中国国境卫生检疫杂志２０１５年６月第３８卷第３期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｊｕｎ．２０１５．Ｖｏｌ ３８．Ｎｏ＿３ ・１５７・ ・实验研究与疾病监测・ 一种快速筛查金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫 层析方法的建立 史咏梅 ，何晖。，谭华 ，冯子力 ，伍碧梅 ，朱海。，涂承宁 ，唐 ，杨泽 ，汪海波 １．珠海国际旅行卫生保健中心，广东珠海５１９０２０；２．广州市疾病预防控制中心；３．深圳市易瑞生物技术有限公司 摘要：目的 建立一种快速筛查金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析检测方法。方法 以荧光纳米颗粒作为示踪标 记物．采用双抗体夹心法检测金黄色葡萄球菌Ａ蛋白，制备了稀土离子标记的免疫层析试纸条，在紫外激发光源下判 断反应结果。对该方法的特异性、敏感性和样本检测的适用性进行了分析。结果 所制备的试纸条具有良好的特异 性，与表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、志贺菌、大肠杆菌、Ｏ１／Ｏ１３９群霍乱弧菌、副溶血 性弧菌均无交叉反应。用该试纸条检测纯菌液和未经培养的粪便、呕吐物的灵敏度为７．２ｘ１０ ＣＦＵ／ｍｌ，检测经培养的 模拟污染食物样本、粪便样本的检测限最低为７．２ｘ１０ ＣＦＵ／ｍｌ，反应在１５ ｍｉｎ内完成。结论本研究成功建立了金黄 色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析检测方法，能够快速检测食品、奶制品、呕吐物、粪便中的金黄色葡萄球菌，具有良好 的特异性和灵敏性，便于开展现场快速检测。 关键词：荧光纳米颗粒：免疫层析试纸条：金黄色葡萄球菌Ａ蛋白 中图分类号：Ｒ１１７文献标识码：Ｂ ＤＯＩ：１０．１６４０８０．１００４—９７７０．２０１５．０３．００２ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｌａｂｅｌｅｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏ－ ｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＳＨＩ Ｙｏｎｇ－ｍｅｉ ，ＨＥ Ｈｕｉ，ＴＡＮ Ｈｕａ，ＦＥＮＧ Ｚｉ—ｌｉ，ＷＵ Ｂｉ—ｍｅｉ，ＺＨＵ Ｈａｉ，ＴＵ Ｃｈｅｎｇ—ｎｉｎｇ， ＴＡＮＧ Ｍｉｎｇ—ｈｕｉ，ＹＡＮＧ Ｚｅ，Ｗａｎｇ Ｈａｉ－ｂｏ ＂Ｚｈｕｈａｉ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｒａｖｅｌ Ｈｅａｈｈｃａｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｚｈｕｈａｉ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１９０２０，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｌａｂｅｌｅｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｔｉｒｐ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｏ２ｚｒｅｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｏ２ｔｒｅｕｓ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｔｒｉｐ ｉｎ ａ ｓａｎｄｗｉｃｈ ｆｏｒｍａｔ．Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ＵＶ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｉｐ ｗｅｒｅ ｅｖａｌｒｕａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｓｔｉｐ ｓｈｏｗｅｄ ｎｏ ｃｒｏｓｓ—ｒｅａｃｔｒｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ， Ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ，Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ，Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒ￣Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ坛Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ ０１／０１０９，Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｉｔｓ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｉｐ ｗａｓ ７．