维普资讯 http://www.cqvip.com ・865・ ・论著・ 丹红注射液对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制 周志群,罗娟,李琼 【摘要】 目的观察丹红注射液对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法将实验用6个月龄雄性 SPF级GK大鼠随机分为B组和c组,喂食高脂饲料,制备糖尿病肾病模型。同时选取正常Wistar大鼠为A组。c组 大鼠用丹红治疗8周。观察大鼠实验中的一般情况;比较大鼠血糖、糖化血红蛋白、尿素氮、血肌酐、内生肌酐清除 率、24 h尿蛋白排泄率、过氧化物酶及超氧化物歧化酶。结果 (1)实验过程中只有B组大鼠死亡3只,其余两组 均无死亡情况。(2)B组和c组大鼠血糖、尿素氮、血肌酐、尿清蛋白排泄率、肌酐清除率、糖化血红蛋白、过氧化 物酶及超氧化物歧化酶与A组比较,差别有统计学意义(P<0.05);C组大鼠除血糖外,其他指标与B组比较,差 别亦有统计学意义(P<0.05)。结论丹红可以改善糖尿病肾病大鼠肾功能,可能是通过抑制氧化糖基化对肾脏起 到保护作用。 【关键词】 丹红;糖尿病肾病;肾脏;机制 【中图分类号】R 587.24 R 28.5 【文献标识码】A 【文章编号】1007—9572(2008)05B一0865—03 Protective Effect of Danhong Injection Oil Renal Function and Its Mechanism in Diabetic Nephropathy Rats ZHOU Zhi —qun,LUO Juan,LI Qiong.Department of Kindey,Afilfiated Hospital of Hunan Agriculture Academy of Sciences,Changsha 410125,China 【Abstract】 Objective To observe the protective effect of Danhong injection on renal and its mechanism in rats with di— abetic nephropathy(DN).Methods Six—month—old special pathogen free(SPF)GK rats were randomized into Group B nd Group C to aprepare DN models with hi【gh fat diet,and Wistr rats were chosen asa Group A.Group C were given an 8一month treatment with Danhong to observe the general health state of the experimental rates;We compared blood glucose,glycosylated hemoglobin,urea ni ̄ogen,serum creatinine,creatinine clearance,24一hour excretory rate of urine protein,peroxydase and erythrocuprein、Results (1)Diabetes mellitus and renal function lesion occurred in Group B and Group C. (2)Danhong had no effect on the blood gloucose levels,but could improve the general health state,decrease blood urea ni ̄ogen,serum cre— atinine,glycosylated hemoglobin and the 24一hour excretory rate of urine protein,and increase the clearance rates of creatinine and malonaldehyde and those of creatinine and erythrocuprein.Conclusion Danhong Can improve renal function of DN rats and may play a role in protecting kidney by inhibiting oxidative stress and glycosylation. 【Key word】Danhong;Diabetic nephropathies;Renal;Mechanism 仪(国营二六二厂生产)。 目前,糖尿病肾病(dibetaic nephropathy,DN)的发病机 制尚未完全阐明。近年来,自由基防御功能紊乱和脂蛋白非酶 丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(南京 建成生物公司)和丹红注射液(济南鲁鹰药业有限公司,国 糖基化在糖尿病肾病发病中的作用越来越受到人们的重 视 。抑制氧化糖基化可延缓或减轻糖尿病肾脏并发症,故 药准字Z20026866,经湖南中医药研究院制备10倍浓缩液)。 1.3方法 我们结合丹红(danhong)的作用机制,提出丹红治疗糖尿病 肾病的设想,探讨丹红对糖尿病肾病的保护作用及其相关机 制。 