人工培养云南冬虫夏草菌粉的抗炎效果的动物实验研究

CN53-1049/R

JournalofKunmingMedicalUniversity

论人工培养云南冬虫夏草菌粉的抗炎效果的动物实验研究

著））））

王峰1，王玲2，张才军2，李冰雪1

（1）云南医学高等专科学校免疫与病原生物学教研室，云南昆明650031；2）昆明医学院免疫与病原

微生物教研室，云南昆明650031）

［摘要］目的研究人工培养云南本土冬虫夏草菌粉（YNCS）在ICR小鼠体内的抗炎效果．方法ICR小

鼠随机分组，每日用不同剂量的YNCS灌胃，观察YNCS对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响和对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响，以判断YNCS的抗炎效果．结果果．

［关键词］冬虫夏草；抗炎；ICR小鼠；云南

文献标识码］A［文章编号］1003－4706（2009）02－0036－04［中图分类号］R285.5［

YNCS低、中、高剂量对二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀有显

YNCS具有一定抑制肿胀的抗炎效

P＜0.05），但对小鼠腹腔毛细血管通透性影响不明显．结论著抑制作用（

Anti-inflammationEffectsofYunnanCordycepsSinensison

））））

WANGFeng1，WANGLing2，ZHANGCai-Jun2，LIBing-Xue1

（1）Dept.ofMicrobiologyandImmunologyofYunnanMedicalCollege，YunnanKunming650031；2）Dept.ofMicrobiologyandImmunology，KunmingMedicalUniversity，KunmingYunnan650031，China）

［Abstract］ObjectiveTostudytheanti-inflammatoryeffectsofculturedYunnanCordycepssinensis（YNCS）inICRmice．MethodsDifferentdosagesofYNCSwereintragastricedtoICRmiceeverydaywhichwererandomlydividedintoseveralgroups．TheYNCSeffectwereobservedinswellingofmousepinneacausedbydimethylbenzeneandcapillaryvesselpenetratingexperiment，inordertostudyYNCSanti-inflammatoryeffects．ResultsVariousdosesofYNCSinhibitedtheswellingofmousepinneadegreeofICRmice（P＜0.05），butYNCShadnosignificanteffectoncapillaryvesselpenetrating．ConclusionYNCShasanti-inflammationeffectstosomeextent.

［Keywords］CordycepsSinensison；Anti-inflammation；ICRmouse；Yunnan冬虫夏草系麦角菌科冬虫夏草寄生在蝙蝠娥科昆虫幼虫的子座及幼虫尸体的复合物，主要产于海拔4000～5000m的高山中，是一种名贵中药材．我国传统中医认为：冬虫夏草性味甘、平，入肺经，功能益肺肾，止咳嗽，补虚损、益精气，是一味滋补强壮的常用中药材[1]．现代医药学研究表明，冬虫夏草化学成分复杂：含有虫草多糖

［基金项目］云南省教育厅基金资助项目（07C410）

1978～），女，云南文山州人，硕士，讲师，主要从事医学免疫学和病原生物学教学和科研工作．［作者简介］王峰（

（cordycepspolysacchride，CP）、氨基酸、甘露醇

及多种微量元素等成分[2]，能发挥抗肿瘤、抗衰老、降血糖、降血压、抗炎、免疫调节等多种功能．但由于天然虫草产地特殊，加之掠夺性开采，导致天然虫草产量有限，价格昂贵．目前人工开发冬虫夏草有效成分的主要途径是液态发酵法，经人工培养虫草菌丝易于得到，价格低廉，其有

第2期人工培养云南冬虫夏草菌粉的抗炎效果的动物实验研究37

效成分及药效接近于天然虫草[3]．近年来，大量实验研究证实，人工培养冬虫夏草对机体免疫功能有剂量依赖性的免疫调节作用．在中药药理学研究中发现，对免疫反应具有抑制或增强等调节作用的一类药物对炎症反应有抑制作用，中药抗炎对抗与免疫密切相关的炎症反应过程，是其抗炎免疫活性药理作用的表现．国内学者的实验研究也有报道人工培养冬虫夏草具有一定的抗炎作用．不同产地的天然冬虫夏草菌株，所发酵生产的虫草菌丝有效成分各不一样，导致其所发挥药效也各不一样．为了解人工培养云南虫草菌粉对小鼠的抗炎作用，本研究选取云南大学微生物研究所云微科贸公司研发培养的云南本土蝙蝠蛾拟青霉菌株冬虫夏草菌粉（yunnancordycepssinensis，YNCS）进行抗炎实验研究，通过观察YNCS对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响和对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响，了解YNCS的抗炎效果．

