标题：Evolution300紫外分光光度计标准操作规程 起草部门 制 定 人 审 核 人 批 准 人 分 发 1. 目的
1.1.
规范Evolution300紫外分光光度计的操作，保证正确使用Evolution300紫外分光光度计。
2. 适用范围
2.1.
适用于赛默飞公司的Evolution300紫外分光光度计。
颁发部门 GMP办公室 颁发日期 制定日期 审核日期 批准日期 执行日期 文件编号 3. 责任者
3.1.
仪器操作员：严格按SOP操作仪器，保持仪器的干净整洁;确保仪器能够正常运行，确认仪器是否在计量效期内。 3.2.
质量总监：相关仪器文件的审批，仪器使用的管理。
4. 相关定义
无 5. 工作程序
5.1.
准备
5.1.1． 开机前检查 5.1.1.1. 5.1.1.2.
每次开机前应检查样品室应洁净、无异物。 检查仪器是否在检定效期内。
5.1.2． 检查电源 5.1.2.1.
紫外分光光度计应有良好的接地，并配有220 V ( ± 5%) 电压，零地电压小于5V，每次开机前应检查插头与插座吻合是否正常。
5.1.3． 检查放置环境 5.1.3.1.
紫外分光光度计应放置在稳定、无振动的位置，周围环境温度应在10℃~30℃、相对湿度不超过75%RH的范围内。
5.1.4． 仪器使用记录填写
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5.1.4.1. 检查上述项目，没有不符合项判定为正常状态，有不符合项判定为不正常状态。
5.2. 操作
5.2.1． 点击电脑桌面上的VISIONpro 快捷图标 ,根据不同的要求，可以选
择不同的测量模式。
ain menu bar Tool bar
Data store Status bar
5.2.1.1. 自左向右：1.建立一个新的方法；2.从磁盘调用方法；3.使用当前文件名把采样方法保存到磁盘；4.从磁盘调用结果文件；5.使用当前文件名把选择的数据文件保存到磁盘。
5.2.1.2. 自左向右选择：1.扫描扫描应用；2.固定波长 Fixed 应用；3.定量 Quant 应用；4.Rat应用；5.多成份分析 Multicomponent Analysis 应用；6.DNA 应用。
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5.2.1.3. 自左向右：1.开始运行批样品测量；2.暂停 Rate 应用中的数据采集；3.按照所选方法，采集样品基线或调零；4.停止当前的运行；5.访问 Help 系统。
5.2.1.4. 自左向右：1.扫描应用记忆当前的；2.恢复到记忆的窗口版面；3.按照不重叠方式的平铺窗口；4层.叠式窗口；5.从磁盘调用窗口版面(窗口版面可以通过 File 菜单存储和调用)。
5.2.1.5. 自左向右：1.选到 Method 窗口；2.选到 Graph 窗口；3.选到 Results 窗口；4.选到 Calibration 窗口；5.选到 Kinetics 窗口。
5.2.1.6.
自左向右选择：1.取消跟踪光标 ；2.使用跟踪光标 (使用箭头键，可沿逐个数据点移动。) ；3.清除所有数据的图谱；4.栅格形式的切换；5.设置图谱坐标范围；6.切换图注显示 7.切换峰标显示；8.背景色的白/灰切换 9.图谱线形的点/线切换。
5.2.2． 使用扫描 5.2.2.1. 5.2.2.2. 5.2.2.3.