ｒ２Ｘ１０４ ＣＦＵ／ ｍＬ ｗｈｅｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｑｕｉｄ，ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ ｖｏｍｉｔ ｏｒ ｓｔｏｏｌ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ．Ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｒｅａｃｈ ａｓ ｌｏｗ ａｓ ７．２ｘｌＯ ＣＦＵ／ｍＬ ｗｈｅｎ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔ ｍｉｌｋ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｆｉｎｉｓｈｅｄ ｉｎ １５ ｍｉｎ ａｎｄ ｗａｓ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｔｏ ｆｏｏｄ，ｍｉｌｋ，ｖｏｍｉｔ ａｎｄ ｓｔｏｏｌ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｌａｂｅｌｅｄ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｔｒｉｐ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｓｈｏｗｅｄ ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｐｈｙｌａｏｃｏｃｃｕｓ ｏ２ｔｒｅｕｓ ｉｎ ｆｏｏｄ，ｍｉｌｋ，ｖｏｍｉｔ ａｎｄ ｓｔｏｏｌ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｖａｌｕａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｌｏｃａｌｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ；ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｔｒｉｐ；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ 金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｏＪｚｒｅｕｓ）属于 葡萄球菌属（Ｓｔｏｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ），是革兰氏阳性菌的代 表。在自然界分布极其广泛，存在于空气、水、土壤、 灰尘及人和动物的排泄物中【”。金黄色葡萄球菌是 一种条件致病菌，也是一种引起院内感染和食物中 毒的重要病原菌。本研究拟采用时间分辨免疫荧光 纳米颗粒作为信号标记物，以金黄色葡萄球菌Ａ蛋 白（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ，ＳＰＡ）为靶蛋白，建立能 基金项目：国家质检总局科技计划项目（２０１３ＩＫ２４８），广东省科技厅科研基金项目（２０１３Ｂ０４０４０２００１） 通讯作者：汪海波，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｈｂ１０１３＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎ ｌ５８・ 中国国境卫生检疫杂志２０１５年６月第３８卷第３期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｊｕｎ．２０１５，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．３ 快速高灵敏检测金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层 析方法。 １材料与方法 １．１ 材料 牛血清白蛋白（ＢＳＡ）购自生工生物工 程（上海）股份有限公司；ＳＰＡ单克隆抗体（鼠）、荧光 纳米颗粒（４０ ｎｍ，氧化硅包裹铕螯合物）由深圳市易 瑞生物技术有限公司研制；羊抗鼠ＩｇＧ购自华美生 物公司；纤维素膜（ＮＣ膜）、玻璃纤维素膜购自 德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司：ＰＶＣ底板、吸水垫购自Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ 公司；培养基购自北京陆桥公司。