丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究

维普资讯 http://www.cqvip.com 亿亏与生物互程２００８，Ｖｏｌ　２５　Ｎｏ　６　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　田　丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究　梅　妹　，向　华　，邓旭明　，于　录　，张　亮　一，王大成　（１．吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春１３００６２；２．生物芯片北京国家工程研究中心，北京１０２２０６；　３．博奥生物有限公司，北京１０２２０６）　摘　要：通过分析亚抑制浓度的丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组表达谱的影响，研究了丁香酚的抗茵作用机制。用　丁香酚（２５０“ｇ・ｍＬ　）处理金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３细胞４５　ｒａｉｎ后，应用Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ金黄色葡萄球菌基因芯片检测全　基因组表达谱的变化。共有３３８个基因受到诱导，４４０个基因受到抑制，其中包括１００个转运子基因、４５个与蛋白质合成有关的　基因和３２个毒力基因。丁香酚还抑制了大多数与细胞壁有关的基因和编码ｓｏｒｔａｓｅ酶的基因ＳＡ０９８２（ｓｒｔＢ）以及Ｉｓｄ基因。　结果表明，丁香酚是通过同时调节多途径相关基因表达，尤其是调节与转运、信号途径和毒力相关的基因表达来实现抗茵作用。　关键词：金黄色葡萄球菌；丁香酚；基因芯片；基因表达谱　中图分类号：Ｒ　２８４　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—５４２５（２００８）０６—００４１—０５　丁香是桃金娘科植物丁香（Ｅｕｇｅｎｕｉａ　ｃａｒｙｏｐｈｙｌ—　４２株临床金黄色葡萄球菌从吉林大学第一医院　ｌａｔａ　Ｔｈｕｍｂ）的干燥花蕾，性温，味辛，归脾、胃、肺和胃　分离，标准菌株ＡＴＣＣ２５９２３购自中国医学微生物菌　经，用于治疗脾胃虚寒、呃逆呕吐、食少吐泻、心腹冷　种保藏管理中心（ＣＭＣＣ），肉汤培养基（ＭＨＢⅡ）和肉　痛、肾虚阳痿等口］，其主要成分为丁香酚（Ｅｕｇｅｎｏ１），即　汤琼脂培养基（ＭＨＡ）购自杭州天和微生物试剂有限　４一烯丙基－２－甲氧基苯酚Ｉ２］。现代药理学研究表明，丁　公司，丁香酚（１１０７２５—２Ｏ０６１０）购自中国药品生物制品　香酚对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌、大肠杆菌等细　检定所，金黄色葡萄球菌全基因组芯片Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　Ｇｅ—　菌ｌ３“　以及常见的皮肤癣菌［５　具有较好的抑制作用。　ｎｅＣｈｉｐ　购自美国Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ公司。　但其作用机制有待进一步阐明。　１．２药敏实验　中药及其活性成分在临床抗感染治疗中有着广泛　根据ＮＣＣＬＳ标准，测定丁香酚对上述４３株金黄　的应用，深人研究其作用机制对指导临床合理用药和　色葡萄球菌的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）。　进一步的开发具有重要意义。应用芯片转录谱技术对　１．３　丁香酚处理金黄色葡萄球菌　抗菌药物作用分子机理进行研究，一方面有可能揭示　金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３在１０　ｍＩ　肉汤培养　细菌抗药性的确切机制，另一方面可以发现细菌生存　基上，于３７℃、２００　ｒ・ｍｉｎ　过夜培养。取２５０　ｍＬ锥　所必需的基因，从而为开发新的抗菌药物及疫苗提供　形瓶６个，每个加１００　ｍＬ肉汤培养基和１　ｍＬ过夜培　重要的依据ｌ７　］。Ｗａｎｇ等口　采用基因芯片转录谱技　养物，于３７　ｏＣ、２００　ｒ・ｍｉｎ　条件下培养至０Ｄ。。。一　术研究了临床常用中药单体成分小檗碱的抗菌作用机　０．３。取用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶解的丁香酚加人其　制。　中３个锥形瓶中，至终浓度为２５０　ｇ・ｍＬ　、ＤＭＳＯ　作者在此采用基因　片转录谱技术分析金黄色葡　终含量为１　。其余３个锥形瓶只含有１　ＤＭＳＯ作　萄球菌在亚抑制浓度的丁香酚作用后的全基因组表达　为空白对照。所有菌液（包括实验组和对照组）于　谱的变化，首次在基因组规模的水平上对丁香酚的抗　３７℃进一步培养４５　ｍｉｎ。　菌作用机制进行了探讨。　１．