1材料与方法

实验动物

健康ICR小鼠，体重（20±2）g，购自昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室，随机分3组：生理盐水对照组；YNCS组：分高剂量3.0g/(kg.d)、中剂量1.5g/(kg.d)和低剂量0.75g/(kg.d)；地塞米松组1.5g/(kg.d)．给药期间每组均正常饮食及给水．

1.2主要药品及试剂

云南虫草菌粉（yunnancordycepssinensis，YNCS），由云南大学微生物研究所云微科贸公司提供，药物为粉状，以生理盐水溶解配成高剂量组（1.2g/mL）、中剂量组（0.6g/mL）、低剂量组（0.3g/mL），均为现配现用．地塞米松磷酸钠注射液（dexamethasonesodiumphosphateInjection），浙江仙琚制药股份有限公司产品，国药准字H33020827，5mg×10支，产品批号:050308．生理盐水（NS），昆明南疆制药有限公司产品；二甲苯，重庆南方化学试剂厂产品；伊文思蓝（Evansblue），中国医药公司北京采购供应站提供；醋酸，广东汕头新宁化工厂产品．1.3主要试验仪器1.1

岛津公司产电子天平；722型光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂出品，Q/YXLH4-92型）；8mm口径金属打孔器．1.4试验方法

1.4.1YNCS对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响ICR小鼠60只，雄性，体重（20±2）g，随机分成上述5组，每组12只．将各组所需药物用NS稀释，每日0.5mL灌胃（ig）给药每天1次，连续给药5d，最后1次给药45min后用微量吸样器吸取100%二甲苯（50μL/只），均匀涂于小鼠右耳双面，15min后脱颈处死．立即用直径8mm的打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取下圆形耳片，电子天平分别称重，以两耳片重量差值作为肿胀程度指标[4]．

1.4.2YNCS对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

ICR小鼠60只，雌雄各半，体重（20±2）g，随机分成上述5组，每组12只，雌雄各6只．将各组所需药物用NS稀释，每日0.5mL灌胃1次，连续给药5d，最后1次给药后45min，尾

0.1mL/10g）静脉注射0.5%伊文思蓝0.2mL/只（

后及时腹腔注射0.7%醋酸0.2mL/只，15min后脱颈处死动物，腹腔注射NS5mL，轻揉后抽取腹腔液离心，上清液于722型分光光度计测定

[5]

（OD610nm）．1.5统计学处理

实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS统计软件进行单因素方差分析，各组间两两比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义．

2结果

2.1YNCS对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

结果显示：地塞米松组和YNCS低、中、高剂量组小鼠耳廓肿胀度低于NS对照组小鼠（P＜0.05），YNCS低、中、高剂量组间的抑制肿胀程度无明显差异，见表1．

2.2YNCS对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

结果显示：地塞米松组有显著抑制小鼠腹腔毛细血管通透性作用（P＜0.01）．但YNCS用药组与NS组相比无显著差异性，说明YNCS对小鼠腹腔毛细血管通透性影响不明显，见表2．

38表1

昆明医学院学报YNCS对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（x±s）

第30卷

Tab.1TheeffectofYNCSonswellofmousepinnea

）causedbydimethylbenzene（x±s组

别

n11121211

地塞米松组

12

给药量g/(kg.d)-0.751.53.00.002

肿胀度（mg）19.55±3.4711.50±8.86*11.26±6.14*12.51±7.12*13.55±5.44*

NS组YNCS组

与NS组比较，*P＜0.05.表2

YNCS对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响（x±s））penetrating（x±s组别NS组YNCS组

n1210119

地塞米松组

12

给药量g/(kg.d)

-0.751.53.00.002

OD610nm值0.256±0.1340.266±0.1480.272±0.1990.301±0.1470.061±0.045*

Tab.2TheeffectofYNCSonmousecapillaryvessel

与NS组比较，*P＜0.01.

