主垦羞查垦兰 至！ 翌 鲞第７期（上）Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｊｕ１．２０１２．Ｖｏｌ＿２１．Ｎｏ．７ １ １５９ 微针技术结合乙醇脂质体促进重组人酸性成纤维细胞生长因子透皮吸 收的研究 冯苏云，范金财，刘立强，田佳，甘承，杨增杰，付思祺，陈文霖 （北京协和Ｎ－－学院・中国Ｎ－．学科学院・整形外科Ｎ－－院整形九科北京 １ ００１４４） ［摘要］目的：探索ｒｈａＦＧＦ透皮给药微创有效的给药方式。方法：离体实验：亚甲蓝染色经微针处理后的离体兔皮，观察微孔的分 布和排列。冰冻切片ＨＥ染色观察微孔的深度。在体实验：新西兰大白兔分别分为微针＋空白脂质体组、微针＋ｒｈａＦＧＦ组、微针 ＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组、皮内注射组；时间和浓度一定时，皮肤组织切片免疫荧光、免疫组织化学染色观察ｒｈａＦＧＦ的分布， ＥＬＩｓＡ法检测皮肤组织匀浆液中ｒｈａＦＧＦ的含量，经统计后分析不同给药方式中药物经皮渗透效果最好的一组。结果：微针处理 后离体兔皮微孔排列均匀，深度可达真皮层。动物给药３０ｍｉｎ后，微针＋ｒｈａＦ６Ｆ组、微针＋ｒｈａＦ６Ｆ乙醇脂质体组及皮内注射组皮 肤组织匀浆液中ｒｈａＦＧＦ含量均高于微针＋空白脂质体组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；微针＋ｒｈａＦ６Ｆ乙醇脂质体组高于微 针＋ｒｈａＦＧＦ组皮肤组织匀浆液中ｒｈａＦＧＦ含量，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；微针＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组及皮内注射组组织匀 浆液中ｒｈａＦ６Ｆ含量无明显差别（Ｐ＞０．０５）。ｒｈａＦＧＦ免疫荧光、免疫组化染色显示，微针＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组真皮组织中有大 量ｒｈａＦＧＦ存在，且分布均匀；结论：本文的研究结果表明微针技术结合乙醇脂质体能取得较高的ｒｈａＦＧＦ透皮效果，使ｒｈａＦＧＦ 外用给药促进皮肤增殖，加速皮瓣扩张成为可能。此方法简单易行，同时也为其它蛋白、多肽类大分子药物的经皮给药研究提供 了新思路。 ［关键词］重组人酸性成纤维细胞生长因子；乙醇脂质体；微针阵列：经皮给药 ［中图分类号］Ｑ８１ ３．１ ［文献标识ｔｉ￣－ｌＡ［文章编号］１００８—６４５５（２０１２）０７—１１ ５９一Ｏ４ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅｓ ａｒｒａｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｒｈａＦＧＦ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｋｉｎ ＦＥＮＧ Ｓｕ－ｙｕｎ，ＦＡＮ Ｊｉｎ－ｃａｉ，ＬＩＵ Ｌｉ－ｑｉａｎｇ，ＴＩＡＮ Ｊｉａ，ＧＡＮ Ｃｈｅｎｇ，ＹＡＮＧ Ｚｅｎｇ－ｊｉｅ，ＦＵ Ｓｉ－ｑｉ，ＣＨＥＮ Ｗｅｎ－ｌｉｎ （Ｐｌａｓｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１４４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ａ ｍｉｎｉｍａｌｌｖ ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｒｈａＦＧＦ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｋｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄＩｅ ａｒｒａｙｓ ｉｎ ｓｋｉｎ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ．ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｐｔｈ ｏｆ ｍｉｃｒｏｐｏｒｏｕｓ ｗｅｒｅ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ａｎｄ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｃｒｙｏｓｔａｔ ｓｅｃｔｉｏｎｓ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ：ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｂｌａｎｋ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｇｒｏｕｐ，ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇ ｒｏｕｐ，ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ，ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈａＦＧＦ ｗａｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ．ｒｈａＦＧＦ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ ｇｒａｆｔ ｍｏｄｅ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｕｓｉｎｇ ＥＬｌＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ａｒｒａｙｓ ３０ｍｉｎ ｌａｔｅｒ ｏｆ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ ｏｆ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０ ０５）ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｂｌａｎｋ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ，Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ，ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｈａＦＧＦ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ，ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）． Ｃｈａｎｇｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ，ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｓｈｏｗｅｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０，０５） Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｓｋｉｎ ｆｏｒ ｒｈａＦＧＦ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｈａＦＧＦ ｗｅｒｅ ａｒｒａｎｇｅｄ ｅｑｕａｌｉｔｙ ｉｎ ｄｅｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｗｉｔｈ ｒｈａＦＧＦ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｄｉｒｅｃｔ ｃｏａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｎｇ ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ｗｉｔｈ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅｓ ａｒｒａｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｃａｎ ｇｅｔ ａ ｈｉｇｈｅｒ ｅｆｆｅｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｆｏｒ ｒｈａＦＧＦ．Ｉｔ ｍａｋｅ ｒｈａＦＧＦ ｐｒｏｍｏｔｅ ｓｋｉｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．ａｃｃｅｌｅｒａｔｅ ｓｋｉｎ ｆｌａｐ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｒｍ ｂｅｃｏｍｅｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ．Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｅａｓｙ ａｎｄ ｐａｉｎｌｅｓｓ．Ｉｔ ｍａｙｂｅ ａ ｎｅｗ ｗａｙ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｋｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｕｃｈ ａｓ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒｈａＦＧＦ；ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ；ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ａｒｒａｙ；ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ 因大面积烧伤、创伤等因素引起的皮肤组织的缺损通常 需要再生皮肤组织进行修复，目前可选用的方法有异体组织 通讯作者：范金财，男，烧伤整形美容外科中心主任、教授、博士生导师；长期从事整形外科、烧伤晚期瘢痕综和治疗等临床与研究工作 Ｅ－ｍａｉ１：ｆａｎｊｉｎｃａｉｍｄ＠ｈｏｔｍａ儿．ｔｏｍ １１６０ 中国美容医学２０１２年７月第２１卷第７期（上）Ｃｈｉｎｅｓｅ ！ ０ｆ垒！！ ！ ！ ！ ： ： ： ！ ： ！： ！ 重组人酸性成纤维细胞生长因子（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｃｉｄｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ，ｒｈａＦＧＦ）（艾夫吉夫，上 移植、组织工程、自体皮肤扩张转移等，虽然异体组织移植、 组织工程具有潜在的治疗前景，但是目前仅有自体组织扩张 术可再生出具有完全生理功能的皮肤组织。由于扩张产生的 皮肤颜色、质地、结构和毛发均与受区相近似，是理想修复材 料，并且扩张产生的皮瓣多数能保存感觉神经，供区继发畸 形小，具有其它治疗方法不可比拟的优点，因此对于某些疾 患如面颈部瘢痕的治疗，皮肤扩张术已成为首选的治疗方 法。然而该技术存在治疗周期长，再生皮肤有限，患者经济负 海万盛生物技术有限公司免费提供）。 １．２离体实验 ｉ．２．１微孔分布的观察：新西兰白兔２只，处死后取新鲜全 厚兔皮，剃毛，用大头钉固定于平木板上，保持自然张力，用 微针处理后亚甲蓝染色，ｌＯｍｉｎ后自来水冲洗、擦干，观察微 孔的分布，拍照记录。 １．２．２微孔深度的测量和组织学观察：将微针处理的离体兔 担较重等缺陷。目前人们也尝试了各种办法加速皮肤组织的 生长，但是并没有取得理想的效果。本研究旨在寻找一种新 皮，浸入ＯＣＴ液中，存储于一８０￣Ｃ低温冰箱过夜，次日用低温 冷冻切片机切片（厚５ ｍ），ＨＥ染色，光学显微镜下观察微针 针道，并随机选取５Ｏ个针道测量其深度，求 ±ｓ），显微成像 系统拍照记录。 １．３在体实验 １．３．１实验动物预处理：术前１天，取新西兰大白兔，在局麻 下，用刀片剔去大白兔背部毛发。 １．３．２实验动物分组：新西兰白兔６只，麻醉，碘伏消毒２ 遍，取背部正中线，双侧对称位置分别标记２ｃｍＸ２ｃｍ大小的 ４块皮肤。随机分配给微针＋空白脂质体组、微针＋ｒｈａＦＧＦ 的、简单易行的方法，加速皮肤组织再生，从而缩短治疗周 期，减轻患者负担。 酸性成纤维细胞生长因子（ａｃｉｄｉｃ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ，ａＦＧＦ）是一种广谱促原，对来源于中胚层及神经 外胚层的细胞具有促增殖作用，能够促进皮肤组织生长、新 生血管形成Ｅｌ—ｉ０］。但是，目前尚没有ａＦＧＦ的外用制剂可以使 ａＦＧＦ穿透皮肤角质层进入到皮肤组织内。 微针阵列（ｍｉｃｒｏｎｅｄｄｌｅ ａｒｒａｙ，简称微针）是近年来兴 起的一种新型的给药方式，它利用微针组成的阵列可以在皮 肤上人为造成数百上千条微米级的通道［１１－１３］。这种通道是可 见的，要比分子的尺寸大得多，并且通过角质层延伸至表皮 内部，因此它可以很容易地让大分子物质通过；但是它并不 会在皮肤上形成明显的伤痕，通道一般也不触及神经及血 管，在使用过程中不会引起疼痛感［１４－１５］。目前微针在经皮给药 领域中的应用受到了广泛关注。 组、微针＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组、皮内注射组，共四组，每组１ 块皮肤组织，６只兔，共４８块皮肤组织，每组分获１２块皮肤 组织。①微针＋空白脂质体组：每２ｃｍＸ ２ｃｍ皮肤用微针交叉 滚动２遍后涂布空白脂质体；②微针＋ｒｈａＦＧＦ溶液组：每 ２ｃｍ×２ｃｍ皮肤用微针交叉滚动２遍后涂布浓度为 ０．０６ｍｇ／ｍｌ ｒｈａＦＧＦ溶液；③微针＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组：每 ２ｃｍ Ｘ ２ｃｍ皮肤用微针交叉滚动２遍后涂布浓度为 ０．０６ｍｇ／ｍｌ ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体；④皮内注射ｒｈａＦＧＦ组：每 ２ｃｍ×２ｃｍ皮内多点注射浓度为０．０６ｍｇ／ｍｌ ｒｈａＦＧＦ溶液。 切取标记内皮肤及皮下组织，部分标本用ＯＣＴ液包埋， 切片，ａＦＧＦ免疫荧光染色，荧光显微镜下观察ｒｈａＦＧＦ在皮肤 组织中的分布；部分标本用１０％甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切 微针促渗技术尽管在很大程度上减小了角质层的传导 阻力，但是大分子多肽、蛋白类物质的经皮传导仍是依靠浓 差推动的被动扩散来实现的，由于药物滞留、浓差极化、药物 在油水相分配系数的影响，渗透量仍然较低。要进一步提高 药物的经皮渗透量，必须强化药物的被动扩散，这可以通过 改善药物在临时的局部传输区域、皮肤组织和组织液问的分 配系数，增加新的推动力来实现。乙醇脂质体是一种生物相 容性很好的表面活性剂，可改善大分子多肽、蛋白类药物在 皮肤中的分配系数，使药物的经皮渗透性获得显著提高。 为了促进酸性成纤维细胞生长因子在外用给药时可以穿 过角质层有效地进入真皮层内，我们将近年来在经皮给药中 具有优良促渗作用的先进技术一乙醇脂质体载体技术与微 针技术相结合，使两种方法共同作用，扬长避短，促进酸性成 片，ａＦＧＦ免疫组化染色，苏木素复染，光学显微镜下观察 ｒｈａＦＧＦ在皮肤组织中的分布；ｌｃｍ×ｉｃｍ皮肤组织ＥＬＩＳＡ法 检测皮肤匀浆液中ｒｈａＦＧＦ的含量，分析药物渗透进入皮肤 组织内的量，样品组中微针＋ｒｈａＦＧＦ、组微针＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂 质体组、皮内注射组稀释十倍后再进行检测。 １．３．３统计学方法：采用ＳＰＳＳ统计软件进行统计学分析。首先 采用重复测量的方差分析进行各个数据比较，不同组样本进行 纤维细胞生长因子有效、大量地透过角质层。同时本实验也为 配对ｔ检验。数据以均值±标准差 ±ｓ）表示，设Ｐ＜Ｏ．０５为有 统计学差异。 ２结果 大分子蛋白、多肽类物质外用给药提供了一种新的方法。 １材料和方法 １．１材料：新西兰大白兔８只，清洁级，雌雄不限，５～６月龄， 体重３．５０～４．５０ｋｇ，由中国医学科学院整形外科医院动物实 ２．１大体观察：微针处理的兔皮经亚甲蓝染色后，微孔被染 成蓝色，清晰、均匀分布，排列规则（图１Ａ，１Ｂ）。 验中心提供，采用复层活动式兔笼笼养，饲养条件遵照国家 相关规定和基本要求。饲养亦是由中国医学科学院整形外科 医院动物实验中心提供：购入后常规混合饲料喂养２周，无 ２．２离体组织ＨＥ染色：光镜下可见微针处理后的兔皮角质 层被刺穿，产生的微孔到达真皮层，平均深度（１７８±２４） ｍ （图２）。 异常情况及病症即投入使用。微针治疗系统（长度１０００ ｕ ｍ， 阵列密度均为３０针／ｃｍ。，广东高要市奇福微针有限公司）。 ２．３免疫组化、免疫荧光染色结果：经皮给药３０ｍｉｎ后，微针 ＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组可见兔皮肤真皮层大量的ｒｈａＦＧＦ均 １ １６２ 中国美容医学２０１２年７月第２１卷第７期（上）Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｊｕ１．２０１２．Ｖｏ１．２１．Ｎｏ．７ 囊泡后，可有效避免ｒｈａＦＧＦ与外界环境的直接接触，对 ｒｈａＦＧＦ起到较好的保护作用。脂质囊泡具有贮存药物的作 用，制成ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体后给药，脂质体外的游离的 ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］ｌＪ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００２，２７７（３８）：３４９４１—３４９４８． ［５］翁立新，李秀霞，付小兵．酸性成纤维细胞生长因子及其受体研究进 展［Ｊ］．中国危重病急救杂志，２００４，１６（４）：２５３—２５６． ｒｈａＦＧＦ先发挥作用。之后，脂质体囊泡中包裹的药物从其中 释放，再次发挥药效。通过两次释药，脂质体可以实现缓释给 ［６】潘耀良，戴方平，陈玉林．烧伤创面应用生长因子后的ＤＮＡ分析［Ｊ】＿ 中华整形烧伤外科杂志，１９９６，１２（４）：２６２—２６４． ［７］Ｐａｎｄｉｔ Ａ，Ａｓｈａｒ Ｒ，Ｆｅｌｄｍａｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｉｄｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｔｈｒｏｕｔｈ ａ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｃａｆｏｌｄ ｆｏｒ ｈｅ ｔｔｒｅａｔｍｅｒｉｔ ｏｆ 药的作用。实验证明，与脂质体相比乙醇脂质体促药物透皮 吸收的效果更好 。 ３．５乙醇脂质体除了具有一般脂质体可生物降解，无毒性，不 产生皮肤刺激性的优点外，还具有以下功能：①可以与生物的 ｆｕｌｌ－ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ ｓｋｉｎ ｄｅｆｅｃｔｓ ｉｎ ａ ｒａｂｂｉｔ ｍｏｄｅｌ［Ｊ］．Ｈａｓｔ Ｒｅｃｏｎｓｔｒ Ｓｕｒｇ， １９９８，１０１（３）：７６６—７７５． 细胞膜融合，将包裹的内容物传递进入细胞膜内；②易于变形 从而穿透皮肤屏障的各种孔隙，如穿透角质层间的磷脂层以 及毛囊皮脂腺等；③乙醇脂质体是一个两性离子型表面活性 剂，具有亲油亲水性，可以有效地包封各种化合物（脂溶性、水 溶性分子包括蛋白质多肽类分子）渗透到达皮肤深层。 ３．６微针技术尽管在很大程度上减小了角质层的传导阻力， 但是大分子多肽、蛋白类物质的经皮传导仍是依靠浓度差推 动的被动扩散实现的，由于药物滞留、浓差极化、药物在油水 相分配系数的影响，药物的渗透量仍然较低。磷脂是一种生 物相容性很好的表面活性剂，可改善大分子多肽、蛋白类药 物在皮肤中的分配系数，使药物的经皮渗透性获得显著提 高。本研究通过在体皮肤组织实验可知：在微针的帮助下药 物可以透过皮肤层，微针＋ｒｈａＦＧＦ溶液组ｒｈａＦＧＦ可以通过 微针通道进入真皮层，分布也较均匀，但是数量较少。注射组 真皮中有大量的ｒｈａＦＯＦ，主要聚集在注射点周围，分布不均 匀。而微针＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组不仅毛囊和腺体中有 ｒｈａＦＧＦ，而且真皮层也有大量的ｒｈａＦＧＦ均匀分布，提示微针 与乙醇脂质体联合作用对ｒｈＦＧＦ经皮给药的促透作用极佳。 皮肤组织匀浆液中ｒｈＦＧＦ含量测定结果进一步证实，微针 ＋ｒｈａＦＧＦ乙醇脂质体组具有与皮内多点注射组相当的透皮效 率，较微针＋ｒｈａＦＧＦ溶液组高，且差别显著。微针技术与乙醇 脂质体载体技术相结合，发挥最大的功效，取得了较高的透 皮速率。 ３．７大分子物质尤其是蛋白质多肽类大分子物质透皮吸收 一直是人们研究的重点。乙醇脂质体载体技术是近年来颇受 药学和皮肤领域关注的新型药物载体，微针技术是物理经皮 给药中具有优良促渗作用的先进技术。将乙醇脂质体载体技 术与微针技术相结合，扬长避短，发挥最大的功效，从而取得 较高的透皮速率。 ［参考文献］ ［１】Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ Ｔ，Ｕｔｓｕｎｏｍｉｙａ Ｙ，Ｈｏｓｈｉｋａｗａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｕｍａｎ ＦＧ．ＦＧＦ一１９，ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｅｔａｌ ｂｒａｉｎ ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｒ）ｈｙｓ Ａｅｔａ，１９９９，１４４４（１）：１４８—１５１． ［２］吕文天，龚守良，李校垄．酸性成纤维细胞生长因子的生物学特性 ［Ｊ］．中国生化药物杂志，２００５，２６（１）：４９—５１． ［３］靳波，徐盈斌，刘旭盛．酸性成纤维细胞生长因子生物学特性及其应 用研究进展［Ｊ］ｌ中华损伤与修复杂志，２０１０，５（１）：５５．５７． ［４］Ｃｈｉ ＹＨ，ＫｕｍａｒＴＫ，Ｃｈｉｕ ＩＭ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｒｔｉａｌｌｙ ｕｎｆｏｌｄｅｄ ｓｔａｔｅｓ ｉｎ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｎａｔｉｖｅ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｎａ ａｌｌ ｂｅｔａｂａｒｒｅｌ ［８］Ｃｕｅｖａｓ Ｐ，Ｃａｒｃｅｌｅｒ Ｆ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ—Ｃｏｓｏ Ｖ，ｅｔ ａ１．Ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｂｙ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ［Ｊ］．ＥｕｒＭｅｄ Ｒｅｓ，１９９９，４（１２）：５１７—５２４． ［９］郭艳芹，安丽荣，关亚新．ａＦＧＦ对ＡＢ ２５—３５诱导的ＰＣ１２细胞凋亡 的保护作用［Ｊ］．中国老年学杂志２００５，（２５）：２４４—２４６． ［１０］Ｌｉ ＡＪ，Ｏｏｍｕｒａ Ｙ，Ｓａｓａｋｉ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｐｒｅｔｒａｉｎｉｎｇ ｇｌｕｃｏｓｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｓ ｍｅｍｏｒｙ ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｒｏｄｅｎｔｓ ｐｅｒｆｏｒｍｉｎｇ ｖａｒｉｏｕｓ ｔａｓｋｓ：ｃｏｎｔｉｒｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｉｄｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ， １９９８，８５（３）：７８５－７９４． ［１ １］Ｈｅｎｒｙ Ｓ，ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ＤＶ，Ａｌｌｅｎ ＭＧ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｅｄ ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅｓ：ａ ｎｏｖｅｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ［Ｊ］．