４基因表达谱检测　１　实验　操作过程参见Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ公司操作手册（Ａｆｆｙ—　ｍｅｔｒｉＸ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｍａｎｕａｌ；Ａｆｆｙ—　１．１　材料　ｍｅｔｒｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ　Ｃｌａｒａ，Ｃａｌｉｆ）；各组基因差异表达用　基金项目：国家科技支撑计划资助项目（２００６ＢＡＤ３１Ｂ０５）　收稿日期：２００８—０１—２８　作者简介：梅妹（１９７４－－），女，辽宁沈阳人，硕士研究生，研究方向：天然产物化学成分及药理活性研究；通讯联系人：王大成，博士，　讲师。Ｅ　ｍａｉｌ：ｗｄｃ９９２８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ。　维普资讯 http://www.cqvip.com

囝　梅　妹等：丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究／２００８年囊６期　１０００雎ｇ・ｍＬ一，对标准菌株ＡＴＣＣ２５９２３的ＭＩＣ为　５００　ｇ・ｍＬ一。用２５０　ｇ・ｍＬ　丁香酚处理金黄色　Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ公司Ｇｅｎｅｓｐｒｉｎｇ　６．２软件分析。将３次　的实验数据标准化，当Ｒａｔｉｏ≥２或Ｒａｔｉｏ≤０．５时，认　为该基因发生显著变化。　葡萄球菌ＡＴＣＣ２５９２３　４５　ｍｉｎ后，表达差异在２倍以　上的基因共有７７８个，其中有３３８个基因表达受诱导，　４４０个基因表达受抑制。受到诱导和抑制作用的基因　的功能分类见图１。　２结果与讨论　丁香酚对４３株金黄色葡萄球菌的ＭＩＣ为１００～　Ｊ　一一　．　口｜ｌ　Ｊ一　Ｉ｜一一Ｊ　Ｊ　一　雪　目　图１　受丁香酚影响的基因的功能分类　Ｆｉｇ．１　Ｅｕｇｅｎｏｌ—ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｇｅｎｅｓ　ｇｒｏｕｐｅｄ　ｂｙ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　其中１００个转运子基因受到丁香酚不同程度的调　同程度的。在４８个依赖于ＡＴＰ的转运子基因中　４７个与ＡＢＣ家族有关；４２个次级转运子基因中，有　１３个与ＭＦＳ家族相关。另外假定转运子基因　ＳＡ２１４２、ＳＡ２２０３、ＳＡ００９９、ＳＡ１９８２和ＳＡ２２３３均上　控，包括４８个依赖于ＡＴＰ的转运子基因、４２个次级　转运子基因、３个磷酸转移酶系统（ＰＴＳ）基因、１个离　子通道基因。　１１８个与信号途径相关的基因受到丁香酚的影　调表达。由此可以看出丁香酚是金黄色葡萄球菌多药　耐药泵的底物。　２．２丁香酚影响的信号途径基因　响，包括４Ｏ个与ＲＮＡ合成有关的基因、１３个与ＲＮＡ　修饰有关的基因、４５个与蛋白质合成有关的基因、２个　与ＤＮＡ复制有关的基因、１２个与ＤＮＡ修饰有关的　基因、６个与ＤＮＡ重组相关的基因。　共有１１８个与信号途径相关的基因受到丁香酚的　影响。在信号途径相关基因中与蛋白质合成途径有关　的基因无疑是最为重要的一类。与蛋白质合成途径有　关的基因通常分为５类，分别是核糖体蛋白相关基因、　１４个与细胞壁有关的基因受到丁香酚的，其　中４个基因受到诱导、１Ｏ个基因受到抑制。　３２个毒力基因和二元系统（ＴＣＳｓ）基因受到丁香　酚的影响，２４个下调。　氨酰一ｔＲＮＡ合成酶相关基因、起始相关基因、延伸相　关基因和终止相关基因。　另外丁香酚还抑制了编码ｓｏｒｔａｓｅ酶的基因和　Ｉｓｄ基因以及其它未知功能的基因。　２．１丁香酚影响的转运子基因　有４５个与蛋白质合成有关的基因受到影响，其中　４个受到诱导、４１个受到抑制；有２Ｏ个编码核糖体蛋　白的基因受到影响，其中２个受到诱导、１８个受到抑　外输泵对药物的外排作用是细菌耐药机制之　一制；有１９个编码氨酰一ｔＲＮＡ合成酶的基因受到影响，　＿１　。细菌主动外排系统的膜蛋白主要分为４类：　只有编码肽酰一ｔＲＮＡ水解酶的基因ｐｔｈ被诱导，其余　１８个基因均被抑制；与起始有关的基因ｉｎｆＣ下调；与　延伸有关的基因ｓｓｒＰ和ＳＡ０９５９均下调；与终止有关　的基因户ｒ　和ｐｒｆＣ被抑制。　ＭＦＳ家族（Ｍａｊｏｒ　ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ　ｓｕｐｅｒ　ｆａｍｉｌｙ）、ＡＢＣ家族　（ＡＴＰ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｃａｓｓｅｔｔｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ）、ＳＭＲ家族　（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃａｌ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｆａｍｉｌｙ）和ＲＮＤ　家族（Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ—ｎｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｄｉｖｉｓｉｏｎ　ｆａｍｉｌｙ）。