食品与发酵，Ｉ４技 Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 第４８卷（第１期）Ｖｏ１．４８，Ｎｏ．Ｊ 产＾ｙ一氨基丁酸乳酸茵的筛选及发酵条件初步优化 王超凯１，２，３，刘绪 ＇２， ，张磊１，２，３刘念１，２，３，彭奎１，２，３潘建军１，２，３，黎贤书４ （１．四川省食品发酵工业研究设计院，四川成都６１１１３０；２．酿酒生物技术及应用四川省重点实验室，￣ｔ）ｌｌ成都６１１１３０； ３．国家固态酿造工程技术研究中心，Ｉ￣Ｊｔｌ泸州６４６０００；４．伊犁肖尔布拉克酒业有限责任公司，肖尔布拉克８３５８１１） 摘 要：以白酒糟醅和黄浆水为分离源，筛选出３株高产 一氨基丁酸的乳酸茵菌株，其中编号为Ｊ９７的乳酸茵株 一氨 基丁酸产量最高，经鉴定该菌株为乳酸短杆菌。通过对Ｊ９７号菌株发酵条件的正交实验优化，确定其最佳发酵条件为： 初始ｐＨ ６．５，发酵温度３２℃，发酵时间６０ｈ，接种量５％，在此条件下 一氨基丁酸产量达到１１．５ｇ／Ｌ。 关键词： 一氨基丁酸；乳酸菌；发酵；筛选 中图分类号：ＴＱ９２０．６ ＴＱ９２２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４—５０６Ｘ（２０１２｝０１—００３６—０００４ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｃｔｉｃ Ｃｉｄ Ｂａｃｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｖ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ＷＡＮＧ Ｃｈａｏ—ｋａｉ ， ．一，ＬＩＵ Ｘｕ ， ， ，ＺＨＡＮＧ Ｌｅｉ ， 一．ＬＩＵ Ｎｉａｎ ， 一，ＰＥＮＧ Ｋｕｉ ， 一． ＰＡＮ Ｊｉａｎ－ｊｕｎ ， 一．ＬＩ Ｘｉａｎ—ｓｈｕ （Ｊ．Ｓｉｃｈｕａｎ Ｆｏｏｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｓｉｇｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｓｉｃｈｕａｎ ６１１１３０，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂ ｏｆ Ｌｉｑｕｏｒ－ｍａｒｋｉｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈ＆Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｓｉｃｈｕａｎ ６１１１３０，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｓｏｌｉｄ－Ｓｔｔｅａ Ｂｒｅｗｉｎｇ，Ｌｕｚｈｏｕ Ｓｉｃｈｕａｎ ６４６０００，Ｃｈｉｎａ； ４．Ｘｉａｏ Ｅｒ Ｂｕ Ｌａ Ｋｅ Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｘｉａｏ Ｅｒ Ｂｕ Ｌａ Ｋｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，８３５８１１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｅ ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅ ｍａｔｅｒｉａｌ ａｎｄ ｈｕａｎｇｓｈｕｉ ｆｌｕｉｄ ａｓ ｓａｍｐｌｅｓ，ｔｈｒｅｅ ｈｉｇｈ￣／－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏ— ｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ，ｉｎ ｗｈｉｃｈ Ｊ９７ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ＾ｙ—ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉ．ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ６．５，ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ３２￣Ｃ，ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ６０ｈ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ ５％． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ￣／－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ １ １．５ｇ／Ｌ ｉｎ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： 一ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｅ ａｃｉｄ；ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａ；ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ；ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—５０６Ｘ．２０１２．Ｏ１—００９ 一氨基丁酸是广泛分布于自然界的一种非蛋 一氨基丁酸含量很低，而微生物发酵合成 一氨基丁 本文首次从黄浆水和糟醅中筛选 一氨基丁酸 白质氨基酸，是目前研究较为深入的一种重要的抑 酸具有很好的开发前景。 高产乳酸菌株，并对其发酵生产＾ｙ一氨基丁酸的条件 进行初步优化，为工业化生产 一氨基丁酸奠定一定 的基础 制性神经传递物质，具有降血压、抗惊厥、镇痛和改 善记忆等生理活性 ］。目前， 一氨基丁酸的合成制 备方法主要有三种¨５］：化学合成、植物富集和微生物 发酵。相比而言，化学合成安全性较差，植物富集的 收稿日期：２０１１－０７—２９ 基金项目：四川省科技厅应用基础项目（２００９ＪＹ００２５） 作者简介：王超凯（１９８２一），工程师，从事酿酒生物技术及酿酒工程技术研究。 通讯作者：刘绪，工程师，从事酿酒生物技术及酿酒工程技术研究。 第４８卷（总第１６７－Ｗ１） 王超凯等：产 一氨基丁酸乳酸菌的筛选及发酵条件初步优化 ３７ １材料与方法 １．１材料 １．１．１乳酸菌种分离源 白酒糟醅、黄浆水。 １．１．２培养基 改良ＭＣ培养基：蛋白胨０．５％、牛肉浸膏 ０．５％、酵母浸膏０．５％、葡萄糖２％、乳糖２％、碳酸钙 １％、琼脂１．５％，ｐＨ ６．８。 ＭＲＳ固体培养基：酪蛋白胨ｌ％、牛肉膏１％、酵 母膏０．５％、柠檬酸氢二铵０．２％、葡萄糖２％、吐温一 ８０ １％、乙酸钠０．２％、磷酸二氢钾０．２％、硫酸镁 ０．０５８％、硫酸锰０．０２５％、琼脂１．８％，ｐＨ ６．８。 ＧＹＰ种子培养基：葡萄糖１％、酵母膏１％、蛋白 胨Ｏ．５％、乙酸钠０．２％、硫酸镁０．０２％、硫酸锰 Ｏ．０１％、硫酸亚铁０．０１％、氯化钠Ｏ．Ｏ１％。 ＧＹＰ发酵培养基：在ＧＹＰ种子培养基中添加 １％Ｌ一谷氨酸。 １．１．３仪器与设备 ＳＰＸ一２５０Ｂ—Ｄ型恒温培养箱、ＹＸＱ—ＬＳ一３０一Ｓ ＩＩ 型立式压力蒸汽灭菌器、ＳＷ—ＣＪ一２ＦＤ型双人单面洁 净工作台、Ａｇｉｌｅｎｔ １ １００高效液相色谱仪、ＤＴ一５００Ａ 型电子天平、ｌＯＯｘ２ＯＯｍｍ层析缸。 １．２ 方法 １．２．１乳酸菌的分离 称取５ｇ糟醅于三角瓶中，加入５０ｍＬ无菌水， 混匀制成菌悬液。