螳甩星痘堂垒查２０垃堡鱼旦蔓！垒鲞复矗期￡地１ｊ里ｈ旦４啦趔。』女ｍ２＿ＯｌＯ＿＿Ｏ，＿盟Ｖ０１．一１９，Ｎ—ｏ．—６・３７３・强直性脊柱炎外周血破骨细胞前体细胞活性的研究赵文华黄少辉陈君敏【摘要】目的研究强直性脊柱炎（ＡＳ）患者外周血破骨细胞前体细胞（ＯＣＰ）的数量及其与血清核因子（ＮＦ）一ＫＢ受体活化因子配体（ＲＡＮＫＬ）和骨保护素（ＯＰＧ）浓度以及与病情活动性的相关性。方法采用ＲＡＮＫＬ和巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ—ＣＳＦ）体外诱导８例Ａｓ患者和５名健康对照的外周血培养破骨细胞（ＯＣｏ应用组织化学染色法对ＯＣ中抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色．计数染色阳性胞核Ｉ＞３个的细胞。骨吸收实验考察ＯＣ的功能。运用酶联免疫吸附试验（Ｅｌ。ＩＳＡ）法检测２３例ＡＳ患者和１７名健康对照血清ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ水平。对ＡＳ疾病活动性进行评估包括Ｂａｔｈ强直性脊柱炎疾病活动指数（ＢＡＳＤＡ！）、红细胞沉降率（ＥＳＲ）、Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）。对ＡＳ患者ＯＣＰ数量与血清ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值及与病情活动性进行相关分析。统计分析采用ｔ检验、￡’检验、Ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析。结果①Ａｓ组外周血生成ＯＣ数量显著高于健康对照组（１０．９±３．４与６．２＋１．３，Ｐ＜０．０５）；②ＡＳ组血清ＲＡＮＫＬ浓度、ＯＰＧ浓度、ＲＡＮＫＩＪＯＰＧ比值显著高于健康对照组［（５．４±３．８）ｐｇ／ｍｌ与（１．６ｉ４）．８）ｐｇ／ｍｌ，（１５７±４９）ｐｇ／ｎ＿ｌｌ与（１０５＋２０）ｐ—ｍｌ，０．０３７±－０．０２６与０．０１６：ｅ０．００８。Ｐ均如．０１）］；③外周血生成０ｃ数量与ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值呈正相关（ｒ＝ｏ．６９２。Ｐ＝０．００９；ｒ＝０．８１３，Ｐ＝０．００１）；④ＡＳ患者血清ＯＰＧ浓度与ＢＡＳＤＡＩ呈负相关（ｒ＝－Ｏ．４４４，Ｐ－－Ｏ．０４４），血清ＲＡＮＫＬ浓度与ＢＡＳＤＡｉ呈正相关（ｒ－－０．５４３。Ｐ＝０．０１１）。ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值与ＢＡＳＤＡＩ旱正相关（ｒ曲．６７２，Ｐ＝０．００１ｏ结论①Ａｓ患者外周血ＯＣＰ数量显著增高，与关节骨质破坏程度密切相关可能是造成关节骨质破坏的机制；②ＡＳ患者ＯＣ活性增高的机制可能是炎症引起ＲＡＮＫＬ产量增多，ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值升高所致。【关键词】脊柱炎，强直性；破骨细胞；骨保护索；破骨前体细胞；核因子（ＮＦ）一ＫＢ受体活化因子配体ＯｓｔｅｏｄａｓｔｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓＨＵＡＮＧＺＨＡ０Ｗｅｎ－ｈｕａ，ＨｏｓｐａｄＳｈａｏ－ｈｕｉ，ＣＨＥＮＪｕｎ－ｒａｉｎ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ＆Ｒｈｅｕｍａｗｌｏａｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔ３５（）００５，ＣｈｉｎａＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＤ厂凡盯洳Ｍｅｄｉｃ甜Ｕｍｖｅｍ血％ＦｕｚｈｏｕＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：Ｃ｜ｆ，ＥＮＪｕｎ—ｍｉｎＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ（０ｃ）ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｉｎｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ（ＡＳ）ａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｓｅｒｕｍｒｅｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒＫＢ—ｌｉｇａｎｄ（ＲＡＮＫＬ）ａｎｄＯｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ（０ＰＧ）ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｓｗｅｉｌａｓｔｈｅｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｅｌｅａｒｃｅｌｌｓｆｒｏｍ８ｃａｓｅｓｏｆＡＳｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄ５ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ（Ｍ－ＣＳＦ）（２５ｎｇ，“）ａｎｄＲＡＮＫＬ（４０ｎｓ／ｎ【１１）．