mir-595在上皮性卵巢癌组织中的表达及其预后评估的价值

doi:10.3969/j.issn.1000鄄484X.2019.23.012

miR鄄595在上皮性卵巢癌组织中的表达及其预后评估的价值淤

苏红娥摇钟庆吉摇符春丽摇薛万兴摇林摇元摇(海南西部中心医院妇产科,那大571799)

摇摇中图分类号摇R392摇摇文献标志码摇A摇摇文章编号摇1000鄄484X(2019)23鄄2873鄄05

[摘摇要]摇目的:探讨miR鄄595在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达及其预后评估的价值。方法:选取2013年1月至2015年12月海南西部中心医院收治的行手术治疗的EOC患者150例,采用实时荧光定量PCR(RT鄄PCR)法检测卵巢癌组织和癌旁正常组织中miR鄄595的表达水平。通过ROC曲线确定miR鄄595的截断值,并以此为标准将EOC患者分为高miR鄄595组和低miR鄄595组,对两组临床病理特征进行比较。应用Kaplan鄄Meier法绘制生存曲线,采用单因素及多因素COX回归模型分析影响EOC患者术后生存和复发的危险因素。结果:EOC组织miR鄄595表达水平(2郾80依0郾74vs6郾93依1郾58)明显低于癌旁正常组织(t=13郾835,P<0郾01)。miR鄄595的低表达与FIGO分期、病理分级、深肌层浸润及淋巴结转移有关(P<0郾05)。Kaplan鄄Meier分析与Log鄄rank检验结果显示,miR鄄595低表达与EOC患者生存期短有关(P<0郾01)。多因素COX回归模型分析显示,FIGO分期[HR(95%CI)=2郾726(2郾105~3郾824)]、淋巴结转移[HR(95%CI)=3郾115(2郾583~4郾318)]及miR鄄595<2郾68[HR(95%CI)=3郾748(3郾204~6郾725)]是影响EOC患者术后生存和复发的危险因素(P<0郾05)。结论:miR鄄595低表达与EOC患者生存期短有关,有望作为预测EOC预后的新型标志物。

[关键词]摇上皮性卵巢癌;miR鄄595;预后

ExpressionofmicroRNA鄄595inepithelialovariancanceranditsprognosticvalue

SUHong鄄E,ZHONGQing鄄Ji,FUChun鄄Li,XUEWan鄄Xing,LINYuan郾DepartmentofObstetricsandGynecology,CentralHospitalofWesternHainan,Nada571799,China

[Abstract]摇Objective:ToinvestigatetheexpressionofmicroRNA鄄595inepithelialovariancancer(EOC)anditsprognosticvalue郾Methods:150patientswithEOCtreatedsurgicallyinHainanWesternCentralHospitalfromJanuary2013toDecember2015wereselected郾Real鄄timefluorescencequantitativepolymerasechainreaction(RT鄄PCR)wasusedtodetecttheexpressionofmiR鄄595inovariancancertissuesandadjacentnormaltissues郾ThetruncatedvalueofmiR鄄595wasdeterminedbyROCcurve,andEOCpatientsweredividedintohighmiR鄄595groupandlowmiR鄄595groupaccordingtothetruncatedvalue郾Theclinicopathologicalcharacteristicsofthetwogroupswerecompared郾SurvivalcurvewasdrawnbyKaplan鄄Meiermethod郾RiskfactorsaffectingsurvivalandrecurrenceofEOCpatientsafteroperationwereanalyzedbysingle鄄factorandmulti鄄factorCOXregressionmodels郾Results:TheexpressionlevelofmiR鄄595inEOCtissues(2郾80依0郾74vs6郾93依1郾58)wassignificantlylowerthanthatinadjacentnormaltissues(t=13郾835,P<0郾01)郾ThelowexpressionofmiR鄄595wasassociatedwithFIGOstage,pathologicalgrade,deepmuscleinvasionandlymphnodemetastasis(P<0郾05)郾TheresultsofKaplan鄄MeieranalysisandLog鄄ranktestshowedthatthelowexpressionofmiR鄄595wasrelatedtotheshortsurvivaltimeofEOCpatients(P<0郾01)郾MultivariateCOXregressionanalysisshowedthatFIGOstage[HR(95%CI)=2郾726(2郾105-3郾824)],lymphnodemetastasis[HR(95%CI)=3郾115(2郾583-4郾318)]andmiR鄄595<2郾68[HR(95%CI)=3郾748(3郾204-6郾725)]wereindependentriskfactorsforsurvivalandrecurrenceofEOCpatients(P<0郾05)郾Conclusion:Thelowexpressionofmi鄄croRNA鄄595isrelatedtotheshortsurvivaltimeofEOCpatientsandmaybeanewmarkerforpredictingtheprognosisofEOC郾