吸取ｌｍＬ菌悬液或ｌｍＬ黄浆水以 １０倍法稀释至１０ 、１Ｏ｛、１０ 。吸取稀释液各０．５ｍＬ 于已灭菌的平皿中，然后倒人冷却至５０℃左右的改 良ＭＣ培养基混匀，凝固后置３０ｃＩ＝厌氧培养４８ｈ，挑 取平皿中有溶钙圈的菌落，以划线法在ＭＲＳ培养基 上分离纯化。 １．２．２产＾ｙ一氨基丁酸乳酸菌的筛选 １５０ｍＬ三角瓶中装入１００ｍＬ ＧＹＰ种子培养 基，接人２—３环分离得到的乳酸菌种，３０℃静置厌氧 培养２４ｈ，然后以３％的接种量接人含１００ｍＬ ＧＹＰ 发酵培养基的１５０ｍＬ三角瓶中，静置厌氧培养４８ｈ。 取发酵液进行 一氨基丁酸含量检测。 １．２．３ 一氨基丁酸的检测 定性检测：薄层层析法，展开剂为苯酚（Ｖ）：甲酸 （Ｖ）：水（Ｖ）＝１８：２：１，显色剂为０．４％茚三酮溶液，９０℃ 显色１０ｍｉｎ。以＾ｙ一氨基丁酸标准品为参比，将发酵 液离心（８０００ｒ／ｍｉｎ，１５ｍｉｎ）后，取上清液进行薄层层 析，点样量为５１ａ，Ｌ。 定量检测：高效液相色谱法 。 １．２．４高产 一氨基丁酸乳酸菌的鉴定 ①形态学鉴定：观察、记录分离培养基平板上菌 落形态。 ②生理生化特性鉴定：革兰氏染色反应、接触酶 反应、糖类发酵试验。 １．２．５ 一氨基丁酸的发酵培养 １５０ｍＬ三角瓶中装入１００ｍＬ ＧＹＰ种子培养 基，接入２—３环分离得到的高产 一氨基丁酸乳酸菌 种，３０￣Ｃ静置厌氧培养２４ｈ，然后以３％的接种量接 入含１００ｍＬ ＧＹＰ发酵培养基的１５０ｍＬ三角瓶中， 静置厌氧培养４８ｈ。取发酵液进行 一氨基丁酸含量 检测。 ２结果与分析 ２．１ 产 一氨基丁酸乳酸菌的分离、筛选 共分离出１１８株乳酸菌菌株。通过发酵培养和 一氨基丁酸的检测，发现有４６株乳酸菌能将Ｌ一谷 氨酸转化为 一氨基丁酸，但绝大部分菌株的转化能 力处于较低水平。只有编号为：Ｈ１４、Ｈ５６和Ｊ９７的３ 株乳酸菌产 一氨基丁酸的能力相对较强，分别达 到：６．２ｇ／Ｌ、６．７ｇ／Ｌ和７．１ｇ／Ｌ。Ｊ９７号菌株 一氨基丁酸 产生量高于其它两株乳酸菌，因此将它作为后续实 验的出发菌株，并对其进行鉴定。＾ｙ一氨基丁酸的定 性检测和具体筛选结果见图１和表１。 Ｈ１４ Ｈ５６ Ｊ９７ Ｌ一谷氨酸 图１ ｙ一氨基丁酸的薄层层析定性检测 Ｆｉｇ－１ Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ，ｙ－ａｍｉｎｏｂｕ￣ｒｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ＴＬＣ 表１菌株筛选结果 Ｔａｂ．１ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ 一氨基丁酸浓度／ｇ，Ｌ Ｏ－１．５ １．５－３ ３－４．５ ４．５—６ ６－７．５ 菌株数４１ １ ０ １ ３ ’ 占总菌株数的百分ＩＬ１％８９．１ ２．２ ０ ２．２ ６．５ ３８ 食品与发酵，ＰＩ－技 ２０１２年第１期 ２．２ 高产 一氨基丁酸乳酸菌的鉴定 ①形态学鉴定：Ｊ９７号乳酸菌菌落颜色为乳白 色，表面湿润，边缘光滑，菌体呈短杆状，无芽孢，不 能游动。 ②生理生化特性鉴定：革兰氏染色呈阳性：过氧 化氢酶反应不产气体，阴性反应；精氨酸水解不产 氨；糖类发酵实验结果见表２。 表２糖类消化实验 Ｔａｂ．２ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｂｙ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｓｔａｉｎ 碳水化合物葡萄糖木糖蔗糖麦芽糖乳糖半乳糖核糖 反应结果 ＋ 一 十 ＋ ＋ ＋ 一 根据对Ｊ９７号乳酸菌的形态学和生理生化特性 鉴定结果，初步判断Ｊ９７号乳酸菌为乳酸短杆菌。 ２＿３发酵条件优化 ２．３．１ 初始ｐＨ对 一氨基丁酸产量的影响 用ｌｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液将ＧＹＰ发酵培养基ｐＨ 调至５．Ｏ、５．