Ａｆｔｅｒｂｅｉｎｇｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ１４ｄａｙｓ，ｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＷａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔａｒｔｒａｔｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｃｉｄｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＴＲＡＰ）ａｎｄｔｈｅｃｅｌｌｓｗｉｔｈＴＲＡＰｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄ≥３ｎｕｃｌｅｉｗｅｒｅｃｏｕｎｔｅｄａｎｄｄｅｆｉｎｅｄａｓＯＣ．ＢｏｎｅｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎａｓｓａｙＷａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｍｏｎｓｔｍｔｅＯＣｆｕｎｅｔｉｏｎ．ＥＬＩＳＡｗａｓｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｏｓｅｒｕｍＲＡＮＫＬａｎｄＯＰＧｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎ２３ｃａｓｅ８ｏｆＡＳａｎｄ１７ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓ．ＴｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐＷａｓａｎＭｙｚｅｄｉｎＡＳｐａｔｉｅｎｔｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆＯＣｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓａｎｄｓｅｒｕｍＲＡＮＫＬａｎｄＯＰＣ．ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｌｉｔ８ｗｅｌｌａｓｔｈｅｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｏｆｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｗｅ／＇ｅＢａｔｈａｎｋｙｉｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓｄｉｓｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｅｘ（ＢＡＳＤＡＩ）。Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｒａｔｅ（ＥＳＲ）ａｎｄＣ—ｒｅａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＲＰ）．Ｔｔｅｓｔ。ｔ’ｔｅｓｔａｎｄＳｐｅａｒｍａｎｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｅｒｅｓｅｌｅｃ—ｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ①ＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｅｒｏｃｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｏｆＡＳｐａｔｉｅｎｔｓｔｈａｎＤＯ！：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－７４８０．２０１０．０６．００４基金项月：福建省教育厅科技项日（ＪＢ０８０８４）作者单位：３５０００５福州，福建医科大学附属第一医院风湿血液科（第一作者现在河南省平煤医疗集团总医院血液肿瘤科）通信作者：陈君敏万方数据・３７４・生堡凰湿透堂盈查２Ｑ！Ｑ堡垒旦筮！垒鲞筮鱼塑￡丛ｇｊ丛￡Ｈ堂逦，ｊＨ坠￡垫！Ｑ，ｙ国！！生理Ｑ：奎ｔｈａｔｏｆｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．ＴｈｅＯＣｎｕｍｂｅｒｐｅｒｔｅｎｆｉｅｌｄｓｗａｓ１０．９±３．４ａｎｄ６．２±１．３ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５）：②１１１ｅｒｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉ艉ｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＡＳｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓｉｎｓｅｒｎｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＯＰＧａｎｄＲＡＮＫＬａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＲＡＮＫＵＯＰＧ．０ＰＧｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＡＳｐａｔｉｅｎｔｓ【（１５７４－４９）ｐｇ／ｍｌｊｔｈａｎｉｎｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓ【（１０５４－２０）ｐ∥ｍｌＪ（Ｐ＜０．０５）．ＲＡＮＫＬｗ鹊ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＡＳｐａｔｉｅｎｔｓ【（５．４±３．８）ｐｇ／ｍｉＪｔｈａｎｉｎｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓ【（１．６±０．８）ｐｇ／ｍｌＪ（Ｐ＜０．０５）．ＴｈｅｒａｔｉｏｏｆＲＡＮＫＬ／０ＰＧｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＡＳｐａｔｉｅｎｔｓ（０．０３７ｉ－Ｏ．０２６）ｔｈａｎｉｎｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓ（０．０１６４－０．００８）（Ｐ＜０．０１）；⑧Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗａｓｏｂｓｅｒｖｅ｛１ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＯＣｎｕｍｂｅｒａｎｔ】ｔｈｅｓｅｒｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＲＡＮＫＬ（ｒ－－Ｏ．６９２．辟０．００９）．ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＲＡＮＫ∽ＰＧ（ｒ＝Ｏ．８１３。Ｐ－－－Ｏ．００１）；④ＩｎＡＳｐａｔｉｅｎｔｓ。鸵ｒｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＯＰＧｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｈａｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＢＡＳＤＡＩ【ｒ＝－０．４４４．Ｐ：ｏ．０４４）．ＳｅｒｕｍＲＡＮＫＬｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｈａｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＢＡＳＤＡＩ（ｒ＝Ｏ．５４３．Ｐ－－－０．０１１）．ＴｈｅｒａｔｉｏｏｆＲＡＮＫＬ／ＯＰＧｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｈａｖｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈＢＡＳＤＡＩ（ｒ＝０．６７２．Ｐ－－－０．００１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ①ＭｏｒｅＯＣｐｒｅｃｔＬｒＳＯｍｅｘｉｓｔｉｎｔｈｅｐｅｒｉｐｈｅｍｌｂｌｏｏｄｏｆＡＳｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅｓｅｃｅｌｌｓｍａｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｏｓｔｅｏｅｌａｓｔｓ。ｗｈｉｃｈｍｉｇｈｔｐｌａｙａｍｈｉｎｉｏｉｎｔｓｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓｉｎＡＳ；②Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｈｉｇｈ０ＣｐｒＩｘｌｕｃｔｉｏｎｉｓＩｉｋｅｌｖｔｏｂｅｄｕｅｔｏｈｉｇｈＲＡＮＫＬｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗｈｉｃｈｉｓｃａｕｓｅｄｂｙｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅａｃｔｉｏｎ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ，ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ；Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ；Ｏｓｔｅｏｌｊｒｏｔｅｇｅｒｉｎ；Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｐｒｅｃｕｒｓｏｒ；ＲｃｅｐｔｏｒａｃｔｉｖａｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｚＢ—ｌｉｇａｎｄ强直性脊柱炎（ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ．ＡＳ）是一种中轴骨ＲＡＮＫＬ（美国ＰｅｐｒｏＴｅｅｈ公司），ＴＲＡＰ染色试剂盒（美国Ｓｉｇ—骼系统的慢性炎症性疾病。累及骶髂关节和脊柱，骶髂关节ｍａ公司），人淋巴细胞分离液（天津灏洋生物制品科技有限责炎的存在是其特征。破骨细胞（ｏｓｔｅｏｅｌａｓｔ，ＯＣ）是骨质吸收主任公司）。牙本质片（英国ＩＤＳ），ＯＰＧ、ＲＡＮＫＬ酶联免疫吸附要功能细胞”。ＯＣ在关节骨质破坏中起重要作用。研究表明，试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒（中美ＵＳＣＮＬＩＦＥ公司）。关节滑膜组织的ＯＣ来源于骨髓的破骨细胞前体细胞（ｏｓｔｅｏ—１．２．２主要仪器：超净ＬＴ作台（苏州净化设备厂。中国），二氧ｃｌａｓｔｐｒｅｃｕｒｓｏｒ，ＯＣＰ）口－３Ｊ，后者在促炎细胞因子的驱使下释放化碳培养箱（ＴｈｅｒｍｏＦｏｒｍａ。美国），荧光倒置相差显微镜（奥到外周血，之后归巢于炎症的关节，不成熟的ＯＣＰ最终分化林巴斯，日本），光学显微镜（奥林巴斯．日本），ＤＴＳ一３型台式为成熟０ＣＭ。尽管ＯＣＰ本身并没有骨吸收能力，但是循环低温自动平衡离心机（北京时代北利离心机有限公司，中ＯＣＰ数量与特定吸收部位的成熟ＯＣ数鼍直接相关。有研究国），Ｍｏｄｅｌ５５０伞自动酶标仪（ＢＩＯ—ＲＡＤ公司。美国）。显示１６１，在Ａｓ患者，反映骨形成的血清骨钙素（６．２４－５．５）ｎｇ／ｍｉ１．２．３对ＡＳ疾病活动性进行评估：包括ＢＡＳＤＡ！、ＥＳＲ、ＣＲＰ。与健康对照组（５．２４－３．３）ｎｇ／ｍｉ相比差异无统计学意义．而反１．２．４细胞诱导：取Ａｓ患者或健康自愿者外周血５ｌＩｌｌ，于水映骨吸收的血清抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）活性（４．２±１．８）平离心机中１０００ｄｍｉｎ离心１０ｒａｉｎ，收集上层血清于灭菌冻Ｕ／Ｌ较对照组（３．４４－１．４）Ｕ／Ｌ明显增高。由此我们推测ＡＳ患者存管中。一２０℃保存备用。将其中８例Ａｓ患者和５例健康自体内骨吸收大于骨形成。ＡＳ患者骨代谢的变化是骨破坏愿者血细胞采用Ｆｉｅｏｌｌ密度梯度离心法分离单个核细胞为主。而不是骨形成减低所致。这与目前大多数学着的观点（ＰＢＭＣｓ），将盖玻片（０．５ｃｍｘＯ．５ｃｍ）超声洗涤后以溶有重铬一致．他们认为ＡＳ并发的骨质疏松丰要由于骨吸收增加所酸钾的浓硫酸浸泡至少２４ｈ，双蒸水充分洗净，高压灭菌。将致１７４。本研究对Ａｓ患者和健康对照组外周血经体外核因子无菌盖玻片置于２４孔培养板中，每孔加入多聚赖氨酸０．２（ＮＦ）一ＫＢ受体活化因子配体（ＲＡＮＫＬ）和巨噬细胞集落刺激ｆＩｌｌ，在３７℃，５％ＣＯ，饱和湿度下的培养箱中温育２ｈ，吸除多因子（Ｍ—ＣＳＦ）诱导生成ＯＣ进行对照研究，并对生成的ＯＣ余多聚赖氨酸，将收集的ＰＢＭＣｓ接种于预置盖玻片的２４孔数量与疾病活动性指标、血清ＲＡＮＫＩ。水平、骨保护素（ＯＰＧ）培养板中，每孔加入０．５ｍｉＰＢＭＣｓ悬液。在３７℃。５％Ｃ０２饱水平和ＲＡＮＫＬｔＯＰＧ进行相关性研究，探讨ＯＣ在ＡＳ发病学和湿度下培养２ｈ，吸除孔中０ｔ—ＭＥＭ培养液及未贴壁的细扮演的角色及可能的机制。胞。然后加入诱导培养液（含２５ｎｇ／ｍｌＭ—ＣＳＦ和４０ｎｇ／ｎｆｌｌ１资料与方法ＲＡＮＫＬ）培养，以后隔天换１次培养液。将紫外线照射（两１．１病例资料面各３０ｒａｉｎ）后的牙本质片放入９６孔培养板中。加入不含血选择２００８－－２００９年在我院住院或门诊治疗的ＡＳ患者清的ｏｔ—ＭＥＭ培养液浸润２ｈ，吸除培养液，将收集的ＰＢＭＣｓ２３例。男性１６例，女性７例，年龄（３３±１４）岁，红细胞沉降率接种于预置牙本质片的９６孔培养板中，每孔加入Ｏ．２“（ＥＳＲ）（４４±３８）ｍｍ／ｌｈ．Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）（６２士６３）耐Ｌ，ＢａｔｈＰＢＭＣｓ悬液。在３７℃，５％ＣＯ，饱和湿度下培养２ｈ，吸除孔强直性脊柱炎疾病活动指数（ＢＡＳＤＡＩ）３．６４－１．５。健康志愿者中ａ—ＭＥＭ培养液及未贴壁的细胞．然后加入诱导培养液（含１７名，男性９名，女性８名，年龄（５２４－１４）岁．ＥＳＲ、ＣＲＰ、ＢＡｓ－２５ｎ∥ｌＩｌｌＭ—ＣＳＦ和４０ｎｇ／ｍｉＲＡＮＫＬ）培养，以后隔天换１次ＤＡＩ均未查。诊断按１９８４年修订的纽约标准搠。培养液。１．２试剂与方法１．２．５细胞形态学观察：用倒置显微镜观察贴壁生长细胞的１．２．１主要试剂：ａ—ＭＥＭ培养基（美国Ｇｉｂｅｏ公司）。胎牛血形态、细胞融合以及多核细胞形成的情况，并拍照。清（杭州四季青生物Ｔ程材料有限公司），细胞因子Ｍ—ＣＳＦ、１．２．６ＴＲＡＰ染色：培养１４ｄ的细胞爬片细胞固定液固定万方数据主堡风暹瘟堂多！蠢２Ｑ！Ｑ堡垒月箍！垒壹第～６舅担丛ｎｊ』ｔ蛙坚ｇ逊９ＩＬｊｕｎ￡２Ｑ！