本实验　结果与前两类家族有关。　本实验中。共有１００个转运子基因受到丁香酚不　丁香提取物与喹诺酮类、青霉素类、红霉素类联合　应用于金黄色葡萄球菌、阴沟杆菌、产酸杆菌、产Ｈ：Ｓ　杆菌、氟劳地杆菌，彼此间无相互影响，而与氨基糖苷　维普资讯 http://www.cqvip.com 梅妹等：丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究／２００８年第６期　固　类抗生素庆大霉素、卡那霉素联合应用，则显现出明显　黄色葡萄球菌在鼠的模型中显示不出毒力　。本实　验结果表明，ｄｌｔＡ和ｄｌｔＣ均受到抑制，则可能会使　丙氨酰缺失，引起细胞表面电荷的改变，从而使金黄色　的拮抗作用，此作用在一定范围内随着两药物浓度的　增大而加强。由此推测，丁香提取物的抗菌机理可能　是与氨基糖苷类竞争性抑制蛋白质的合成过程口　。　大多数与蛋白质合成有关的基因表达均受抑制，与文　献结论基本相符，表明影响与蛋白质合成相关基因的　葡萄球菌的毒力下降。　因此，丁香酚可能通过干扰金黄色葡萄球菌细胞　壁多糖的生物合成和改变细菌表面电荷使其毒力下　表达是丁香酚主要抗菌作用机制之一。　２．３丁香酚影响的与细胞壁有关的基因　共有１４个与细胞壁有关的基因受到丁香酚的调　控。其中受到诱导的基因包括ＳＡ０８７５、ＳＡ０２０５、　ＳＡ２２３０和ＳＡ２４４１；受到抑制的基因包括ＳＡ０４２３、　ＳＡ２２８８（ｇｔａＢ）、ＳＡ２３５４、ＳＡ０７９５（ｄｌｔＣ）、ＳＡＯ７９３（ｄｌ—　ｔＡ）、ＳＡ１１０３（ｕｐｐｓ）、ＳＡＯ４２３、ＳＡＬＯ２５（ｔａｒａＹ）　ＳＡ１７０８和ＳＡＬＯ２４（ｐｂｐＡ）。　受到抑制的基因ｕｐｐｓ是编码十一异戊烯焦磷酸　盐（ＵＰＰ）合成酶的基因，ＵＰＰ合成酶能产生十一异戊　烯焦磷酸盐，它含有一个顺式和反式混合的类异戊二　烯链ｌ＿】　。ＵＰＰ是一种在细菌中将糖转移以合成细胞　壁上的多糖的脂类载体。而ＵＰＰ合成酶是异戊烯转　移酶的一种，是合成类异戊二烯的必需酶。　受抑制的基因ｐｂｐＡ编码青霉素结合蛋白１　（ＰＢＰ１）。ＰＢＰｓ是参与细菌细胞壁肽聚糖生物合成的　酶，它的正常存在是细菌保持正常形态及功能的必需　条件，青霉素等抗生素正是通过与ＰＢＰｓ结合，抑制细　菌细胞壁的生物合成，引起细菌细胞死亡，从而发挥杀　菌作用。ＰＢＰｓ由此成为　内酰胺类抗生素的靶标。　对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（ＭＳＳＡ）有４个　ＰＢＰｓ，即ＰＢＰ１、ＰＢＰ２、ＰＢＰ３和ＰＢＰ４。文献报道　ｐｂｐＡ基因对ＭＳＳＡ的生长是必需的，其编码的ＰＢＰ１　与肽聚糖隔膜的合成有关＿１　。ＰＢＰ２在金黄色葡萄球　菌的肽聚糖的代谢中起重要作用　。本实验中，编码　ＰＢＰ２的基因未发生变化。　ＳＡＯ７９５（ｄｌｔＣ）和ＳＡＯ７９３（ｄｌｔＡ）均受到显著抑　制。ｄｌｔＣ是编码ｒ）－丙氨酰载体蛋白的基因，ｄｌｔＡ是　编码Ｄ一丙氨酸一Ｄ一丙氨酰的载体的连接酶的基因。脂　膜酸（Ｉ　ＴＡ）存在于大多数革兰氏阳性菌中，其Ｄ一丙氨　酰化使革兰氏阳性菌得以其表面的电荷，进而调　控配体结合。对革兰氏阳性菌脂膜酸生物合成相关基　因研究表明，其ｒ）－丙氨酰化需要ｄｌｔＡ、ｄｌｔＢ、ｄｌｔＣ和　ｄｌｔＤ基因编码的蛋白［１５３。这些基因失活会导致脂膜　酸中Ｄ一丙氨酰酯的缺失，从而引起其细胞表面电荷的　改变。已有研究报道，Ｄ一丙氨酰残基结合到脂膜酸上　对于单核细胞增多性李司忒菌和金黄色葡萄球菌的毒　力很重要　。缺少Ｄ一丙氨酰化的脂膜酸突变体的金　降，从而发挥抗感染作用。　２．４丁香酚影响的毒力因子和二元系统（ＴＣＳｓ）基因　在金黄色葡萄球菌中，细胞外毒力因子包括表面　粘附素、荚膜多糖、胞外细胞毒素、肠毒素、脱氧核糖核　酸酶和蛋白酶。共有３２个毒力基因受到丁香酚的影　响，多数下调，包括葡萄球菌核酸酶（ＳＡＯ７４６）、细胞表　面蛋白（ｉｓｄＡ）、凝集因子Ｂ（ｃｌｆＢ）、丝氨酸蛋白酶（５５－　ｐＡ）、丝氨酸蛋白酶ＨｔｒＡ（ｈｔｒＡ）、ＩｇＧ一结合蛋白ＳＢＩ　（ｓｂｉ）、ｇａｍｍａ－溶血素（ｈｌｇＡ、ｈｌｇＢ、ｈｌｇＣ）、纤维蛋白　原结合蛋白（ＳＡ１０００、ｓｄｒＤ、ｓｄｒＥ）和甘油酯水解酶　（ｇｅｈ）等基因。　有研究表明［１　，对细胞壁有影响的亚抑制浓度抗　生素（如　内酰胺和糖肽等）可刺激金黄色葡萄球菌外　毒素的释放。而对蛋白质的合成有抑制作用的抗生素　（如氯林可霉素和利萘唑胺等）抑制了很多葡萄球菌胞　外蛋白的合成，包括毒力因子口引。一般来说，被抗生　素诱导的外毒素的释放能增强与金黄色葡萄球菌相关　的毒力综合症和促炎症反应的宿主应答，而外毒素表　达的下调则引起毒力的显著下降Ｅ２ｏＪ。丁香酚抑制了　大量的毒力因子，因此可用于临床金黄色葡萄球菌毒　力综合症的治疗。　金黄色葡萄球菌毒力因子的表达受基因网络　的控制，主要包括二元系统（ＴＣＳｓ）和小转录　子＿２　。有一些ＴＣＳｓ基因受到丁香酚的影响，如ｇＺ—　ｎＡ、ｓａｒＲ、ＳＡ２４１８、ＳＡ０３４２和ｌｙｔＲ等均下调，这表明　不同的毒力因子相应地受到二元信号转导系统和转录　子的影响。　２．