５、６．０、６．５、７．０和７．咖知《∞《ｏ ９ ５，于１２１℃条件下灭 一］／ｂ】８ ７ ６ ５ ４ ３ 菌１５ｍｉｎ。冷却后按３％接种量接人种子培养液， ３０℃静置厌氧培养４８ｈ，经过滤、离心后，测上清液 中 一氨基丁酸含量。由图２可知，当发酵培养基的 ｐＨ在５．０—６．５的范围内，乳酸菌发酵产生＾ｖ一氨基丁 酸的量随着ｐＨ的升高而增加。当ｐＨ为６．５时， 一 氨基丁酸的产量最高。达到７．Ｔｇ／Ｌ。这可能是因为在 此ｐＨ值时．最适合乳酸菌菌体的生长及谷氨酸脱 羧酶的产生，进而催化Ｌ一谷氨酸转化为＾ｙ一氨基丁 酸。当初始ｐＨ继续提高到６．５—７．５的范围内时， 一 氨基丁酸的生成量又逐渐下降。 ８ ｊ 西 一 ｌｌ田Ｉ 如 《 ∞ 《 ０ ５ ４．５ ５ ５ ５ ６ ６．５ ７ ７ ５ ８ ｐＨ 图２初始ＤＨ对ＧＡＢＡ产量的影响 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｅ￣ｏｆ ｉｎｉｔｉａｌ ｐＨ ｏｎ ＧＡＢＡ ｐｒｏｄｕｃｔ ２．３．２发酵时间对 一氨基丁酸产量的影响 用ｌｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液将ＧＹＰ发酵培养基ｐＨ 调至６．５，于１２１％条件下灭菌１５ｍｉｎ，冷却后按３％ 接种量接人种子培养液，３０℃静置厌氧培养１２ｈ、 ２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、６０ｈ、７２ｈ，经过滤、离心后，测上清液中 一氨基丁酸含量。由图３可知，在发酵时间１２ｈ一３６ｈ 内，＾ｙ一氨基丁酸的产量随着发酵时间的延长而快速 提高，当发酵时间为４８ｈ时， 一氨基丁酸的产量达 到７．７ Ｌ，再延长发酵时间， 一氨基丁酸的生成量增 加幅度较小，考虑到发酵周期及生产成本，选择发酵 ４８ｈ为最佳发酵时间。 ｏ １２ ２４ ３６ ４８ ６０ ７２ 时间（ｈ） 图３发酵时间对ＧＡＢＡ产量的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ＧＡＢＡ ｐｒｏｄｕｃｔ ２．３．３接种量对 一氨基丁酸产量的影响 用ｌｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液将ＧＹＰ发酵培养基ｐＨ 调至６．５，于１２１℃条件下灭菌１５ｍｉｎ，冷却后按接种 量１％、３％、５％、７％、９％、１ｌ％、１３％接人种子培养 液，３０ｃＩ二静置厌氧培养４８ｈ，经过滤、离心后，测上清 液中＾ｙ一氨基丁酸含量。由图４可知：接种量在１％一 ７％的范围内， 一氨基丁酸的产量都随着接种量的增 加而提高，当接种量为７％、发酵时间为４８ｈ时，＾ｙ一 氨基丁酸产量达到９．５ｇ／Ｌ，再继续提高接种量， 一氨 基丁酸产量提高的幅度较小，考虑到生产成本，选择 ７％为最佳接种量。 １０ ９．５ —— ９ ８．５ ８ 蚓７．５ ７ 歪６ ３ ０ ５ ５ ５ ０ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １ｏ １１ １２ １３ １４ 接种量（％） 图４接种量对ＧＡＢＡ产量的影响 Ｆｉｇ．４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔｙ Ｏｆ］ＧＡＢＡ ｐｒｏｄｕｃｔ ２－３．４发酵温度对 一氨基丁酸产量的影响 用ｌｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ溶液将ＧＹＰ发酵培养基ｐＨ 调至６．５，于１２１％条件下灭菌１５ｍｉｎ，冷却后按接种 量７％接人种子培养液，分别在２２％、２４％、２６％、 第４８卷（总第１６７期） 王超凯等：产＇７－氨基丁酸乳酸菌的筛选及发酵条件初步优化 ３９ ２８ｃＩ二、３０℃、３２℃、３４℃、３６℃、３８℃静置厌氧培养４８ｈ， 经过滤、离心后，检钡４上清液中 一氨基丁酸含量。