[Keywords]摇Epithelialovariancancer;miR鄄595;Prognosis

摇摇上皮性卵巢癌(Epithelialovariancancer,EOC)

程中的基因中起到重要作用,其中miR鄄595在多种恶性肿瘤中异常表达,并能通过多种信号通路参与恶性肿瘤的发生、发展[2,3]。本研究通过检测EOC组织及癌旁正常组织中miR鄄595表达水平,分析其表达与EOC患者术后复发和生存的关系,旨在为评估EOC预后及靶向治疗提供依据。

是卵巢恶性肿瘤的主要病理类型,其发病隐匿,病情进展迅速,病死率较高,对女性的生命健康造成极大的危害[1]。目前,仍没有理想的生物学指标可以用于EOC的早期诊断、指导治疗及预后评估。近期的研究发现,微小核糖核酸(microRNA,miRNA)在细胞分化、增殖、控制细胞周期、凋亡和新陈代谢等过

淤本文为海南省医药卫生科研基金项目(17A610042)。

究,E鄄mail:28191338@qq郾com。

1摇资料与方法

1郾1摇临床资料摇选取2013年1月至2015年12月海南西部中心医院妇产科收治行手术治疗的EOC患者150例,年龄30~76岁,平均(54郾30依10郾72)

作者简介:苏红娥,女,主治医师,主要从事临床妇产科疾病诊治研

·2874·中国免疫学杂志2019年第35卷

岁。纳入标准:淤符合国际妇产科联合会(FIGO)分类标准和WHO分级标准,且经病理确诊为EOC并适合手术治疗者;于能配合本次研究及病历资料完整者。排除标准:淤随访过程中失访,病历资料不完整者;于术前已行放疗、化疗或激素治疗者;盂术前有急慢性感染性疾病、血液系统疾病、自身免疫性疾病及其他恶性肿瘤。本研究获得医院伦理委员会批1郾2摇方法

准,并与患者或家属签署知情同意书。

参基因(U6)的差值,2-驻驻Ct表示实验组与对照组基1郾3摇统计学方法摇采用SPSS20郾0统计软件分析,计量资料以x依s表示,两组间比较采用成组t检验。计数资料采用字2检验。采用Kaplan鄄Meier法进行生存分析并绘制生存曲线,生存因素比较采用Log鄄rank检验。应用COX回归模型对所有参数进行多因素分析。P<0郾05为差异有统计学意义。

因表达的差异倍数。

1郾2郾1摇研究方法摇采用前瞻性研究方法对150例患者进行随访,随访起始时间为患者自术后第1天的时间,通过电话或门诊等方式对患者进行调查,截止时间survival,OS)为2018年12月31日。无进展生存时间定义为术后第总生存时间(Overall(Progression鄄free1天至患者死亡的时间survival,PFS)定义。为术后第1天起,未发生复发、原发器官肿瘤转移及其他原因引起死亡的时间。纳入本研究的变量包括患者年龄、绝经情况、临床分期、病理类型、病理分级、1郾深肌层浸润2郾2摇标本采集及、淋巴转移RNA、复发及生存时间等提取摇癌组织取肉眼所见。