1材料与方法 1.3.1动物建模大鼠适应性饲养1周后,选取血糖值在 11.1 mmol/L以上的GK大鼠,同时喂食高脂饲料(普通饲料 88.2%,精炼猪油10.0%,胆固醇1.5%,猪胆盐0.3%)。 选择6个月龄、雄性的SPF级自发性糖尿病GK 1.1动物正常Wistar大鼠(A组)喂食普通饲料2个月。取部分大鼠 肾脏行病理检查,确定糖尿病肾病模型成功后 ,除去造模 失败及死亡大鼠,将20只糖尿病大鼠纳入本实验。 1.3.2分组将糖尿病大鼠按随机数字表随机分为糖尿病肾 大鼠25只及正常Wistr大鼠10只(均购买于上海斯莱克 aSLAC实验动物有限责任公司),按2~3只/笼饲养于通 气笼具(IVC)系统内。 1.2仪器和试剂美国强生稳豪型血糖仪(美国强生公司), 病组(B组,10只)和糖尿病肾病丹红治疗组(C组,10 只)。C组大鼠在尾静脉注射丹红2 ml・kg~・d~,均连续给 药8周。 日丽自动生化仪(日本日丽公司),FJ一2008型免疫细胞计数 基金项目:湖南省中医药管理局课题(2004B一62) 1.3.3标本采集第8周实验终止时,3组大鼠在禁食8 h的 作者单位:410125湖南沙市,湖南省农业科学院医院肾内科 (周志群);中南大学湘雅医院内科(罗娟,李琼) 基础上,用代谢笼收集24 h尿液,测定尿清蛋白(UAE)含 量。动物经水合氯醛麻醉后称体重,股动脉放血5 rnl测大鼠 维普资讯 http://www.cqvip.com 血糖、尿素氮、血肌酐,计算内生肌酐清除率。然后在背部做 纵形切口,取出肾脏,右肾称重,左肾脏反复灌洗至发白,剔 除包膜,横断切取约0.5 m 柱状体,固定12 h,石蜡包埋, 切片,HE染色。 1.4观察指标 (1)动物一般情况:每日观察大鼠饮食饮 水量、精神状态、活动情况、大便性状及尿量,、隔日测体重并 加以记录。连续2 d记录每只大鼠的饮水量、尿量(用代谢笼 收集尿液),取其平均值作为最终数据。(2)肾脏湿重:去包 膜后用精密天平称重。(3)生化指标:用全自动生化仪测血 糖、尿素氮、血肌酐。(4)尿清蛋白排泄率(urinary albumin excretion,UAE):收集24 h尿液,用二甲苯防腐,混匀后取2 ml用免疫细胞记数仪测定。(5)肾小球滤过率(GFR):以内 生肌酐清除率为代表,GFR=(尿肌酐×尿量)/血肌酐。 1.5统计学方法采用SPSS 1Z 0软件进行统计学分析。计 图1 A组大鼠HE染色 量资料用( -4-s)表示,多组间均数比较采用F检验,组间 Figure 1 HE dyeing of rats in group A 两两比较采用q检验。P<0.05为差别有统计学意义。 2结果 2.1造模过程中大鼠一般情况观察糖尿病GK大鼠外观形 态与普通Wistar大鼠无明显区别,仅有毛色不同,前者躯干部 呈浅棕黄色,头部、四肢呈白色。实验过程中只有B组大鼠 死亡3只,其余两组均无死亡。C组大鼠较B组大鼠精神状况 好,无白内障及尾、足坏死,动作自如,反应灵敏,但较A 组大鼠稍差。 2.2各组大鼠尿量、体重和肾重/体重比较B组和C组大鼠 尿量、体重、肾重/体重与A组比较,差别有统计学意义(P <0.05);C组大鼠尿量、体重、肾重/体重与B组比较,差别 亦有统计学意义(P<0.05,见表1)。 2.3 3组大鼠各生化指标比较B组和C组大鼠血糖、尿素 氮、血肌酐、尿清蛋白排泄率、肌酐清除率、糖化血红蛋白、 过氧化物酶及超氧化物歧化酶与A组比较,差别有统计学意 图2 B组大鼠HE染色 义(P<0.05);C组大鼠除血糖外,其他指标与B组比较, Figure 2 HE dyeing of rats in group B 差别亦有统计学意义(P<0.05,见表2)。 2.4各组大鼠肾组织HE染色检查结果HE染色光镜下显 示:A组大鼠肾小球及肾小管问质未见明显的病理改变。B组 大鼠肾组织可见肾小球明显增大,肾小球细胞增生,散在肾小 管上皮细胞肿胀变性、脱落,肾小球毛细血管基底膜弥漫性增 厚,肾小动脉内膜增生,管腔狭窄。C组大鼠上述病理改变均 有不同程度的减轻,间质炎症不明显(见图1~3)。 表1 3组大鼠尿量和体重及肾重/体重比较( ±s) Table 1 Changes of urine volume,body weight,and ratio of kidney to b0ay weight in three groups 图3 C组大鼠HE染色 Figure 3 HE dyeing of rats in group C 注: 与A组比较,P<0.05; 与B组比较,P<0.05 维普资讯 http://www.cqvip.com ・867・ 表2 3组大鼠各生化指标比较( ±S) Table 2 Comparison of each observation indexes in three groups 注: 与A组比较,P<0.05; 与B组比较,P<0.05 3讨论 物酶,升高超氧化物歧化酶,改善肾功能,改善肾功能机制不 是通过降低血糖而发挥作用,可能是通过抑制肾脏氧化应激及 糖尿病时,以肾组织中糖代谢紊乱为主的多种因素造成肾 组织中包括过氧化氢(H O )、超氧阴离子(0 )和羟自由 基(OH一)在内的反应性氧化产物(ROS)过多。MDA是脂 抑制AGEs的形成而起作用,具体信号通路机制有待进一步研 究。 参考文献 1 Chander PN,Gealekman O,Brodsky SV,et aL Nephmpa ̄y in Zuck— er diabetic fat rat is associated with oxidative and nitrosative stress:pre— 质过氧化产物,其水平升高可间接反映机体内自由基和脂质过 氧化增强。