所有试剂均为分 析纯。 １．２ 方法 １．２．１ 荧光颗粒单抗偶联物的制备 １．２．１．１荧光纳米颗粒的表面修饰［２１取适量荧光纳 米颗粒加入氨基硅烷乙醇溶液中，加热回流１２—２４ ｈ， 用乙醇洗涤加热回流后产物。用戊二酸酐的二甲基甲 酰胺（ＤＭＦ）饱和溶液重悬纳米颗粒，室温搅拌２￣４ ｈ。 次用乙醇洗涤纳米颗粒，用双蒸水重悬纳米颗粒， 制成１ ｍｇ／ｍｌ悬浮液备用。 １．２．１．２荧光纳米颗粒一抗体偶联物的制备取５０ ｌ 修饰后的荧光纳米颗粒加入５５０ ｔｘｌ浓度为５Ｏ ｍｍｏｌ／Ｌ的２一吗啉乙磺酸（ＭＥＳ，ｐＨ６．０），再加入１００ ｍｇ／ｍｌ的Ｎ一羟基硫代琥珀酰亚胺（ｓｕｌｆ０一ＮＨＳ）和１一 （３一二甲氨基丙基）一３一乙基碳二亚胺盐酸盐（ＥＤＣ） 各２００ ｔｘｌ，２５￣５℃摇动３０ ｍｉｎ。离心，弃去上清液，用 １ ｍｌ ＭＥＳ（５０ ｍｍｏｌ／Ｌ）重悬颗粒。加入适量ＳＰＡ单 克隆抗体，２５￣５℃振摇１ ｈ。再加入等体积２％牛血 清白蛋白一磷酸盐缓冲液（ＢＳＡ—ＰＢＳ，ｐＨ７．４），继续振 摇ｌ ｈ。离心，弃去上清液，用１ ｍｌ ＭＥＳ（５０ ｍｍｏｌ／Ｌ）洗 涤颗粒，共洗涤３次。最后用３００ ｌ的１０ ｍｍｏｌＦＬ Ｔｒｉｓ—ＨＣＩ（ｐＨ８．０）重悬颗粒，４℃保存备用。 １．２．２荧光纳米颗粒试纸条的制备 １．２．２．１纤维膜 １．２．２．１．１ Ｔ（检测线）线将ＳＰＡ单克隆抗体用５Ｏ ｍｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ（ｐＨ７．４）＋１％海藻糖稀释至２ ｍｇ／ｍ１．按照 ｌ￣ｌ／ｃｍ喷膜，３７℃干燥３ ｄ。 １．２．２．１．２ Ｃ（控制线）线将羊抗鼠ＩｇＧ稀释至０．１ ｍｇ／ｍｌ，按照１ Ｉｘｌ／ｃｍ喷膜，室温过夜干燥。 １．２．２．２结合垫 将玻璃纤维素膜用５０ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０，１％ＢＳＡ，０．５％Ｔｗｅｅｎ２０浸泡，室温过夜 十燥。将标记好的荧光颗粒用超纯水稀释ｌＯ倍，浸 泡结合垫，室温过夜干燥。 １．２．２－３样本垫 将玻璃纤维素膜用１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．０，ｌ％海藻糖，１％ＢＳＡ，０．５％Ｔｗｅｅｎ２０，１００ ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣ１，２％ＰＶＰ一３０浸泡，室温过夜干燥。 １．２．２．４试纸条组装将处理好的样本垫、结合垫、 纤维膜及吸水垫粘贴到ＰＶＣ底板上，裁成３．５ ｍｍ宽的试纸条，２—８。【＝干燥保存。 １．２－３检测方法 取１００ Ｉｘｌ过夜培养的细菌原液、 水样粪便、呕吐物加到试纸条的样本垫上，１０ ｍｉｎ后 在紫外灯下判读结果。 １．２－３．１ 特异性实验将表皮葡萄球菌、腐生葡萄 球菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、志贺菌、大肠 杆菌、Ｏ１群霍乱弧菌、Ｏ１３９群霍乱弧菌、副溶血性 弧菌等菌株培养过夜，用生理盐水制成０．５麦氏单 位细菌悬液，使用本研究建立的方法检测。生理盐 水做为空白对照。 １．２－３．２灵敏性实验 将金黄色葡萄球菌标准菌株 接入营养肉汤于３６￣１ｑＣ培养１８—２４ ｈ，取纯菌液用 灭菌生理盐水制成Ｏ．５麦氏单位的菌液，再用生理 盐水ｌＯ倍梯度稀释８管，取其中２个浓度梯度细菌悬 液进行平板计数。每个梯度浓度样品取１００ ｌ，用所 研制的免疫层析试纸条进行检测。每个梯度样本平 行检测４次，生理盐水为空白对照。 取实验室保存的细菌培养分离鉴定［３１为阴性的 呕吐物、腹泻物样本进行灵敏度检测。固体呕吐物、 粪便制成匀浆后按照９：ｌ比例接人以上系列稀释的 生理盐水细菌悬液：液态呕吐物、水样便按照９：１ 比例直接接入细菌悬液为待测样本。每个浓度样本 取１００ ｌ，用所制备的免疫层析试纸条进行检测，每 个梯度平行检测４次，生理盐水为空白对照。 准备经细菌培养分离鉴定为阴性的肉类、牛奶 等不同的食物样本及粪便样本，按照９：ｌ比例接入 以上梯度稀释的金黄色葡萄球菌菌液，于３６￣１ｏＣ进 行增菌培养１８—２４ ｈ，分别取培养后１００ 菌液于 试纸条样本垫上，１０ ｍｉｎ后判读结果。每个梯度平行 检测４次，生理盐水为空白对照。 １．２．３．３ 试剂稳定性检验 将试纸条放在３７ｏＣ １、 ３、７ ｄ，取出检测不同浓度的阳性样本，观察其稳定 性。 １．２．３．４样本适用性实验 准备食品样本３０份、呕 吐物ｌ０份、粪便１Ｏ份，由一名检测人员将所有样本 进行培养分离鉴定。另一名检测人员对以上样本用 本研究所制备的免疫层析试纸条进行检测。将食品、 粪便样本接人营养肉汤３６￣１ｏＣ进行增菌培养ｌ８ ２４ ｈ，取培养液１００ ｌ进行检测。液态呕吐物、水样 便直接吸取于试纸条样本垫上检测。固态呕吐物、粪 便滴加等体积生理盐水充分混合后离心取上清液于 试纸条样本垫上检测。１０ ｍｉｎ后紫外线下读取结果。 ・ｌ６０・ 中国国境卫生检疫杂志２０１５年６月第３８卷第３期 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ Ｊｕｎ．２０１５，Ｖｏｌ ３８ Ｎｏ＿３ 分析优势的时间分辨检测技术，减小背景信号的干 扰，大幅度提高信噪比、检测灵敏度和准确性。本研 究所制备的试纸条具有良好的特异性，灵敏度达到 ７．２×１０’ＣＦＵ／ｍｌ，比一般的免疫层析法检测限高ｌ～２ 个数量级 ， ］，并且检测时间只需１５ ｍｉｎ，耗时相 对较短。同时该方法对操作者的能力无特殊要求， 只需要经过简单培训就可以完成工作．不需要 大型精密的实验仪器，只需要一台紫外灯就可以开 展测试，非常适用于现场金黄色葡萄球菌快速检测。 ＳＰＡ存在于大多数（９０％）金黄色葡萄球菌中（血 浆凝固酶阳性菌株），与细胞壁的肽聚糖呈共价结合。 不同菌株间的ＳＰＡ含量有明显差异，以Ｉ株金黄色 京：东南大学出版社，２００６． ［４］Ｎａｄａ Ｔ，Ｉｃｈｉｙａｎｍ Ｓ，Ｏｓａｄａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｆｉｎｇｅｒ－ ｐｒｉｎｔｉｎｇ ｂｙ ＰＦＧＥ ａｎｄ ＰＣＲ—ＲＦＬＰ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏａｇｕｌａｓｅ ｇｅｎｅ ｔｏ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ ＭＲＳＡ ｉｓｏｌａｔｅｓ【ＪＪ．Ｊ Ｈｏｓｐ Ｉｎｆｅｃｔ．，１９９６，３２（４）：３０５－ ３ｌ７． ［５］Ｙａｎｇ ＳＥ，Ｙｕ ＲＣ，Ｃｈｏｕ ＣＣ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｈｏｌｄｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｓｍｗｉｖａｌ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．ａｎｄ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｏｌｚｒｅｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ ｉｎ ｅｇｇ ｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，６３（１－２）：９９－１０７． ［６］Ｓｉｌｖａ ＢＯ，Ｃａｒａｖｉｅｌｌｏ ＤＺ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ＡＣ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｅｔ－ ｒｉｉｌｆｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｐｈｙｌａｏｃｏｃｃｕｓ ｏｌｚｒｅｕｓ ｆｒｏｍ ｍｉｌｋ ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉ．，２００５，８８（８）：３０００—３００８． ［７］Ｍａｒｔｉｎ ＭＣ，Ｆｕｅｙｏ ＪＭ，Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｈｅｖｉａ ＭＡ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｃｅ— ｄｕｒｅｓ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｓｔｐｈｙｌａｏ— ＣＯＣＣＵＳ ａｕｒｅｕｓ ｆｒｏｍ ｔｈｒｅｅ ｆｏｏｄ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ ｏｕｔｂｒｅａｋｓ［Ｊｌ＿Ｉｎｔ Ｊ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００４，９４（３）：２７９—２８６． 葡萄球菌含ＳＰＡ量最高。ＳＰＡ具有和人及许多动物 如豚鼠、猪、小鼠、猴等ＩｇＧ结合的能力，其结合部位 是Ｆｃ段而不是Ｆａｂ段，被结合的抗体仍具有免疫活 性。本研究中生猪肉的污染样本检测限高于其他熟 食样本，原因可能是样本肉质毛细血管中存在一定量 ［８］Ｆａｕｌｋ ＷＰ，Ｔａｙｌｏｒ ＧＭ．