５丁香酚影响的编码ｓｏｒｔａｓｅ酶的基因和ｌｓｄ基因　丁香酚抑制了编码ｓｏｒｔａｓｅ酶的基因ｓｒｔＢ　（ＳＡＯ９８２）和编码表面蛋白的基因ｉｓｄＢ、ｉｓｄＤ、ｉｓｄＧ。　革兰氏阳性细菌的表面蛋白可通过５种机制与细胞壁　结合，ｓｏｒｔａｓｅ酶介导的结合是其中之一。ｓｒｔＡ和ｓｒｔＢ　编码的ｓｏｒｔａｓｅ酶参与了革兰氏阳性菌细胞壁蛋白的　分泌途径和锚定　。　在革兰氏阳性菌中，Ｉｓｄ系统（Ｉｒｏｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｓｕｒ—　ｆａｃｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ　ｇｅｎｅｓ）编码的基因对血红蛋白的结　合和亚铁血红素的通道有重要影响。亚铁血红素通道　需要两个ｓｏｒｔａｓｅ酶，它们在细胞壁中将Ｉｓｄ蛋白固定　维普资讯 http://www.cqvip.com 田　梅　妹等：丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究／２００８年囊６期　在特定的位置。这样，Ｉｓｄ作为一个重要的元件，可以　通过菌膜将细胞壁上锚定的蛋白传递给亚铁血红素。　金黄色葡萄球菌的Ｉｓｄ基因座由ｌ０个基因组成．包括　ｉｓｄＡ、ｉｓｄＢ、ｉｓｄＣ、ｉｓｄＤ、ｉｓｄＥ、ｉｓｄＦ、ｉｓｄＧ、ｉｓｄＨ　ｉｓｄＩ　和ｓｒｔＢ。ｓｒｔＢ是ｓｏｒｔａｓｅ　Ｂ的结构基因，它位于金黄色　葡萄球菌Ｉｓｄ基因座＿２　。该基因座上的基因使金黄　色葡萄球菌可以在血红蛋白中提取含铁血红素，使细　菌能在哺乳动物组织缺铁条件下生长，即ｓｒｔＢ与金黄　色葡萄球菌感染的持久性有关，由此使ｓｏｒｔａｓｅ　Ｂ成为　理想的靶标。　因此推测丁香酚抑制ｓｏｒｔａｓｅ　Ｂ可以使细菌细胞　表面蛋白修饰缺陷，从而抑制细菌生长以对抗感染。　２．６丁香酚对能量代谢的影响　Ａｌｅｘａｎｄｅｒ等＿２　研究发现，当用杀菌浓度的丁香　酚和肉桂醛作用于细胞时，对李司忒菌和乳酸菌的能　量代谢有快速的抑制作用，其作用机制可能是对葡萄　糖摄入或利用的抑制作用。而在本实验中，与能量代　谢有关的基因的衷达谱没有发生显著变化。　２．７丁香酚影响的其它基因　组成ｕｒｅ操纵子的基因ｕｒｅＡ、ｕｒｅＢ、ｕｒｅＣ、ｕｒｅＥ　和假定的尿素酶转运子基因受到诱导。尿素酶（尿素　酰胺水解酶）含有镍，能催化尿素的水解，生成二分子　氨水和一分子Ｃｏ。。大多数细菌的尿素酶南三个不同　的亚单位组成，这三个亚单位是由三个邻近的基因ｕ—　ｒｅＡ、ｕｆｅＢ和ｕｒｅＣ编码的。除了这些结构基因，尿素　酶基因群也编码附加基因，它们是尿素酶合成所必需　的［２引。由于尿素酶的作用使尿素产生了氨水，因此，　也增强了细菌的耐酸性＿２　。　丁香酚对相关基因的抑制作用可能降低了金黄色　葡萄球菌对环境的适应能力，从而发挥抗感染作用。　２．８未知功能的基因群　芯片分析结果显示，还有大量未知功能的基因的　表达谱也受到了丁香酚的影响，表明丁香酚还有许多　未知的抗菌机制。　３　结论　用全基因组ＤＮＡ芯片研究了药物作用前后细菌　基因表达谱的变化。用２５０　ｇ・ｍＩ　一　的丁香酚处理　金黄色葡萄球菌４５　ｍｉｎ后，表达差异在２倍以上的基　因共有７７８个。丁香酚同时影响了不同途径的关键基　因，如转运子基因、蛋白质合成基因、细胞壁相关基因　和毒力因子相关基因等，不仅干扰了金黄色葡萄球菌　的正常生理过程，而且抑制了其毒素的产生，为临床应　用提供了依据，为作用机制的深入研究提供了线索，为　在基因水平研究传统中药成分及其它天然产物的药理　作用机制奠定了基础。　参考文献：　Ｌ１］　国家药典委员会．中华人民共和国药典２００５版（一部）［Ｍ］．北　京：化学Ｔ业出版社，２００５：３．　Ｅ２］　肖培根．新编中药志（第二卷）［Ｍ３．北京：化学工业出版社，２００２：　６７６．　［３］周建新，许华，金浩．丁香油抑菌效果与抑菌成分的研究［Ｊ］．食品　Ｔ业，２００３，２１（３）：２４　２６．　［４］滕兰菊，桂芳，黄刚，等．公丁香等１　７种中草药对肠道杆菌的体外　抑菌实验［Ｊ］．中医药临床杂志，２００４，１６（５）：４５５—４５６．　［５］宋军，李晶，付庆祥．丁香酚酊治疗浅部真菌病疗效观察［Ｊ１．中国　皮肤性病学杂志，１９９９，ｌ３（１）：２５—２７．　［６１夏明静，曹煜，杨捷，等．２２种抗菌消炎中药有效成分对痤疮丙酸　杆菌的抑制作用ｌＪ］．中华皮肤科杂志，２００１，３４（６）：４３５—４３８．　［７］黄璜，程肖蕊，周文霞，等．基因芯片在药物靶标研究中的应用　［Ｊ］．军事医学科学院院刊，２００６，３０（６）：５８３—５８７．　［８］徐仿周，吴继洲．基因芯片技术在中药中的应用研究进展［Ｊ］．国　外医学：药学分册，２００５，３２（５）：３００—３０３．　［９］张岩，张亮，周一鸣，等．用酿酒酵母全基因组ＤＮＡ芯片研究盐酸　小檗碱的药理作用机制［Ｊ］．中国中西医结合杂志，２００３，２３（１）：　４８　５３．　