由 图５可知：发酵温度在２２—３２℃的范围内， 一氨基丁 酸产量随发酵温度的提高而增加，这可能是因为发 酵温度提高有利于乳酸菌的生长和谷氨酸脱羧酶的 产生。当发酵温度达到３２℃时，发酵液中＾ｙ一氨基丁 酸含量达到１０．４ｇ／Ｌ。继续提高发酵温度， 一氨基丁 酸产量将随之下降，到３８℃时，只占３２℃时的 ５９．６％ １１ １０ －、３ ９ ８ ７ ６ 舌５ ４ ３ ２０ ２２ ２４ ２６ ２８ ３０ ３２ ３４ ３６ ３８ ４０ 发酵温度（℃） 图５发酵温度对ＧＡＢＡ产量的影响 Ｆｉｇ．５ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ＧＡＢＡ ｐｒｏｄｕｃｔ ２．３．５发酵条件的优化 选择ＧＹＰ发酵培养基初始ｐＨ、发酵时间、发酵 温度和接种量为因素，以 一氨基丁酸产量为指标， 选用Ｌ９（３ ）正交表进行正交实验，具体因素与水平 选择见表３。 表３正交实验因素水平表 Ｔａｂ．３ Ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｒｓ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ 由表４可知：四个因素对＾ｙ一氨基丁酸产量的影 响大小依次为Ａ＞Ｂ＞Ｃ＞Ｄ，即初始ｐＨ对 一氨基丁酸 产量的影响最显著，发酵温度次之，发酵时间和接 种量对 一氨基丁酸产量的影响相差不大。四个因 素的最佳组合为Ａ：Ｂ２Ｃ Ｄ 。通过验证发酵实验证 实，当发酵条件满足Ａ２Ｂ Ｃ Ｄ 时，＾ｙ一氨基丁酸产量 达到１１．５ｇ／Ｌ。 ３ 结论 ３．１本文从糟醅和黄浆水中分离到１１８株乳酸菌， 表４发酵条件的正交试验优化结果 Ｔａｂ．４ Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｂｙ ｏ ｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔｉｎｇ 初始ｐＨ发酵温度发酵时间接种量 一氨基丁酸 试验号 、 Ａ Ｂ ｃ Ｃ Ｄ Ｊ 拦＿， 通过筛选确定其中４６株具有 一氨基丁酸生产能 力，并得到一株高产菌株，编号为Ｊ９７，鉴定其为乳 酸短杆菌。 ３．２以ＧＹＰ发酵培养基，Ｊ９７为出发菌，发酵生产 一氨基丁酸的条件进行了单因素和正交优化实验， 结果表明：当初始ｐＨ为６．５，发酵温度３２ ，发酵时 间６０ｈ，接种量５％时，＾ｙ一氨基丁酸产量达到１１．５ｇ／Ｌ。 参考文献 ［１］ 北京医学院基础部．中枢神经介质概论［Ｍ］．北京：科学 出版社，１９７７：２１０—２８１． ［２］Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ Ａ Ｇ，Ｗａｎｇ Ｙ，Ｐｕ Ｍ，ｅｔ ａ１．ＧＡＢＡ ａｎｄ ｉｔｓ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｖｉｓｕａｌ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｓｅｎｅｓｃｅｎｔ ｍｏｎｋｅｙ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，３００：８１２—８１５． ［３］ 茅原铉，杉浦友美．近年６９ＧＡＢＡ生理机能研究一脑机能 改善作用、高血压作用老中心ｃ：［Ｊ］．食品 开发， ２００１．３６（６）：４６． ［４］胡珊，王小波，戴甄，等．产 一氨基丁酸红曲菌种的筛选 及其发酵工艺条件研究［Ｊ］．食品与发酵科技，２０１１，４７ （４）：６４—６５． ［５］徐冬云，周立平，童振字，等．产 一氨基丁酸乳酸菌的分 离及筛选［Ｊ］．中国食品添加剂，２００６（２）：１０５—１０９． ［６］朱玲英，孔铭，彭蕴茹，等．ＨＰＬＣ测定大鼠海马中谷氨 酸、 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