3的明显肿瘤组织cm的良性卵巢组织,癌旁正常组织取距离肿瘤边缘氮罐100mg,内迅采用液氮研磨法将组织磨成粉末速冷冻后,置所取组织标本离体后置于液-80益保存。取标本约约1ml的Trizol裂解组织试剂,按Trizol,试剂说明然后加入书提取总1郾2郾3摇miR鄄595RNA。

逆转录及实时荧光定量PCR摇应用TaqManMicroRNAReverseTranscription试剂盒逆15转录已定量的引滋l:5物,滋l0郾RNARNA,15滋l模板选用100,3mmol滋lU6U6作为内参/L及脱miRNA,反应体系为环氧核糖特异性茎(dNTPs),1郾00滋l逆转录酶(50U/滋l),1郾50核滋l苷10伊酸反转录缓冲液4郾3016滋l无菌,0郾三蒸19水滋l。RNase反应抑制剂(20U/滋l),

放置保存min,42益参数为:16益反应,每个反应均为反应30min,85益1个循环反应。5在min,4益ABI7500恒温型荧光定量PCR仪上进行实时荧光定量聚合酶链反

应PCR)。(Real鄄time(20伊),10反应体quantitative系polymerasechainreact,RT鄄1郾33滋l反转录产物滋lTaqMan为20cDNA,7郾通滋l:1用混滋l67合引滋l物物无核酸酶的水溶及液探(针2伊Mix),扩增条件为:95益预变性10min1个循环,95益变性。采用15s、60益2-驻驻Ct复性法计算60smiR鄄595进行45个循环,实验重复3次。

驻Ct=Ct,其中驻Ct的相对表达水平为Ct靶基因与,Ct其中目的基因-CtU6内

2摇结果

2郾1摇EOC组织和癌旁正常组织miR鄄595表达水平比较摇EOC组织miR鄄595表达水平(2郾80依0郾74)明显低于癌旁正常组织(6郾93依1郾58),差异有统计学意义(t=13郾835,P<0郾01)。见图1。

2郾2摇确定miR鄄595的最佳界值摇根据miR鄄595绘595制EOC取2郾患者术后复发和生存的68时,约登指数最大。以ROC2郾68曲线为,miR鄄595当miR鄄的最佳截点,其评估EOC患者术后复发和生存的敏under感度为curve,AUC)81郾6%,特异度为为0郾814。75郾2%见图,曲线下面积2。

(Area2郾3摇高miR鄄595组与低miR鄄595组EOC患者的临床病理特征比较摇以miR鄄595=2郾68为界值,将150例EOC患者分为高miR鄄595组(miR鄄595逸2郾68,nmiR鄄595=68),低深肌层浸润及淋巴结转移比较组与低miR鄄595miR鄄595组(miR鄄595组的FIGO<2郾分期68,n、=病理分级82)。高、(直径比较P<0郾05);,差异有统计学意义,差异无统计学意义而两组的年龄、绝经(P、>0郾组织学类型及肿瘤05)。见表1。2郾4摇miR鄄595表达与EOC患者术后生存和复发的图1摇EOC组织和癌旁正常组织miR鄄595表达水平比较

(x依s)Fig.1摇

ComparisonofexpressionlevelsofmiRNA鄄595betweenEOCandnormaltissuesadjacenttocancer(x依s)

苏红娥等摇miR鄄595在上皮性卵巢癌组织中的表达及其预后评估的价值摇第23期·2875·

关系摇150例EOC患者随访时间10~68个月,中位随访时间27郾5个月。生存分析显示,低miR鄄595组患者总生存率明显低于高miR鄄595组差异有统计学

意义(46郾5%vs66郾3%;Log鄄rank字2=7郾914,P<显低于高miR鄄595组,差异有统计学意义(24郾2%vs53郾6%;Log鄄rank字2=10郾627,P<0郾01),见图4。

