Lowry法检测蛋白质的含量

一、实验原理：首先在碱性条件下蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜复合物，该复合物加入酚试剂后产生蓝色复合物。该蓝色复合物在650nm处的吸光度值与蛋白质的含量成正比，根据供试品的吸光度,计算供试品的蛋白质含量。

二、配液

碱性酒石酸盐溶液:称取无水碳酸钠20.0g，氢氧化钠4。0g，酒石酸钾钠0.2g,加水至1L，溶解混匀。

硫酸铜溶液：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O）1.0g,加水至200ml，溶解混匀.

碱性铜溶液（现用现配):量取溶液A 100ml,溶液B 2ml，混匀即得。

标准蛋白质储备液（1mg/ml)：用纯化水将牛血清白蛋白对照品定量稀释至1mg/ml，混合均匀,用1。5ml离心管分装，1ml/管，贴好标签，于-20℃或以下低温冰箱贮存。

标准蛋白质工作液(100μg/ml）：将标准蛋白质贮备液用前10倍稀释至100μg/ml。

阳性对照(约50μg/ml的牛血清白蛋白溶液） :精密称取牛血清白蛋白25mg，加纯化水溶解,加入500ml容量瓶中，定容至刻度，混合均匀，冷冻管分装,每管2。5ml，贴好标签，于-20℃或以下低温冰箱贮存,有效期两年。

三、步骤：

1.将标准蛋白质贮备液（1mg/ml）稀释成100μg/ml的标准工作液。2。量取标准工作液（双份）0.2ml、0.4ml、0.6ml、0。8ml、1。0ml,分别加入刻度试管中，补水至1ml。

3。精密量取供试品和阳性对照1.0ml（双份）于刻度试管中;吸取1.0ml纯化水作为空白对照。

4.加碱性铜溶液（溶液A100ml、溶液B2ml混匀)5。0ml到每一管中，涡旋混匀，室温条件放置10分钟。

5.加酚试剂(稀释至1N)0。5ml，摇匀，室温放置30分钟。

6。在650nm处用空白对照调零后，测定标准溶液的吸光度值,以及供试品和阳性对照的吸光度值。根据标准蛋白浓度和其对应吸光度的标准曲线，计算供试品和阳性对照的蛋白含量。