［１０］　Ｗａｎｇ　Ｄａｅｈｅｎｇ，Ｙｕ　Ｌｕ，Ｘｉａｎｇ　Ｈｕａ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｏｂａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｆｉｌｅｓ　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃ　ｃｌｇｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ　［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｉ　ｅｔｔｅｒ，２００８，２７９（２）：２１７－２２５．　［１１］Ｐａｕｌｓｅｎ　Ｉ　Ｔ，Ｂｒｏｗｎ　Ｍ　Ｈ，Ｓｋｕｒｒａｙ　Ｒ　Ａ．Ｐｒｏｔｏｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｕｌｔｉ—　ｄｒｕｇ　ｅｆｆｌｕｘ　ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｒｅｖ，１９９６，６０（４）：５７５—６０８．　［１　２］李巧如，刘宗智，任健康，等．丁香提取物抗菌机理的探讨［Ｊ］．西　北药学杂志　２００１，１６（６）　２６１－２６２．　［１　３］　Ｕｍｂｒｅｉｔ　Ｊ　Ｎ，Ｓｔｒｏｍｉｎｇｅｒ　Ｊ　Ｉ　．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｉｐｉｄ　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　ｉｎ　ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｅａｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　Ｅｓｃ　ｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｃｔｅ—　ｒｉｏｌ，１９７２，１　２２（３）：１３０６—１３０９．　［１　４］　Ａｋｉｈｉｔｏ　Ｗ，Ｈａｒｕｏ　Ｗ．Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ—ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏ—　ｅｏｃ　ａｕｒｅｕｓ　ｉｓ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ，１９９８，１８０　（１０）：２７５９－２７６５．　［１　５］　Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｙ　Ｋ，Ｆｒａｎｃｉｓ　Ｃ　Ｎ．Ｄ－Ａｌａｎｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ　ａｃｉｄ：　Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉ＞ａｌａｎｙｌ　ｃａｒｒｉｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ａｃｙｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，　２００１，１８３（６）：２０５１—２０５８．　［１６］Ａｂａｃｈｉｎ　Ｅ，Ｐｏｙａｒｔ　Ｃ，Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆＤ－ａｌａｎｙｌ—ｌｉ—　ｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄ　ｆｏｒ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏ（ｙｔｏｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４３（１）：１—１４．　［１　７］Ｐｏｙａｒｔ　Ｃ，Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ　Ｅ，Ｍａｒｃｅａｕ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏ｛、ｕ（（　Ｈ　ａｇａｌａｃｔｉａｅ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｉｎ　Ｄ－ａｌａｎｙｌ—ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｅ　ａｃｉｄ　ｉｓ　ｄｕｅ　ｔｏ　ａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｄｅｆｅｎｓｉｎｓ　ａｎｄ　ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ　ｅｅｌｌｓＥＪ￣．Ｍｏｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，４９（６）：１６１５－１　６２５．　［１　８］　Ｇｅｍｍｅｌｌ　Ｃ（　．