3讨论

中药药理学研究表明，很多具有免疫药理效

应的中药具有抗炎作用，抗炎与免疫有着密切的联系，炎症反应大多涉及到免疫机制．究其原因，一方面由于某些免疫细胞分泌的细胞因子本身就是炎性细胞因子，如Th细胞分泌的IL-2和单核

）分泌的TNF、IL-α、γ-IFN巨噬细胞（MΦ

等，这些细胞因子可促进炎性细胞的渗出与趋化，激活炎性细胞和引起发热，参与炎症病理性损害．另一方面，炎症细胞多属于免疫细胞，如T细胞、B细胞、MΦ、NK细胞等，它们参与机体的免疫反应过程．一些致炎物质（包括细胞因子）可对相应受体发挥作用，导致各种细胞表现出其特有的免疫功能，如炎性因子致有丝诱导的淋巴细胞增殖、IgE介导的肥大细胞脱颗粒以及白细胞对趋化剂的反应等．相反，在炎症早期出现的一系列症状，如炎性渗出、组织肿胀、血管壁通透性增加等伴有炎症递质水平的提升，也必定相应地影响到相关细胞的免疫功能．因此，抗炎免疫活性药理作用的表现是中药抗炎对抗与免

疫密切相关的炎症反应过程．具有抗炎免疫作用的中药活性成分涉及到多糖、苷、生物碱、内酯、甾体、香豆素、蒽醌、黄酮、鞣质、挥发油等，其成分主要集中在多糖、苷和生物碱[6]．其中

CP）的药理研究表明，CP不仅能促虫草多糖（

进T细胞、B细胞、NK细胞和MΦ等多种免疫细胞的功能，还能促进IL、TNF、γ-IFN等细胞因子的产生，提高机体免疫力而发挥免疫调节作用和抗炎功能[7]．CP的这种抗炎免疫活性多与免疫增强作用有关，通过多糖的免疫增强作用能增加机体对非特异性刺激的抵抗力，减轻致炎因子的损害而起到抗炎的作用，也与活化T细胞、增强巨噬细胞的吞噬能力有关[8,9]．此外中药中的生物碱也是一类常见的抗炎生物活性成分，生物作用广泛．从冬虫夏草中检出的生物碱有虫草素、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、尿苷、腺苷、次黄嘌呤核苷、次黄嘌呤[10]，生物碱的抗炎活性成分较多，国内多个学者对多种中药生物碱的抗炎作用进行了研究，发现了生物碱不同的抗炎机制，如增加炎症白细胞cAMP浓度，从而抑制胸膜液体渗出和白细胞游走[11]．虫草抗炎的机制也可能细胞凋亡有关，1992年，Kerr提出了细胞凋亡的概念，当前细胞凋亡是抗炎药理研究的热点．一些中药成分如雷公藤内酯醇能明显促进致敏大鼠肺及脾淋巴细胞凋亡，可能是抗炎机制之一，并可能通过Fas/FasL途径发挥作用[12]．

在本实验中，通过YNCS抗炎研究发现，YNCS能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓炎症肿胀作用，与国内一些学者发现有相同之处．冬虫夏草和蛹虫草水提液给大鼠腹腔注射，对蛋清诱发的大鼠足跖炎症具有显著的抗炎效果，其抗炎作用可持续6h[13]．但在本实验中YNCS对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响效果不明显，可能与虫草产地、种属、药物剂型等多方面因素有关，其机制有待在后续试验研究中进一步证实．

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第2期人工培养云南冬虫夏草菌粉的抗炎效果的动物实验研究

39

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（2008－07－20收稿）

!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!（上接第24页）

相似，极性相近，很难全部分离，只分离得到三种部分乙酰化产物（即Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ），通过对Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ体外抗HL-60和SMMC-7721肿瘤细胞活性的研究，发现它们均无活性，其它方面的药理活性研究尚在进行中．

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（2008－10－20收稿）