Ｑ，ｊ塑！！生照Ｑ：夤・３７５・３０ｓ，去离子水冲洗。将细胞爬片浸入染色孵育液。３７℃，避光孵育ｌｈ，去离子水冲洗，苏木精复染，碱性液冲洗，晾干。中性树胶封片，１００倍光镜下观察含有３个细胞核以上染色阳性的多核巨细胞为ＯＣ，计数ｌＯ个视野ＯＣ，每张爬片重复计数３次．取其均数。１．２．７骨吸收实验：诱导培养２１ｄ后。取出９６孔板中的牙本质片，在２．５ｇ，Ｌ氧氧化铵中以５０Ｈｚ超声清洗５ｒａｉｎ，并用蒸馏水反复冲洗以去除贴附细胞。１％甲苯胺蓝室温染色５ｍｉｎ。蒸馏水冲洗后晾干，光镜Ｆ观察骨吸收陷窝。１．２．８血清ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ水平检测：采集ＡＳ患者和健康对照者外周血。分离血清。一２０℃保存。检测时。将血清取出，静置至事温，按ＥＵＳＡ试剂盒说明书操作。４５０ｎｎｉ光波处测吸光度值（月）。ｌ－３统计学处理所有数据采用；岛表示，采用ＳＰＳＳ１３．０软件进行统计分析。方差齐者采用两样本均数￡检验，方差不齐者采用ｔ’检验，比较ＡＳ组和健康对照组之间ＯＣ数量、ＯＰＧ水平和ＲＡＮＫＬ水平及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值。分析ＯＣ数琶与ＡＳ患者疾病活动性及血清中ＯＰＧ水平和ＲＡＮＫＬ水平及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值的相关性。血清中ＯＰＧ水平和ＲＡＮＫＬ水平及ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值与ＡＳ患者疾病活动性的相关性，相关性分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ方法。Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。２结果２．１细胞形态学观察：细胞经诱导培养３ｄ，漂浮的细胞逐渐减少，贴壁细胞开始汇集，细胞呈小簇分布。培养至第８天，出现以一个细胞为中心，临近细胞向其聚集状。或多个细胞成簇成团状。成纤维样细胞明显增多，可见部分多核细胞，圆形或不规则形，有时可见伪足。培养至第１４天，可见多个多核细胞，胞体明显较其他血细胞大，折光性强。形态有油煎蛋形、长条形、漏斗形或不规则形．有裙状或丝状伪足，胞内有５—２０个核．胞质中有较多李泡（见图１ｏ２．２ＡＳ组和健康对照组ＴＲＡＰ染色结果：对培养１４ｄ的细胞爬片行ＴＲＡＰ染色，ＴＲＡＰ染色呈阳性反应的细胞，显微镜下见紫红色颗粒样沉淀，分布于全部或大部分胞质。细胞核呈阴性，经苏木精复染后，细胞核旱淡蓝色，胞核５～２０个不等。ＡＳ组ＴＲＡＰ染色阳性多核巨细胞明显多于健康对照组，２组细胞形态差异无统计学意义（见图２）。２．３ＡＳ组和健康对照组骨吸收陷窝比较：与ＯＣ共同培养２１ｄ的牙本质片．在光镜下可见到大小不等、深浅不一的骨吸收陷窝，呈腊肠形、圆形、椭圆形等。经甲苯胺蓝染色后．光镜下观察骨吸收陷窝呈蓝紫色异染．圆形、椭圆形或腊肠形的形态特征，边界清晰，大小不一。光镜下可见，ＡＳ患者骨吸收陷窝较多较密集．所占面积较大。健康对照组患者骨吸收陷窝数量较少较稀疏．所占面积较／ｂ（见图３ｏ２．４ＡＳ组和健康对照组ＯＣ数量比较：对细胞培养组培养１４ｄ的细胞爬片进行ＴＲＡＰ染色，ＡＳ组ＯＣ数量显著高于健康对照组（Ｐ＜０．０５）．见表Ｉ。２．５ＡＳ组和健康对照组血清ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ水平：ＡＳ组的万方数据表１ＡＳ组与健康对照组ＯＣ数缝比较（；蝴）注：－与健康对照组比较Ｐ＜０．０５血清ＲＡＮＫＬ水平、ＯＰＧ水平和ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值均显著高于健康对照组（Ｐ＜０．０５），见表２。表２ＡＳ组和健康对照组血清ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ浓度比较（；蝴）ｐｇ／ｍｌ注：・与健康对照组比较Ｐ＜０．０５２．６ＯＣ数量与疾病活动性相关性分析：对８例Ａｓ患者外周血诱导生成的ＯＣ数馈同疾病活动性进行相关分析。ＯＣ数量与ＥＳＲ、ＣＲＰ和ＢＡＳＤＡ！无相关性（Ｐ＞Ｏ．０５）。２．７ＯＣ数昔与血清ＲＡＮＫＩ．水平、ＯＰＧ水平和ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值相关性分析：对８例ＡＳ患者和５名健康对照者外周血诱导生成的ＯＣ数量与血清ＲＡＮＫＬ水平、ＯＰＧ水平、ＲＡＮ—ＫＩｄＯＰＧ比值进行相关分析。ＯＣ数量与ＲＡＮＫＩ．水平呈正相关（ｒ＝Ｏ．６９２，Ｐ＝Ｏ．００９），与ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值呈正相关（ｒ－－０．８１３．Ｐ＝０．００１）。与ＯＰＧ水平无相关性（Ｐ＞Ｏ．０５ｏ２．８ＡＳ患者血清ＲＡＮＫＬ水平、ＯＰＧ水平、ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值与ＡＳ疾病活动性相关分析：对２３例ＡＳ血清ＲＡＮＫＬ水平、ＯＰＧ水平、ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值同疾病活动性进行相关性分析，ＲＡＮＫＬ水平与ＢＡＳＤＡＩ呈正相关（ｒ＝０．