FISH技术
FISH技术：荧光标记的原位杂交技术, 有一种尿液脱落细胞学的原位荧光杂交技术，简称FISH技术，可以早期发现膀胱癌，这项技术的敏感性达86%。
1974年Evans首次将染色体显带技术和染色体原位杂交联合应用，提高了定位的准确性。20世纪70年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交，即FISH技术。1981年Harper成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上，标志着染色体定位技术取得了重要进展。20世纪90年代，随着人类基因组计划的进行，由于绘制高分辨人类基因组图谱的需要，FISH技术得到了迅速的发展和广泛应用。
1．原理
FISH(fluorescence in situ hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变性-退火-复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。
2．实验流程
FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧光显微镜检测→结果分析。
3．特点
原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和非放射性标记。用同位素标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高，可以通过延长曝光时间加强信号强度，故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等。采用荧光标记系统则可克服这些不足，这就是FISH技术。FISH技术作为非放射性检测体系，具有以下优点:1、荧光试剂和探针经济、安全；2、探针稳定，一次标记后可在两年内使用；3、实验周期短、能迅速得到结果、特异性好、定位准确；4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列，其灵敏度与放射性探针相当；5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时检测多种序列；6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化，也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构。
缺点：不能达到100%杂交，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。
4．应用
该技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位，而且也可用于未克隆基因或遗传标记及染色体畸变的研究。在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。
2.3 FISH检测在膀胱癌的应用
目前，大部分膀胱癌患者确诊时已属晚期。因而治疗效果不好，预后较差。因此，膀胱癌的早期诊断、早期治疗显得尤为重要。细胞内染色体数目或结构的异常是肿瘤发生发展的根本原因，而FISH技术主要用于染色体数目和结构畸变的研究。因此，可应用FISH检测膀胱癌的染色体畸变，从而为膀胱癌的早期诊断及治疗方案的选择提供可靠的依据。
以往研究表明，在膀胱癌的发生发展过程中发生了非随机的染色体改变，包括数目异常和结构畸变[22]。最常见的染色体异常主要有3、4、7、8、9、11、 17、l8、20号及Y染色体等的结构和数目改变。国外有研究显示，FISH技术在膀胱癌的早期诊断、预后评估及复发监测中具有重要应用的价值。