Ａｎ ｉｍｍｕｎｏｅｏｌｌｏｉｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｌｅｃ— ｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｅｈｅｍｉｓｔｙ，１９７ｌ，ｒ８（１１）：１０８１－１０８３． ［９］Ｊｕｎｇ ＢＹ，Ｊｕｎｇ ＳＣ，Ｋｗｅｏｎ ＣＨ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｒａｐｉｄ ｍｍｕｎｏｃｈｒ－ ｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｓｔｉｒｐ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｇ ０ １ ５７ ｌ Ｊ１． Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔ．，２００５，６８（１０）：２１４０—２１４３． ［１０］Ｋｉｍ ＳＨ，Ｐａｒｋ ＭＫ，Ｋｉｍ ＪＹ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ． 的猪ＩｇＧ分子．与样本中的ＳＰＡ非特异结合引起，甚 至在实际检测中可能造成假阴性结果。提示用本方 ｉｎ ｐｏｒｋ ａｎｄ ｍｉｌｋ［Ｊ】．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００７，１６（４）：５１５— ５１９． 法检测过程中应适当增加未加工食品样本培养时间 或采取补充实验避免假阴性检测结果发生。 ［１１］杜玉萍，陈清，俞守义，等．胶体金免疫屡析法检测金黄色葡萄球 菌的初步研究阴．热带医学杂志，２００６，６（６）：６５０—６５２． ［１２】Ｗｉｒｉｙａｃｈａｉｐｏｒｎ Ｓ，Ｈｏｗａｒｔｈ ＰＨ，Ｂｒｕｃｅ ＫＤ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｒａｐｉｄ ｌａｔｅｒａｌ ｆｌｏｗ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ＳｔｐｈｙｌａＯＣＯＣＣＩ＆Ｓ ＣＩ￣ｕｓ ｄｅ— 本研究建立的金黄色葡萄球菌荧光纳米免疫层 析法用于定性食品、乳制品、患者呕吐物、粪便中的 金黄色葡萄球菌。与现有胶体金免疫层析试纸条相比， ｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓａｍｐｌｅｓ【Ｊｌ】．Ｄｉａｇｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．， ２０１３，７５（１）：２８—３６． 本方法操作简便快捷．有较高的灵敏性，便于对腹泻 病原体开展现场快速检测。 参考文献 …Ｄｉｎｇｅｓ ＭＭ，Ｏｒｗｉｎ ＰＭ，Ｓｃｈｌｉｅｖｅｒｔ ＰＭ．Ｅｘｏｔｏｘｉｎｓ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｂａｒｅｌｇｓ叨．Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，２０００，１３（１）：１６—３４．． Ｉ ２ Ｊ Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ＧＴ．Ｂｉｏｃｕｕｊｕｇａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ［Ｍ］．２ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，２００８．ｆ ［１３］Ｐａｒｋ Ｊ，Ｐａｒｋ Ｓ，Ｋｉｍ Ｙ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｉｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｅ ａｓｓａｙ ｓｔｉｒｐ［Ｊ１．Ｂｉｏｃｈｉｐ，２０１０，４（４）： ３０５－３１２． ［１４］范放，朱海，洪小柳．０１３９群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研 制ｆＪ］．分子诊断与治疗杂志，２０１０，２（１）：９－１２． ［１５］Ｒｏｄａ Ａ，Ｍｉｒａｓｏｌｉ Ｍ，Ｒｏｄａ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ｒａｐｉｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｅａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｆｏｏｄｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，２０１２，１７８（１—２）：７－２８． ｆ３ Ｊ 叶１华人民共和国卫生部医政司．全国『临床操作规程［Ｍ］．３版．南 收稿日期：２０１５—０２—２６ 关于《食品指南》杂志社更名的公告 经有关部门批准，《中国国境卫生检疫杂志》的出版单位《食品指南》杂志社自２０１５年４月１４日起正式 变更名称为《检验检疫学刊》杂志社。 特此公告．． 《检验检疫学刊》杂志社 ２０１ ５年４月２０日