５４３，Ｐ－－－０．Ｏ！１），ＯＰＧ水平与ＢＡＳＤＡＩ呈负相关（ｒ：－０．４４４。Ｐ＝０．０４４），ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值与ＢＡＳＤＡＩ呈正相关（ｒ＝Ｏ．６７２，Ｐ＝０．００１），ＲＡＮＫＬ水平、ＯＰＧ水平及ＲＡＮＫｕＯＰＧ比值与ＥＳＲ和ＣｌＩＰ水平无相关性（Ｐ＞Ｏ．０５ｏ３讨论现今认为Ａｓ的炎症过程主要集中在软骨下骨区域ｆｌｑ，ＡＳ患者骶髂关节活组织检查发现大量特征性ＣＤ６８＋ＯＣＩ＿＂蝈及ＴＲＡＰ染色阳性细胞（ＯＣ），提示ＯＣ在ＡＳ发病机制中起重要作用，与关节的骨质破坏有关。我们的研究显示，ＡＳ组生成的ＯＣ数量显著升高。骨吸收实验的陷窝面积也较大．说明ＡＳ外周血中ＯＣＰ数量及其向ＯＣ分化的能力增加，即ＯＣ活性增强。外周血诱导培养的ＯＣ是否能代表Ａｓ患者体内骨组织微环境中炎症部位的中ＯＣ数量和功能还需进一步研究，赵伟和黄烽ｌ－２研究发现，ＡＳ患者滑膜衬基层中ＴＲＡＰ染色阳性细胞（２１．４±１６．６）％比例显著高于对照组（５．８±１．８）％。提示外周血中ＯＣＰ很可能是关节炎症部位ＯＣ的来源。本研究采用ＥＳＲ、ＣＲＰ及ＢＡＳＤＡＩ评估ＡＳ的疾病活动性。ＢＡＳＤＡＩ为较好的临床观察指标。其项目均为临床症状和体征。ＢＡＳＤＡＩ对患者过去ｌ周的疲劳、脊柱痛、外周关节痛、・３７６・主堡盟堡瘟堂盘查２Ｑ！Ｑ堡垒旦筮！璺鲞筮§翅￡丛Ｑ』珏ｈ１９堂坦！：ｊⅡ塑垫！Ｑ，ｙ丛：！生ⅨＱ：§局限性压痛、晨僵时间和程度五大症状的６个项目进行评价，因而更为实用、町靠、敏感和全面。然ｆｆｌｉＢＡＳＤＡＩ容易受患者辛观因素的影响。ＥＳＲ和ＣＲＰ是重要的炎症指标，在ＡＳ患者急性炎症期，ＥＳＲ、ＣＲＰ往往增高１１３Ｉ。本研究结果显示，外周血生成的ＯＣ数量与ＥＳＲ、ＣＲＰ、ＢＡＳＤＡＩ无相关性，不过本组例数少．可能不足于发现其问的相关联系。本研究采用ＥＬＩＳＡ法测血清中ＲＡＮＫＬ和ＯＰＧ浓度，结果发现ＡＳ患者血清ＲＡＮＫＩ。水平显著高于健康对照组，而且ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值也较埘照组显著升高。进一步分析发现，ＡＳ患者外周血培养的ＯＣ数鼍与血清ＲＡＮＫＩ．浓度及ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值均呈正相关。因此我们推测，血清ＲＡＮＫＬ升高与ＯＣＰ增多有因果关系。至于ＡＳ患者血清ＲＡＮＫＬ升高的原因，我们认为与大量Ｔ细胞被激活有关。因为有研究发现，活化的Ｔ细胞分泌ＲＡＮＫＬｌ州ｑ，而ＡＳ患者的炎症关节有明显的Ｔ细胞浸润ｔ１７－１１１１。另外，我们的研究也发现ＯＰＧ作为负反馈调节因子。表达量相对也升高，与耿丽和刘秀梅１６１的研究结果相似。周燕莉等１１９１在老年骨质疏松患者可出现血清中的ＯＰＧ（１０８．６＋７．１）ｎｇ／Ｌ显著增高，作者认为是机体对抗骨吸收的一种代偿性表现。本文研究中ＡＳ患者ＯＰＧ水平较健康者高，可能与ＡＳ患者体内存在成骨过度（如脊柱旁骨赘形成现象）有关，另外其升高的意义可能还在于对ＡＳ关节局部的保护作用，这可能是机体对抗骨吸收的一种代偿性表现，Ａｓ可能通过上调血清中ＯＰＧ的表达水平来对抗骨质疏松，但ＲＡＮＫＬ的表达也明显上调，且上调水平远远超过ＯＰＧ表达的水平，故ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值仍然升高。因此，ＡＳ患者除表现关节骨质破坏，还存在不同程度的骨质疏松。对２３例ＡＳ患者血清ＲＡＮＫＬ浓度、ＯＰＧ浓度、ＲＡＮＫＵＯＰＧ比值同疾病活动性指标进行相关性分析．提示ＯＰＧ／ＲＡＮＫ／ＲＡＮＫＬ系统通过介导ＯＣ的生成分化，ＯＣ的功能．ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比例升高，促进ＯＣ生成，增强ＯＣ骨吸收功能，引起ＡＳ患者关节骨质破坏。同时也提示ＲＡＮＫＬ浓度及ＲＡＮＫＬ／ＯＰＧ比值可以反映ＡＳ患者疾病活动性，可能是评价（本文图１。３见插页第６一ｌ页）参考文献１１】ＴｅｉｔｅｌｂａｕｍＳＬＢｏｎｅｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎｂｙｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，２８９：１５０４＿１５０８．【２】ＲｉｔｃｈｌｉｎＣ．Ｔｈｅｑｕｅｓｔｆｏｒａｂｉｏｍａｒｋｅｒｏｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓＴｈｅｒ，２００９，１ｈ１１３．［３１ＱｕｉｎｎＪＭ，ＥｌｌｉｏｔｔＪ．ＧｉｌｌｅｓｐｉｅＭＴ．ｅｔａ１．Ａｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆ０６一ｔｅｏｃｌａｓｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒａｎｄｎｍｅｍｐｈａｇｅ－－ｅⅪｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒｉｓｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔｆｏｒｂｏｔｈｈｕｍａｎａｎｄｉｎｏｌｌｓｅｏｓｔｃｏｃｌａｓｔｆｏｒｍａｔｉｏｎ／ｎｖ／ｔｒｏ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９８．１３９：４４２４－４４２７．【４】ＬｉＰ。ＳｃｈｗａｒｚＥＭ。Ｏ’ＫｅｄｅＲＪ，ｅｌ８１．Ｓｙｓｔｅｍｉｃｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｕｒａｌｐｈａｍｅｄｉａｔｅｓ８１１ｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌＣＤＩｌｂｈｉｇ｝１０６－ｔｅｏｃｌａｓｔｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓｉｎｔｕｍｏｒｎｏｅｒｏｓｉｓｆａｅｔｕｒａｌｐｈａ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｅｍｉｃｅ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ。２００４．５０：２６５－２７６．万方数据ｆ５】ＤｅＫｌｅｒｅｋＢ。Ｃａｒｐｅｎｔｉｅｒｌ。Ｌｏｒｉ船ＲＪ．ｅｔａ１．Ｅｎｈａｎｃｅｄｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｃｏｌｌａｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｉｎｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ｇａｍｍａｒｅｃｅｐｔｏｒｋｎｏｃｋ－ｏｕｔｍｉｃｅ∞ｒｅｌａｔｅｄｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｄｓｐｌｅｎｉｃＣＤＩＩｂ＋ｍｙｅｌｏｐｏｉｅｓｉｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓＴｈｅｒ。２００４。６：２２０－２３１．【６１耿丽．刘秀梅．强直性脊柱炎骨代谢的研究．中国骨质疏松杂志，２００８，１４：３２８—３３１．【７】ＹｉｌｍａｚＮ，ＯｚａｓｌａｎＪ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｂｏｎｅｔｕｒｎｏｖｅｒｍａｒｋｅｒｓｉｎｐａ－ｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈ。ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ．ＣｌｉｎＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２０００・１９：９２－９８．【８】ＡｃｅｂｅｓＣ。ｄｅｌａＰｉｅｄｍＣ，ＴｒａｂａＭＬ，ｅｔａ１．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｍａｒｋ－ｅｒｒｏｆｂｏｎｅｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇａｎｄｂｏｎｅｓｉａｌｏｐｒｏｔｅｉｎｉｎａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ．ＣｌｉｎＣｈｉｍＡｃｔａ．１９９９．２８９：９９－１ＩＯ．【９】ＶａｎｄｅｒＬｉｎｄｅｎＳ，ＶａｌｋｅｎｂｕｒｇＨＡ．ＣａｔｓＡ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｄｉａｇ－ｎｏｓｔｉｃｃｒｉｔｅｒｉａｆｏｒａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ：ａｐｍｐ∞ａｌｆｏｒｍｅｄｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｏｆｔｈｅＮｅｗＹｏｒｋｃｒｉｔｅｒｉａ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ，１９８４，２７：３６１—３６８．ＨａｉｂｅｌＨ，ＢｒａｕｎＪ，ＭａｌｋｓｙｍｅｗｙｃｈＷＰ．Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ－ｔａｒｇｅｔ－ｉｎｇｂｏｎｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＣｉｉｎＥｘｐＲｈｅｕｍａ－ｔ０１．２００２．２０（６Ｓｕｐｐｌ２８）：１６２－１６６．Ｐｄ，ＮｅｕｒｅＬ，ＳｉｅｐｅｒＪ。ｅｔａ１．１ｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｅｘａｎｌ－ｉｎａｔｉｏｎｏｆｏｐｅｎｓａｃｒｏｉｌｉａｃｂｉｏｐｓｉｅｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｕｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｉｎｔｗｏｐａ－ｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｅａｒｌｙｄｉｓｅａｓｅａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｂｅｔａｉｎｔｈｒｅｅｎｌｏｒｅＭｖａｎｃｅｄｃａ８∞．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ．２００６。６５：７１３—７２０．在外周关节骨质破坏病理机制中的作用．医学杂志，２００５，３０：９８１—９８４．ＭＭ．Ｒｅｌａｔｉｖｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏｃｈａｎｇｅｏｆｔｈｅｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ８ｅｄｉ—ｍｅｎｔａｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｓｅｒｕｍＣ－ｒｅａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＪＲｈｅｕｍａｔ０１．２００４。３ｌ：８８４—８９５．ＫｏｎｇＹＹ・ＦｅｉｇｅＵ，ＳａｒｏｓｉＩ，ｅｔａ１．ＡｃｔｉｖａｔｅｄＴｃｅｌｌｓｒｅｇｕｌａｔｅｂｏｎｅｌｏｓｓａｎｄｊｏｉｎｔｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎｉｎａｄｊｕｖａｎｔａｒｔｈｒｉｔｉｓｔｈｒｏｕｇｈｏａｔｅｏ－ｐｍｔｅｇｅｒｉｎｌｉｇａｎｄ．Ｎａｔｕｒｅ，１９９９，４０２：３０４－３００．ＴａｋａｙａｎａｇｉＨ，ＯｇａｓａｗａｒａＫ，ＨｉｄａＳ，ｅｔａ１．Ｔ－ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｃｒｏｓｓ－ｔａｌｋｂｅｔｗｅｅｎＲＡＮＫＬａｎｄＩＦＮ－ｇａｍｍａ．Ｎａｔｕｒｅ．２０００．４０８：６００－６０５．ＳｔｕｐｐｈａｎｎＤ，ＲａｕｎｅｒＭ，ＫｒｅｎｂｅｋＤ，ｅｔａ１．ＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄｓｕｒｆａｃｅＲＡＮＫＬ呲ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｄｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｎｋｙ－ｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ．Ｂｈｅｕｍａｔｏｌｉｎｔ，２００８，２８：９８７－９９３．ＦｒａｎｃｏｉｓＰｄ・ＧａｒｄｎｅｒＤＬ。ＤｅｇｒａｖｅＥＪ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｅｖｉｄｅｎｃｅｔｈａｔｓａｃｍｉｌｉｉｔｉｓｉｎａｎｋｙｌｏｓｉｎｇｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓｉｓｎｏｔｍｅｒｅｌｙｅｎｔｈｅｓｉｔｉｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｈｅｕｍ。２０００，４３：２０ｌ１－２０＂２４．Ｌ，ＶｏｉｓｉｎＭＣ．Ａ］］ｓＪｎＪ，ｅｌａ１．１ｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｙｏｆｅｎｔｈｅｓｅｓｉｎｓｐｏｎｄｙｌｏａｒｔｈｍｐａｔｈｉｅｓ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓａｎｄｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ，２００１．６０：３１６－３２１．护素、核冈子一ＫＢ受体活化子配体的变化及其与骨密度的关系．广东医学，２∞５，２６：４８５－４８６．（收稿１３期：２００９—１０－２３）（本文编辑：郝慧琴）【１０Ｊ【１５Ｊｆ１４Ｊ【ｌｌ】Ｆｒａｎｃｏｉｓ【１２】赵伟，黄烽．破骨细胞在强直性脊柱炎滑膜组织中的分化及其【１３】Ｗａｒｄ疾病活动性的有效方法。【１６１【１７１ｆ１８】Ｌａｌｏｎｘ【１９Ｊ周燕莉。李婷，金大地．男性老年性骨质疏松症患者血清骨保强直性脊柱炎外周血破骨细胞前体细胞活性的研究ｍ文见第３７３页漤目ＩｐＢＭＮＣ＿镕｝＊谇０ｃＰＢＭＣ』Ａ☆ＲＡＮＫｔⅫＭＣＳＦ＊３★ｘ２０３Ｂｑ舻ＭＥＭ镕＃ｇ＊＃（８：ｂ：镕Ｒ＊船∞一＃１４＊ｆａ＾ｓｎ∞ｄＲＢ《‰）目２＾ｓｅ＊目Ⅱ康＂ＨⅫ№《Ｈ∞ＴＲＡＰｍｅ镕％ｘ１００：ｈⅡ女Ｈ”“００）目３＾ｓ＆＊Ⅻ＊女ｗＭ＊ｑ“ｍ☆ｌｔ＃”＊％《女也￡镕Ｔｍｇ（“：¨删．ｊ，：＊№＂旦眭×４００）小剂量白细胞介素一Ｉ８联合自细胞介素一１０在早期Ⅱ型胶原诱导性关节炎的作用研究∞１＊＊ｍ≈ｌ自ⅫⅡＥ（一＊～女＃目№Ｈ月＆☆目Ⅱ＃日＆“自口＆目．＊ｍｍｔＰｔ，ｃ自＊＃杜＊：ｓ☆Ｈ＃Ｍａｌｈ，ｒ）女色＊４。ｌ万方数据