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｆａｃｔｏｒｓ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｈｏｓｔ　ｄｅｆｅｎｓｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９１，３　Ｓｕｐｐｌ　１：１０５—１１１．　［１　９Ｊ　Ｓｃｈｌｉｅｖｅｒｔ　Ｐ　Ｍ，Ｋｅｌｌｙ　Ｊ　Ａ．Ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｘｉｃ—ｓｈｏｃｋ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｅｘｏｔｏｘｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，１９８４，ｌ４９（３）：４７１—４７５．　Ｌ２ｏ］Ｋｏｓｚｃｚｏｌ　Ｃ，Ｂｅｒｎａｒｄｏ　Ｋ，Ｋｒｏｎｋｅ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｂｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｑｕｉｎｕ—　维普资讯 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梅妹等：丁香酚对金黄色葡萄球菌全基因组转录水平的影响研究／２００８年第６期　ｐｒｉｓｔｉｎ／ｄａｌｆｏｐｒｉｓｔｉｎ　ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕ一　２００３，２９９（５６０８）：９０６—９０９・　ｒ　“ｓ口］．Ｊ　Ａｎｔｉ７ｎｉｃｒｏｂ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００６，５８（３）：５６４—５７４．　［２１２　Ｌｕｏｎｇ　Ｔ　Ｔ，Ｄｕｎｍａｎ　Ｐ　Ｍ，Ｍｕｒｐｈｙ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｐｒｏｆｉ—　ｌｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｇｒＡ　ｒｅｇｕｌｏｎ　ｉｎ　Ｓｔａｐｈ　３，　０ｃＯＣＣＵＳ　ａｕｒｅｕｓ［Ｊ２．Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉ—　ｏｌ，２００６，１８８（５）：１８９９—１９１０．　［２４２　Ａｌｅｘａｎｄｅｒ　Ｏ　Ｇ，Ｒｉｃｈａｒｄ　Ａ　Ｈｏｌｌｅｙ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｎｎａｍａｌｄｅｈｙｄｅ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｏｆ　ｅｕｇｅｎｏｌ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓａｋｅｉ　ＥＪ　２．　Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，７０（１０）：５７５０—５７５５．　Ｅ２２２　Ｐａｌｌｅｎ　Ｍ　Ｊ，Ｉ．ａｍ　Ａ　Ｃ，Ａｎｔｏｎｉｏ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ｅｍｂａｒｒａｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓｏｒｔａｓｅ——Ａ　ｒｉｃｈｎｅｓｓ　ｏｆ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ［Ｊ２．ＴｒｅｎｄｓＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，９（３）：９７—１０２．　［２５３　Ｂｅｅｎｋｅｎ　Ｋ　Ｅ，Ｄｕｎｍａｎ　Ｐ　Ｍ，ＭｃＡｌｅｅｓｅ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｏｂａｌ　ｇｅｎｅ　ｅｘ—　ｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｂｉｏｆｉｌｍｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ，２００４，　１８６（１４）：４６６５—４６８４．　Ｅ２３３　Ｍａｚｍａｎｉａｎ　Ｓ　Ｋ，Ｓｋａａｒ　Ｅ　Ｐ，Ｇａｓｐａｒ　Ａ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｐａｓｓａｇｅ　ｏｆ　ｈｅｉｎｅ—　Ｅ２６３　Ｍｏｂｌｅｙ　Ｈ　Ｌ，Ｉｓｌａｎｄ　Ｍ　Ｄ，Ｈａｕｓｉｎｇｅｒ　Ｒ　Ｐ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｉｒｏｎ　ａｃｒｏｓｓ　ｔｈｅ　ｅｎｖｅｌｏｐｅ　ｏｆ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｌ－ｅｕｓ　ＥＪ２．