0郾01),见图3;低miR鄄595组患者无进展生存率明

图2摇miR鄄595绘制EOC患者术后复发和生存的ROC

曲线Fig.2摇

miR鄄595plotsROCcurvesofrecurrenceandsurvivalinEOCpatients

图3摇高miR鄄595组与低miR鄄595组EOC患者总生存时

间曲线比较

Fig.3摇TotalsurvivaltimecurvesofEOCpatientsinhigh

andlowmiR鄄595groups

表1摇高miR鄄595组与低miR鄄595组EOC患者的临床病理特征比较

Tab.1摇ComparisonofclinicopathologicalfeaturesofEOCpatientsbetweenhighmiR鄄595groupandlowmiR鄄595group

Clinicopathological

Age(year)逸60YesNo<60features

n

group(n=68)46(44郾2)22(47郾8)29(46郾8)39(44郾3)27(35郾1)41(56郾2)44(47郾8)24(41郾4)32(38郾1)36(54郾5)38(39郾2)30(56郾6)26(61郾9)42(38郾9)37(43郾0)31(48郾4)LowmiR鄄595

group(n=82)58(55郾8)24(52郾2)33(53郾2)49(55郾7)50(郾9)32(43郾8)48(52郾2)34(58郾6)52(61郾9)30(45郾5)59(60郾8)23(43郾4)16(38郾1)66(61郾1)49(57郾0)33(51郾6)HighmiR鄄595

字20郾166

P0郾683

104466288777392588466975342

Menopause0郾00郾767

FIGOstaging玉-域芋-郁

6郾7320郾009

MucinousadenocarcinomaPathologicalgrading

G1+G2G3

Serousadenocarcinoma

Histologicaltypes0郾5970郾440

4郾0360郾045

Deepmyometrialinfiltration

逸1/2YesNo<5<1/2

4郾2010郾040

Lymphnodemetastasis6郾40郾011

Tumordiameter(cm)

逸5

10886

0郾4340郾510

·2876·中国免疫学杂志2019年第35卷

表2摇影响EOC患者术后生存和复发的单因素及多因素COX回归分析

Tab.2摇UnivariateandmultivariateCOXregressionanalysisonsurvivalandrecurrenceofEOCpatients

FactorsPathologicalgradingFIGOstaging

HR

Singlefactor2郾438-4郾1161郾207-2郾7351郾446-3郾1022郾760-5郾1173郾583-7郾80495%CI

P

HR

Multiplefactors2郾105-3郾8240郾887-1郾5660郾962-1郾9742郾583-4郾3183郾204-6郾72595%CI

P

3郾1051郾9722郾1183郾4524郾106

0郾0130郾0480郾043<0郾0010郾018

2郾7261郾1261郾2083郾1153郾748

0郾0180郾1510郾0960郾0250郾004

DeepmyometrialinfiltrationLymphnodemetastasis

miR鄄595

图4摇高miR鄄595组与低miR鄄595组EOC患者无进展生

存时间曲线比较Fig.4摇

Comparisonofprogression鄄freesurvivalcurvesbetweenhigh鄄miR鄄595groupandlow鄄miR鄄595groupofEOCpatients

对单因素分析中有统计学意义的因素调入COX回归分析模型miR鄄595<2郾危险因68,结果显示FIGO分期、淋巴结转移及素是影响[HR(EOC95%患者术后生存和复发的3郾824)、3郾115(2郾583~4郾318CI))、=3郾2郾748726((3郾2郾204105~~6郾3摇725)]。讨论

见表2。

多种癌基因和抑癌基因的表达失常或失衡EOC的发生、发展是一个多基因改变的过程,导致细,

miRNA胞无控增殖在肿瘤发生、发展和转归上起关键作用。

码RNA是一类长度为小分子,可激活多种胞内信号通路21~25nt的内源性单链非编,参与细胞的增殖、凋亡、侵袭、迁移和分化等过程,对恶性肿瘤的发生发展产生影响异常表达,与EOC。的发生有研究表明,有望成为治疗肿瘤患者的重要靶点[4,5]、发展、,miRNA转移及预后密切相在EOC中关,可作为EOC早期诊断和预后判断的新型标志物[6]号通路在细胞周期。近年来研究发现、超甲基化,miR鄄595、血管生成等方面促进可以通过多种信

