０４ ｒａｇ・ ｍＬ ）。 ２．１．２供试品溶液 准确称取２Ｏ．０ ｇ油橄榄叶，置于２５０ ｎ 圆底烧瓶，加 入１２倍（ｐ）的８Ｏ 乙醇溶液，加热回流提取２ ｈ，过滤，残渣 中再加入１０倍体积（ｐ）的８Ｏ 乙醇，加热回流提取２ ｈ，过 滤。合并两次滤液，回收乙醇，浓缩液用蒸馏水定容至２５０ ｍＬ。静置沉降２４ ｈ，精密量取上清液１Ｏ ｍＬ，用６Ｏ％乙醇定 容至１００ ｍＬ，即得样品溶液。 ２．１．３显色剂 准确称取适量的ＡＩ（ＮＯ ）。，ＮａＮＯ２，ＮａＯＨ、Ａ１Ｃ１。，用 蒸馏水定容至适当体积，使溶液浓度分别为１０ Ａｌ （ＮＯ３）３，５ ＮａＮＯ￣，４ ＮａＯＨ和１ Ａ１Ｃ１３。 ２．２测定方法 ２．２．１ Ａｌ（Ｎ０３）３一ＮａＮＯ２一ＮａＯＨ显色法 分别精密量取对照品溶液Ⅱ、对照品溶液Ⅲ和供试品溶 液各１．０ ｒｒ ，置于２５ ｍＬ容量瓶中，以３Ｏ 乙醇补足至６．０ ＨｌＬ，加入５ 的ＮａＮＯｚ和１Ｏ 的Ａｌ（Ｎ０３）。溶液各１ ｍＬ， 加入４ 的ＮａＯＨ溶液１Ｏ ｍＬ，摇匀放置５ ｍｉｎ，以３０ 乙 醇定容，于５１０ ｎｌＴｌ下测定。 ２．２．２ Ａ１Ｃ１３显色法 分别精密量取对照品溶液Ｉ、对照品溶液Ⅲ和供试品溶 液各１．０ Ｈ也，置于１Ｏ ｎ 容量瓶中，以３Ｏ％乙醇补足至５．０ ｎ１Ｉ ，摇匀，再加入４ ｍＬ １ 的Ａ１Ｃ１。溶液，用３Ｏ 乙醇定 容，摇匀放置１０ ｍｉｎ后，于４１５ ｎｒｎ下测定。 ２．３标准曲线的绘制 ２．３．１ Ａ１（ＮＯ３）３一ＮａＮＯ２－ＮａＯＨ显色法 分别精密量取芦丁对照品溶液Ⅱ１．０，２．０，３．０，４．０， ５．０和６．０ ｍＬ，置于２５ ｍＬ容量瓶中，用３Ｏ 乙醇补足至 ６．０ ｍＬ，按照２．２．１节操作，并在５１０ ｎＩｎ下测定吸光度，以 芦丁对照品溶液浓度（ｚ，ｍｇ・ｍ ）为横坐标，吸光度（ ） 分别精密量取芦丁对照品溶液１ ０．０，１．０，２．０，３．０， ４．０和５．０ ｍＬ，分别加３０ 乙醇至５ ｍＬ，按照２．２．２节操 作，并在４１５ ｎｌＴＩ处测定吸光度。以芦丁对照品溶液浓度（ ， ｍｇ・ｍＬ ）为横坐标，吸光度（ ）为纵坐标进行线性回归， 得线性回归方程、相关系数分别为ｙ一３２．９９５ ＋ｏ．０３０ ８， Ｒ 一０．９９９ ０， 一５。由此可知：芦丁对照品溶液在０．００７ ８８ －０．０３９ ４ ｍｇ・ｍＬ 的浓度范围内呈现良好的线性关系。 ３结果与讨论 ３．１供试品中总黄酮含量测定 精密量取供试品溶液０．５ ｍＬ，按照２．２．１节操作，测定 其吸光度，根据回归方程计算出样品溶液中总黄酮含量为 ２８．６ 。 精密量取供试品溶液１．０ ｍＬ，按照２．２．２节测定样品 溶液的吸光度，经回归方程计算出样品溶液中的总黄酮含量 为１．６０ 。 ３．２主要影响因素 ３．２．１ Ａｌ（Ｎ０３）３一ＮａＮＯｚ—ＮａＯＨ显色法 分别精密量取对照品溶液Ⅱ、对照品溶液Ⅲ各１．０ Ｈ ， 按照２．２．１节操作显色后，在２００￣６００ ｎｒｎ波长范围内进行 扫描，图谱见图１。Ｃｙｒｉｌ等ｌ】０］以ＨＰＬＣ法测定了１４个不同 品种油橄榄叶中的多酚化合物，发现油橄榄叶提取物中橄榄 苦苷含量较芦丁、芹菜素、木犀草素等黄酮化合物更高，约 为生药含量的９ ～１３ 。该方法测定总黄酮的最大波长为 ５１０ ｎｉｎ，然而，由图可知，在此波长下橄榄苦苷亦有吸收， 而且橄榄苦苷含量较黄酮高出５倍以上。ＡＩ（Ｎ（）３）ａ－ＮａＮ０２一 ＮａＯＨ络合显色法原理是：在碱性条件下，络合反应发生在 黄酮醇类成分邻位无取代的邻二酚羟基部位。分析其结构发 现，橄榄苦苷和黄酮化合物一样，具有邻位无取代的邻二酚 羟基，故选用该方法在５１０ Ｄｉｎ下测定总黄酮时，橄榄苦苷 对测定结果有很大影响。 ｌ・Ｏ ０．５ ｕ 耋 。 墨 ．０．５ ２００ ３００ ４００ ５００ ６００ ７００ Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ／ｎｍ Ｈｇ．１ Ｓｐｅｃｔｒｏｇｒａｍ ｏｆ ＡＩ（ＮＯａ）３一ＮａＮＯ￣一ＮａＯＨ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ 第２期 ３．２．２ ＡＩＣ１３显色法 光谱学与光谱分析 ５４９ 含量为１．５９ ，相对标准偏差（ＲＳＤ％）为１．５４ （ 一５）。 ３．３．３重现性 分别精密量取对照品溶液Ｉ和对照品溶液Ⅲ１．０ ｍＬ，按 ２．２．２节方法显色后，在２。０～６００ ｎｍ波长范围内进行扫描 得图谱２。在酸性环境下，黄酮醇母核中５位一ＯＨ、４位 Ｃ＝Ｏ与Ａｌ抖络合产生的络合物，在４００ ｎｍ左右有最大吸 收，且这个反应具有专属性ｌ 。利用这一特性，结合橄榄苦 】苷和黄酮分子结构的差别，比较橄榄苦苷和总黄酮与Ａ１Ｃ１。 精密称取油橄榄叶４份，每份约５ｇ（准确至０．００１ ｇ）， 按照２．１＿２项下操作方法平行制备４份样品溶液，准确移取 样品溶液各１ ｎ ，用６Ｏ 乙醇定容至１０ ｎ也，混匀之后移取 １ Ｈ 稀释液，按照２．２．２项下显色方法在４１５ ＦＬｒｎ下分别测 定吸光度，测得样品溶液中总黄酮的平均含量１．６２ ，ＲＳＤ 值为１．３７ （ 一４）。 ３．３．４准确度 的显色区别。