Ｓｃｉｅｎｃｅ，　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｕｒｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｒｅｖ，１９９５，５９（３）：４５１－４５５．　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｇｌｏｂａｌ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉ０ｎａｌ　Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｓｆｎｐ　ＺＤｃＤｃｃｚｌ　Ａｕｒｅｕｓ　Ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｅｕｇｅｎｏｌ　ＭＥＩ　Ｍｅｉ　，ＸＩＡＮＧ　Ｈｕａ　，ＤＥＮＧ　Ｘｕ－ｍｉｎｇ　，ＹＵ　Ｌｕ　，ＺＨＡＮＧ　Ｌｉａｎｇ　～，ＷＡＮＧ　Ｄａ—ｃｈｅｎｇ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００６２，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｂｉｏｃｈｉｐ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６，Ｃｈｉｎａ；　３．Ｃａｐｉｔａｌ　Ｂｉｏ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０２２０６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｅｕｇｅｎｏｌ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ，ｇｌｏｂａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｓｕｂｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｕｇｅｎｏｌ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２５９２３　ｗａｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　２５０　ｕｇ・ｍＬ一　ｅｕｇｅｎｏｌ　ｆｏｒ　４５　ｍｉｎ，Ｃｕｓｔｏｍ—ｍａｄｅ　Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ　ＧｅｎｅＣｈｉｐｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｇｌｏｂａｌ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆ　Ｓ．ａｕｒｅｕｓ　ＡＴＣＣ２５９２３　ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ　ｂｙ　ｅｕｇｅｎｏ１．Ａｌｔｏｇｅｔｈｅｒ　３３８　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ａｎｄ　４４０　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｕｐｏｎ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔｏ　ｅｕｇｅｎｏ１．Ｏｆ　ｔｈｅｓｅ，１００　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅｓ，４５　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　３２　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ　ｇｅｎｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｅｕｇｅｎｏ１．Ｅｕｇｅｎｏｌ　ｒｅｐｒｅｓｓｅｄ　ｔｈｅ　ｓｏｒｔａｓｅ—ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ＳＡ０９８２（ｓｒｔＢ）ａｎｄ　Ｉｓｄ　ｇｅｎｅｓ　ｏｎ　ｃｅｌｌ　ｗａｌ１．ＧｅｎｅＣｈｉｐ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｅｕｇｅｎｏｌ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｓ．　ａｕｒｅｕｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙ　ｇｅｎｅｓ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｐｏｒ—　ｔａｔｉｏｎ，ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙｓ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ；ｅｕｇｅｎｏｌ；ＧｅｎｅＣｈｉｐ；ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　（上接第４０页）［７］刘成梅，黄丽，罗舜菁，等．氨苄青霉素人丁抗原的制备及鉴定　ＥＪ］．食品科学，２００７，２８（９）：３８４—３８８．　ｈａｐｔｅｎ　ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｙ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ｏｆ　ａｎ　ｅｎｚｙｍｅ—ｌｉｎｋｅｄ　ｉ　ｕｎｏｓｏｒｂ。“　。。　ｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ。　ｇａｎｏｐｈ。。ｐｈ。　。　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ　ｆｅｎｔｈｉｏｎ［Ｊ］・Ａｎａｌｙｔｉｃａ　Ｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ，２００３，４９４（１－２）：　Ｅ８］王庭华，李官成．抗体理论－ｑ技术［Ｍ］．北京：科学出版社，２００５：　１２２—１３８．　ｒ９］Ｋｉｍ　Ｙ　Ｊ，Ｃｈ。Ｙ　Ａ，Ｉ　ｅｅ　Ｈ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　２９—４Ｏ・　Ｅｌ０］雷红涛，肖治理，方坚生，等．丁草胺人＿Ｔ抗原及抗备研究　ＥＪ２．食品科学，２００７，２８（１０）：６７—７１・　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　Ａｎｔｉｇｅｎ　ｆｏｒ　Ｍｏｎｏｃｒｏｔｏｐｈｏｓ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｔｉｔｅｒｓ　ＸＩＡ　Ｙｉｎｇ，ＬＩ　Ｚｈｏｎｇ－ｚｈｅｎ，ＹＡＮＧ　Ｄｉ，ＹＡＮＧ　Ｘｕ，ＤＩＮＧ　Ｓｈｕ－ｍａｏ，ＹＵＡＮ　Ｊｕｎ—ｌｉｎ　（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００７９，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍｏｎｏｃｒｏｔｏｐｈｏｓ（Ｍｃｐ）ｗａｓ　ｃｏｎｊ　ｕｇａｔｅｄ　ｔｏ　ＢＳＡ　ａｎｄ　ＯＶＡ　ｖｉａ　ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ　ｔｏ　ｍａｋｅ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ａｎ—　ｔｉｇｅｎ　ａｎｄ　ｃｏａｔｉｎｇ　ａｎｔｉｇｅｎ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｎｄ　ＳＤＳ—ＰＡＧＥ．ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｉｃｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｂｙ　ａｒｔＩｆｉｃｉａ１　ａｎｔｉｇｅｎ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔＩｆｉｅｄ　ｂｙ　ＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｊ　ｕｇａｔｅｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　Ｍｃｐ　ｔｏ　ＯＶＡ　ｉｎ　Ｍｃｐ－ＯＶＡ　ｗａｓ　２３．３：１，ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏａｔｉｎｇ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａ＇ｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｍｃｐ—ＯＶＡ　ｗａｓ　１．５　ｇ・ｍＬ一　．Ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｉｔｅｒｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｓｅｒｕｍ　ｒｅａｃｈｅｄ　ａｂｏｖｅ　１：２×１０　ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｒｅｅ　ｔｉｍｅｓ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｏｎｏｃｒｏｔｏｐｈｏｓ；ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ａｎｔｉｇｅｎ；ａｎｔｉｓｅｒｕｍ