SOD是体内的重要抗氧化酶。SOD催化超氧阴离 子歧化生成H O ,后者在过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽一 过氧化物酶(GSH—PX)的作用下转变成水,从而减少氧自 由基在体内蓄积增多。检测MDA、SOD等指标可以了解肾脏 组织细胞受损或修复的程度。正常状态下,肾脏有完整的抗氧 化酶保护系统,机体内自由基、过氧化脂质和抗氧化酶之间保 持着动态平衡。Antonio等 研究发现,肾脏抗氧化防御机制 的减弱可能在糖尿病肾病的发生、发展中起重要作用。糖尿病 患者长期的高血糖状态使非酶糖基化作用增强,并在此过程中 产生大量自由基,使蛋白质、核酸、脂类发生交联,使生物膜 变性,细胞衰老或死亡。有研究表明,在未出现肾脏形态学改 变之前的糖尿病早期,自由基代谢明显紊乱,脂质氧化水平显 vention by chronic therapy with a pemxyllitIite scavenger ebselen[J].J Am Soc Nephrol,2004,15(9):2391—403. 2方敬爱,李玉光.益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响 [J].中国中西医结合肾病杂志,2008,9(1):14—18. 3 Antonio C,Anna M,Franceschina M,et a1.Defective intracellular ntaioxidant enzyme production in type 1 diabetic patients wih nephmpa—t thy[J].Diabetes,2000,49(12):2170-2178. 4 Tilton RG,Chang K,Allion W,et as1.Glycosylation induced increa— sesin bloodflowand125I—albamn permeation:role ofnitric oxideand superoxide(abstract)[J].FASEB,1993,7(partII):A905. 5 Kishida M,Urakaze M,Takata M,et a1.PGE1inhibit the expression 著升高 。脂质过氧化物可直接损伤基底膜和血管内皮,导 致肾功能障碍。有文献报道,自由基可能还参与糖尿病早期肾 小球血流动力学的变化过程 。近年逐渐增多的证据表明, 糖基化和氧化应激反应之间关系密切:氧化作用促进糖基化反 应和糖基化终末产物(terminal glycosylation dead end product, AGEs)的形成;AGEs的形成过程及其受体介导细胞效应时可 产生自由基,引起氧化应激 ,两者可以形成恶性循环,故 组织蛋白自身氧化和糖基化在糖尿病并发症中占有重要地 位 。 of PAI一1mRNAinduced byTNF—aphain humanmesangila ceUs[J]. Exp Clin Endocrin Diabetes,2005,113(7):365. 6 Wautier JL,Schmidt AM.Protein glyeation:a farm link to endothelial cell dysfunction[J].Circ Res,2004,95(3):233—238. 7 Bohlender JM,Franke S,Stein G,et a1.Advanced glycation end productsandthe kidney[J].Am J PhysiolRenal Physiol,2005,289 (4):F645一F659. 8 Gross JL,de Azevedo MJ,Silveim SP,et a1.Diabetic nephropathy: diagnosis,prevention,and treatment[J].Diabetes Care,2005,28 (1):164—176. 9 Danielson KK,Palta M,Allen C,et a1.The association ofincreased total glycosylated hemoglobin levels wih deltayed age at menarche in 尿清蛋白排泄率是糖尿病肾病诊断的金标准 ,延缓或 减少尿清蛋白排泄率可以延缓糖尿病肾病的发生、发展。糖化 血红蛋白水平在一定程度上反应体内AGEs的水平 。 丹红注射液主要成分有丹参酮、丹参酸、丹参酚酸、红花 young women wih ttype 1 diabetes[J].J Clin Endocfinol Meta1), 2005,90(12):6466—6471. 红色素、红花酚甙和儿茶酚花等,具有保护血管内皮、促进血 管再生、抗血凝等作用 。众多研究证实丹参能抑制血小板 和中性粒细胞的黏附、聚集及氧自由基的产生,红花具有活血 化瘀的疗效 ,可能延缓糖尿病肾病的发展。本研究亦证实, 病程8周的GK大鼠出现蛋白尿、糖尿病肾病,丹红不仅能减 轻糖尿病大鼠24 h尿蛋白含量和肾小球肿大,而且能降低尿 10赵环宇.丹参粉针剂治疗2型糖尿病肾病疗效观察[J].中国基 层医药,2006,13(12):2050. 11钟学军,刘国平,许刚,等.丹红注射液对老年肺心病患者血小 板聚集率的影响[J].实用医药杂志,2006,23(4):482. (收稿日期:2008—03—18) (本文编辑:刘莉) 素氮、血肌酐、内生肌酐清除率、糖化血红蛋白和脂质过氧化