超氧阴离子自由基的测定

试剂：65 mmol·l-1 PBS（磷酸盐缓冲液），10mmol·l-1盐酸羟胺，α-萘

胺，乙醚，黄胺，三氯甲烷

材料：叶片

第一步：称取2 g叶片，加入6ml 65 mmol·l-1 PBS（pH 7.8），冰浴

研磨成匀浆，四层纱布过滤，5000×g（4℃）离心10 min。取1 ml上清液加入0.9 ml上述缓冲液和0.1 ml 10mmol·l-1盐酸羟胺，25 ℃温浴20 min。然后取0.5 mlα-萘胺，于25℃下反应20 min，最后加入同体积乙醚充分摇动，1 500×g离心5 min，取粉红色水相测定530 nm的OD值。同时做NO2-标准曲线，将[NO2-]乘以2得[O2-·]，结果以O2-·nmol·min-1·mg-1protein 表示。

第二步：

实验组0.50.1 实验组0.50

实验组11

空白调零组0.50.1

空白调零组00.5

空白调零组10.5

PBS盐酸羟胺

摇匀，25℃水浴加热10min

提取液PBS

摇匀，37℃水浴加热20min

黄胺α-萘胺

摇匀，37℃水浴加热20min

实验组

三氯甲烷

3

空白调零组

3

A530备注：

提取液：称取成匀浆，四层纱布过滤，液。

↓

10000r/min 离心 3min（5000r/min 6min）

↓

取粉色水相（上层）测定A530

NO2¯）=A（实验组）—A（空白调零组）2 g叶片，加入6ml 65 mmol·l-1 PBS（pH 7.8），冰浴研磨5000×g（4℃）离心10 min，收集得到的上清（