或抑制恶性肿瘤的发生、浸润、转移和耐药等多个阶段,有可能为恶性肿瘤的诊断miR鄄595导致SOX7。下调Hao、治疗和预后判断提供了新的靶点和思路[7,8],从而抑制了鼻咽癌的等[9]研究显示,高表达发生发展,提示miR鄄595可能在癌症中发挥了肿瘤抑制基因作用。这些结果强调了miR鄄595在EOC进展中的作用,然而,miR鄄595能否作为一种有前景的EOC预后的生物标志物仍然存在未知。

本研究结果显示,EOC组织与癌旁正常组织相

比0郾,EOC下降可05),提示组织中的miR鄄595表达显著降低(P<

miR鄄595能随着参miR鄄595与EOCEOC临床分期及组织分化的可能是一种抑癌基因发生发展。本研究,的也其表达进发展现miR鄄595,

水平还与淋巴结转移密切相关表达水平呈明显降低。,有淋巴结转移的患而且miR鄄595表达者miR鄄595miR鄄595其原因可能是临床病理特征较差的患者病情进展较与表达水平明显低于无淋巴结转移EOC较差的临床病理特征有关。,表明分析快miR鄄595,肿瘤组织可抑制更多的具有抑癌基因作用的用的miRNA进入血液水平表达,同时可促进机体具有癌基因作,进而导致机体miR鄄595表达水平异常降低。Azizmohammadi等[10]miRNA研究发现,且FIGOmiRNA表达在低表达与高组织学分级EOC组织中较癌旁正常组织降低、,因子。分期有关另有研究表明,是EOC,miRNA患者总生存率的预测淋巴结转移及高在EOC组织中呈低表达,且与肿瘤发生、进展密切相关,是预测EOC复发的一个很有前景的指标[11]miR鄄595。本研究进一步探讨595595表达与生存时间之间的关系与EOC患者预后的临床价值,结果显示低,并分析miR鄄miR鄄

miR鄄595组患组,说明组者miR鄄595患总者生无存率明显低于高miR鄄595组,低低表达与病生存率EOC明显患者生存期短有低于高miR鄄595关。此外,多因素COX回归模型分析显示,高FIGO分期、淋巴结转移及miR鄄595<2郾68是影响EOC患者术后生存和复发的危险因素。Zhou等[12]研苏红娥等摇miR鄄595在上皮性卵巢癌组织中的表达及其预后评估的价值摇第23期·2877·

究显示,miR鄄595低表达是EOC患者总生存率的预测因子,提示miR鄄595可能是一种潜在的预测miRNA低表达对EOC患者总生存率及无进展生存EOC预后的生物标志物。Wan等[13]研究发现,率有显著影响(P<0郾05),miRNA可以作为一种评估EOC患者预后的有效指标。Pan等[14]研究表明,miRNA通过影响细胞增殖和凋亡参与EOC的发生发展,而且与EOC患者的总生存率相关。亦有研究认为,在EOC中,miRNA高表抑制了细胞增殖和细胞周期的进展,miRNA低表达与FIGO分期、淋巴结[5]摇ZouJ,LiuL,WangQ,etal.DownregulationofmiR鄄429

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转移和总生存率较低有关,是影响EOC患者预后的危险因素[15]2郾因素68综上所述。

,miR鄄595<2郾是影响EOC,FIGO患者术后生存和复发的危险分期、淋巴结转移及miR鄄595<

68对EOC患者术后的预后评估具有一定的价值,有望作为预测EOC预后的新型标

志物,同时也能更好地指导临床治疗。但本研究为单中心研究,且miR鄄595的临界值尚无明确的范围,595未来仍需大样本对EOC预后评估的临床价值、多中心试验来进一步证实。

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