结果发现，总黄酮在２１０，２７２，４１５ ｎｌＴｌ有最大 吸收，而橄榄苦苷在４１５ ｎｍ下没有吸收，故选用４１５ ｎｒｎ为 该方法测定波长，可有效避免橄榄苦苷对测定的干扰。 精密称取已知含量的油橄榄叶４份，每份约１ ｇ（准确至 ０．００１ ｇ），各加入２．３５０ ｍｇ芦丁对照品，按照２．１．２项下操 作方法平行制备４份加标样品溶液，准确量取样品溶液１ ｍＬ，用６Ｏ 定容至ｌＯ ｍＬ，混合均匀后移取１ ｎ 稀释液， 按照２．２．２项下方法分别测定吸光度，计算回收率，结果见 ０ １．０ 磊 七 上 表１。由结果可知，该方法准确度良好。 Ｔａｂｌｅ １ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＡＩＣｌａ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ 宝 ０５ ．《０ ：００ ３００ ４００ ５００ ６００ Ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ／ｒａｎ Ｆｉｇ．２ Ｓｐｅｃｔｒｏｇｒａｍ ｏｆ ＡＩＣＩ３ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ ３．３方法学考察 由于Ａ１Ｃ１。显色法测定结果较ＡＩ（Ｎ０３）ｓ—ＮａＮＯ２一Ｎａ０Ｈ ４结论 显色法测定结果准确，对Ａ１Ｃ１。显色法在线性关系良好的基 础上进一步进行方法学考察。 ３．３．１稳定性 （１）本文采用紫外分光光度法两种常见的显色方法对黄 酮类化合物含量进行了测定，以Ａ１（Ｎ ）ａ－ＮａＮＯｚ—ＮａＯＨ 系统为显色剂时所测得含量严重偏离事实。这主要是由于橄 精密量取供试品溶液ｌ ｍＬ，用６Ｏ 乙醇定容至１０ ｍＬ， 混匀之后移取１ ｎ 溶液，按２．２．２项下显色方法在４１５ ｒｆｎ 下进行时间扫描，测定其吸光度稳定性。结果表明，该方法 在９０ ｍｉｎ内稳定性良好，吸光值的相对标准偏差（ＲＳＤ％）为 １．０３ 。 榄苦苷和黄酮类化合物均为多酚类化合物，橄榄苦苷的邻二 酚羟基和多个不饱和双键同样与该显色系统发生反应，从而 使得橄榄苦苷在５１０ ｎＩｎ处有吸收峰，橄榄苦苷作为油橄榄 叶中的含量较高的主要化合物之一，对该显色系统用于油橄 榄叶中总黄酮类化合物的含量测定的准确性有着极大的影 响。 ３．３．２精密度 精密量取供试品溶液１ ｒｎＬ，用６Ｏ 乙醇定容至１０ ｍＬ， （２）通过方法学验证实验，最终确定Ａ１Ｃ１ｓ显色法测定 油橄榄叶总黄酮的含量。该方法操作简单，并具有良好的稳 定性、重复性和准确度等优点。该方法可作为中药或天然产 物中总黄酮含量测定的参考方法之一。 混匀之后分别移取１ Ｈ止溶液５份，按照２．２．２项下显色方 法在４１５ ｎｍ下测定吸光度，测得样品溶液中总黄酮的平均 Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ ［１］ｗＡＮＧ Ｘｉａｏｆｅｉ，Ｉ Ｉ Ｃｈｅｎ，ｓＨＩ Ｙａｎｐｉｎｇ，ｅｔ ａ１．Ｊ．Ａｓｉａｎ Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｓ．，２００９，１１：９４０ Ｌ ２ Ｊ Ｍａｎｕｅ１ Ｂ，Ａｒａｎｚａｚｕ Ｇ，Ｐｅｄｒｏ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，１９９９，４７：３５３５． ［３］Ａｕｒｅｌｉａ Ｎ Ｓ，Ｃａｒｌａ Ｄ’Ｏｒａｚｉｏ，Ｖａｎｅｓｓａ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇ，２００９，３３：４６１． ［４］Ｒａｆｆａｅｌｌａ Ｂ，Ｍａｕｒｉｚｉｏ Ｐ，Ｓｔｅｆａｎｏ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，２００２，５０：４９３４． ［５］Ｈｅｉｍｌｅｒ Ｄ，ｉｅｒｏｎｉ Ａ，Ｔａｔｔｉｎｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ，１９９２，３３（７２８）：３６９． ［６ Ｊｅｆｆｒｅｙ Ｂ Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｉｎｅ Ａ Ｗ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０００，５５：４８１． ［７］Ｒｏｎｇ Ｔｓａｏ，Ｚｅｙｕａｎ Ｄｅｎｇ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ，２００４，８１２：８５． Ｌ ８ ｊ Ｊｏｓｅｐ Ｖ，Ｓｉｌｖｉａ Ｍ，Ｐｉｌａｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ，２００９，１２１６：７１４３． 【９ Ｉ Ａｌｉｎｅ Ｍ，Ｃｈａｒｌｅｓ Ｅ Ｉ ，Ｍａｒｃｏ Ｒ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，２００５，９１：５７１． ５５０ 光谱学与光谱分析 第３１卷 ［ＩＯ３ Ｃｙｒｉｌ Ｓ，Ｂ￣ａｔｒｉｃｅ Ｂ，ＲｉＭ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，２００１，４９：６１８． ［１１］ＬＩＵ Ｄｏｎｇ－ｐｉｎｇ，ＺＨＯＵ Ｙａ—ｑｉｕ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｎ－ｒｏｎｇ（刘东平，周亚球，王先荣）．Ｌｉｓｈｉｚｈｅｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（时珍国 医国药），２００７，１８（３）：６１４． Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ Ｌ．Ｌｅａｖｅｓ ＺＨＥＮＧ Ｙｕａｎ－ｙｕａｎ 一，ＬＩ Ｃｈｅｎ２～，ＦＥＮＧ Ｓｈｉ－ｌａｎ ，ＨＵＡＮＧ Ｘｉｎ－ｙｉ ，ＬＩＵ Ｙｏｎｇ－ｆｅｎｇａ一，ＣＨＥＮ Ｘｉａｏ－ｆｅｎ２一， ＤＩ Ｄｕｏ－ｌｏｎｇ ， １．Ｌａｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ１ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｉ￣ｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｃｈｉｎａ ２．Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ＆Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｆ Ｇａｎｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａ１ Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００００，Ｃｈｉｎａ ３．Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ＆Ｍａｔｅｒｉａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｗｕｙｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉａｎｇｍｅｎ ５２９０２０，Ｃｈｉｎａ ４．Ｇｒａｄｕａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４９，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ Ｌ．１ｅａｖｅｓ ｕｓｉｎｇ ｒｕｔｉｎ ａｓ ａ ｓｔａｎｄａｒｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｗｏ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ＡＩ（ＮＯａ）ｓ－ＮａＮ０２一ＮａＯＨ ａｎｄ Ａ１Ｃ１３ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｂｙ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ．Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｗａｓ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ Ａ１Ｃ１３ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｗｉｔｈ ｇｏｏｄ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ，ａｎｄ ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｌｏｏｋｅｄ ａｓ ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｈｅｒｂａｌ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｒ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ（）ｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ Ｌ．１ｅａｖｅｓ；Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ＵＶ—Ｖｉｓ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ａ１Ｃ１３ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ （Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ｍａｙ １０，２０１０；ａｃｃｅｐｔｅｄ Ａｕｇ．２０，２０１０） ＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ