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启动 VISION。
点击扫描图标 进入扫描应用。 设置扫描方法(Scan Method)。
a.从下拉菜单可选的内容中选择数据格式( Data Mode)。 b.点击起始波长(选择数据格式)的数值框，将打开数值输入对话框。 可以用鼠标点击数值输入对话框的虚拟键盘，或直接用计算机的键盘，输入起始波长值。波长终点( stop wavelength)的设置也是一样的。
c.选择带宽( bandwidth)， 扫描速度(Scan speed)和数据点间隔( data interval)，也可能还有换灯波长(Lamp Change wavelength)。 d.输入样品个数。
e.设置循环(Cycles) 和循环时间(Cycle Time)。
f.在数据采集过程中，或采集完成后，可使用 Math 菜单中的功能，选择操作所需的显示特性、平滑( Smooth)和结果表。 g.设置自动坐标(Auto Scale)。
h.要使用自动保存( AutoSave)，点击其 On/Off 方框使其 on ，并输入子文件名和序号。
i.要将方法锁定，点击锁定(Lock)按键，输入自己的口令。 j.如要将方法锁定，点击锁定(Lock)按键，输入自己的口令。
5.2.2.4. 5.2.2.5.
此时打开下面窗口
5.2.2.6.
按照需要的运行，选择相关的基线校正。
若使用了池控制器，参考 “样品池控制器方法设置” 。 点击基线校正(Baseline Correction)按钮，建立相关应用的基线。
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100%T Baseline 为标准的用户基线。如果仪器装有漫反射附件(DRA)，其他两个，即0%T Baseline Correction 和 Standard Reference Correction with 0%T Baseline 也供选择。
5.2.2.7. 5.2.2.8. 5.2.2.9.
点击 Zero-Base(调零-基线) 图标。 点击 Run(运行) 图标。 点击 Proceed (运行)按键。
5.2.2.10. 在时间或动力学实验中，可以选择 Synchronization Start(同步启动)
选项，通过 Tools > Opt ions >System Settings >页使该项可选。 将仪器设置为同步启动后，数据的采集将在点击 OK 按键或倒计时结束时立即开始。下面即为运行中同步/倒计时启动对话框实例：
5.2.2.11. 如果需要，在第一样品池中加入反应试剂，关闭样品仓仓盖，点
击 Proceed 按键。
5.2.2.12. 将测量 Cell 控制器的第一个样品，后将下一个样品移动到位 将
得到下一个样品反应的提示。
5.2.2.13. 采集过程中的任何时候，按 Pause (暂停)图标 或选择 Command
菜单中的 Pause，将中断采集。
5.2.2.14. 要是采集时间未结束，仪器将继续采集，只是不显示出来，直到
再次按动 Pause 图标，数据采集将按照方法参数继续进行。
5.2.2.15. 继续此过程，直至全部样品测试完成。 5.2.3． 扫描数据处理
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5.2.3.1. 5.2.3.2. 5.2.3.3.
点击菜单栏中的 Math，从菜单或子菜单中选取运算操作。 操作窗口即在工作区域打开。
在库区中，指到要处理的 batch, sample 或 result，按住鼠标左键，把数据拖到运算窗口的 Batch, Sample or Result 位置。当数据被拖动时，它的影像在库区中将伴随光标，之后随光标同一起转为带有斜杠的黑色圆环；到达数据可放置区域时，光标与代表 batch, sample 或 result 数据的符号复原，释放鼠标按键时就把数据放到该处。
若需要, 设置 Math 窗口中的参数。比如进行标峰 ( Peak Pick) 时，其窗口中有 3 个下拉菜单：
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点击数值区域时，将打开输入数值的数字小键盘，输入数值。在Sensitivity 下拉菜单中选择 Manual 的话，3 个灵敏度参数就变成可选的。
5.2.3.4.
在Scan graph 中可以看到光谱数据的计算或修正结果。
a.将 batch、sample或cycle从库区拖放到Scan Graph窗口。 b.点击cycle来查 Peak Pick后的cycle结果。
c.从 Graph 菜单选择需要的标记方式,在Graph工具栏(图谱工具栏) 点击 Toggle Labels(标记切换)按键开关标记。
5.2.3.5.
与功能相关的，有可能从 Results Table(结果表格) 显示结果。从Math 窗口的下拉菜单，可以选择将结果以波长或吸光度的顺序排列。
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5.2.4． 固定波长 (Fixed)应用 。 5.2.4.1. 5.2.4.2.
点击本图标启用 Fixed 应用 。 设置Fixed 方法窗口中的参数。
a.依照所选的 Fixed 方法，可同时测量10个不同波长。点击方框，然后用打开的屏幕数值小键盘或 PC的键盘输入波长数值，没有顺序要求。
b.Data Mode(数据方式)在 Absorbance 与%T之间选择。 c.Fixed Mode 的设置在 Normal(普通), Arithmetic Combination of 2 wavelengths(双波长相关的计算) 和 Peak Height(峰高)之间选择。Peak Height 方式中要输入峰值和峰两侧起点的波长值。
d.设置方法余下的参数。
e.设置样品的个数,若需要，可以点击 Details(详细资料)按键，编
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辑样品名称和详情描述，作为方法的组成部分。通过双击样品名称来编辑它。
f.要使用 AutoSave(自动保存)，点击 On/Off 方框到 On，输入文件名的词根和号码。
g.点击 Lock(锁定) 按键，并按提示输入密码，即将方法锁定，之后解锁需重输密码。
5.2.4.3.
使用样品池控制器时，refer to “样品池控制器方法设置”。 a.点击 Zero-Base(调零-基线)图标。
b.当 Present Reference(s)(提供参比)对话框出现时，将参比放置到光路或对应的附件样品位置上，盖好样品仓盖，点击Proceed (运行)按键。
c.运行样品采集，点击 Run(运行)图标。将打开 Present Sample(提供样品)对话框，如果样品名及其描述还未输入，此时也可以输入。将样品放置到光路或对应的附件样品位置上，盖好样品仓盖。
d.点击 Proceed (运行) 按键。
5.2.5． 运行定量方法校正（在样品浓度能够测量之前，必须用已知浓度溶液
进行校正）。 5.2.5.1. 5.2.5.2. 5.2.5.3.
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点击应用工具栏的 Quant(定量)图标，开始 Quant 应用。 在 Quant方法窗口点击 Calibration Method(方法校正)标签。 在 Calibration Method 页参数中输入所需的数值。
5.2.5.4. 5.2.5.5. 5.2.5.6.
5.2.5.7. 5.2.5.8.
5.2.5.9. 5.2.5.10.5.2.5.11. 从下拉菜单中选择所需的 Quant mode。 若需要，输入所需的波长和系数。
设置自动坐标(Auto Scale)：选用扫描方法中的自动坐标按钮（任何与图形相干的应用方法都有此按钮），将在数据获取过程结束后，自动改变坐标以显示完整的采集到的数据。如果不选这个项目，在数据获取过程结束后的吸光度坐标的范围，将保持在所指定的数值。
设置方法余下的参数。
输入标样(Standards)个数(1到50)和每个标样的重复 (replicates) 次数(1 to 3) 。
点击 More 按键，打开第二个方法参数窗口。在这个窗口里能选择初始曲线拟合(Initial Curve Fit)，浓度单位，小数点后位数，在“Valid Until”中指定校正方法有效（使用）期，“ Flier Detection”在 On/Off 间切换，也可能有参比阈值(Reference Threshold)和最大吸收值(Maximum Absorbance)，还能选择相关系数的高低限。
点击 Close 按键返回 Calibration Method 窗口。
点击 “Description” 按键，以输入校正方法的描述。点击 Lock(锁
定) 按键，并按提示输入密码，即将方法锁定，之后解锁需重输密码。
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5.2.5.12. 在 Standards（标样）表格中，输入各标样的浓度。
5.2.5.13. 要是执行校正中用到样品池控制器 ，其设置参考 “样品池控制器
5.2.5.14. 5.2.5.15. 5.2.5.16. 5.2.5.17. 5.2.5.18. 方法设置” 的有关指导。
要是执行校正中用到sipper 附件，其设置参考 “Sipper方法设置”
的有关指导。
点击 Zero-Base 图标。
点击主菜单栏(Main 菜单栏)的Quant，再点击Calibrate 进行初步
的校正。
当校正完成之后，测量结果将按照初步拟合(Initial Fit)，在Quant
Graph窗口画出拟合的定量曲线。
在 Standards Table 中将显示测到的吸光度值、所选拟合曲线的等
式、相关系数和残留总和。
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5.2.5.19. 若需要，拟合曲线可以从 Quant 菜单或用 Graph 工具栏的拟合
图标进行更换。
5.2.5.20. 通过点击 File > Save > Calibration 或从右键点击目标时出现的
上下文菜单中直接点击 calibration 方法，经过普通的 windows对话框，保存较正好的定量方法。
5.2.6． 样品测试 5.2.6.1.5.2.6.2.5.2.6.3.5.2.6.4.5.2.6.5. 点击应用工具栏的 图标启动 Quant 应用。
方法设置在 Quant Method 窗口中，其中含有采样(Sample)方法页和校正 (Calibration)方法页。
在样品测量开始前，要先提供有效的校正方法，要调用校正方法，从 File 菜单选择 Open > Calibration。
要建立新的采样方法，点击 Method 窗口中的 Quant Sample Method 页。
调用已存的方法，点击 File 并从中选择 Open > Sample Method，或在 sample Method 窗口点击右键。
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5.2.6.6. 需要的话，调用或设置样品池控制器和 Sipper 方法，温度控制及搅拌等。
5.2.6.7. 5.2.6.8.
点击 Zero-Base(调零-基线)图标。
当 Present Reference(s)(提供参比)对话框出现时，将参比放置到光路或对应的附件样品位置上，盖好样品仓盖，点击 Proceed (运行)按键。
5.2.6.9. 运行样品采集，点击 Run(运行) 图标。
5.2.6.10. 当方法运行后，结果及出现在 Results(结果)窗口，数据列在库区，
如果需要，通过窗口滚动来查看所有数据每批( batch)结果放置到 Resu lts 窗口各自的表格页之中。
5.2.6.11. 要保存批结果，点击 File，再从 resulting 菜单选择 Save 或Save
As > Batch of results；或右键点击库区中的 batch， 选择其中 Save batch 或 Save As >Batch。
5.2.7． 打印报告 5.2.7.1.
可以从 File 菜单选择打印(Print)命令，或用右键点击可打印目标后选择打印或打印预览，将应用方法或结果等单独地打印出来。
5.2.7.2. 5.2.7.3. 5.2.7.4.
当前上下文中不能打印的项目内容呈现灰色。
打印预览(Print Preview)用于在实际打印前察看打印效果。 使用打印设置(Print Setup)选择纸张尺寸、打印方向和其它打印选项。
5.2.8． 结束 5.2.8.1.
退出VISIONpro 快捷图标工作站，关闭计算机。
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5.2.8.2. 取出比色皿，用蒸馏水及无水乙醇，分别冲洗比色皿后，将比色皿浸泡于无水乙醇内。
5.2.8.3. 做好仪器使用记录，整理台面。
5.2.9． 备注 5.2.9.1.
测量时注意样品室盖好，应关严，样品室未盖好易引入过多的杂散光，使吸收度读数下降。
5.2.9.2.
用于浸泡比色皿的乙醇溶液需定期更换，以保证比色皿的保存环境。
5.2.9.3. 5.2.9.4. 5.2.9.5. 5.2.9.6.
6. 相关文件和记录
6.1.
相关文件
6.1.1． 《UV-VIS说明书》 6.2.
相关记录
记录名称 紫外分光光度计使用记录 开关样品室时动作要轻缓。
不要在仪器上方操作，避免样品倾洒污染仪器表面、损坏仪器。 需定期更换变色硅胶。 厂家：赛默飞公司。
记录代号 7. 附录
无 8. 变更记载
编号
生效日期 本次变更原因、依据及详细变更内容 首版文件 Page 14 of 14