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１９９８，８７（８）：９２２－９２５． ［１２］陈娟，陈志鹏，瞿敏明，等．微针技术在经皮给药中的应用［Ｊ】．国际 药学研究杂志，２０１１，３８（２）：１４２—１４７． ［１３］Ｂａｎｇａ ＡＫ．Ｍｉｃｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ［Ｊ］．Ｅｘｐｅ￣Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ，２００９，６（４）：３４３—３５４． ［１４］Ｓａｃｈｄｅｖａ Ｖ，Ｂａｎｇａ ＡＫ．Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］． ＲｅｃｅｎｔＰａｔ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，２０１１，５（２）：９５－１３２． ［１５］Ｍａｔｒｉａｎｏ ＪＡ，Ｃｏｒｍｉｅｒ Ｍ，Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｍａｃｒｏｆｌｕｘ ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ ａｒｒａｙ ｐａｔｃｈ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ ｎｅｗ ａｎｄ ｅｆｉｆｃｉｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｕｒ ｉｎｔｒａｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ，２００２，１９（１）：６３—７０． 『１６］Ｃｏｕｌｍａｎ ＳＡ，Ａｎｓｔｅｙ Ａ，Ｇａｔｅｌｅｙ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎｔｏ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ［Ｊ］ｌＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ，２００９，３６６（１—２）：１９０—２００． ［１７１１建，钟延强．乙醇脂质体透皮作用的研究与发展［Ｊ］．药学实践杂 志，２００３，２１（５）：２７５—２７７． ［１８］Ｗａｈｉｄ ＡＡ，Ｒａｖｏｕｒｕ Ｎ，Ｌａｋｓｈｍａｎ ＳＲ．Ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ：Ａ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ［Ｊ］．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｐｈａｒｍ，２０ｌ １，５ （１）：９７２—９８１ ［１９］邢晓婧，郝飞．ｍＥＧＦ乙醇脂质体局部给药系统的研究进展［Ｊ］．中 华皮肤科杂志，２０１ １，４４（９）：６８１－６８３． ［２０］Ｔｏｕｉｔｏｕ Ｅ，Ｄａｙａｎ Ｎ，Ｂｅｒｇｅｌｓｏｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ—Ｎｏｖｅｌ ｖｅｓｉｃｕｌａｒ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｋｉｎ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ，２０００，６５（３）：４０３—４１８． ［２１］Ｐｏｎｓ Ｍ，Ｆｏｒａｄａｄａ Ｍ，Ｅｓｔｅｌｒｉｅｈ Ｊ．ＬＩＰｏｓｏｍｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｉｎｔ ＪＰｈａｒｍ，１９９３，９５（１－３）：５１－５６． ［２２］Ｍａｈｅｓｈｗａｒｉ ＲＧＳ，Ｔｅｋａｄｅ ＲＫ，Ｓｈａｒｍａ ＰＡ，ｅｔ ａ１．Ｅｔｈｏｓｏｍｅｓ ａｎｄ ｕｌｔｒａｄｅｆｏｒｍａｂｌｅ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆ ｃｌｏｔｉｒｍａｚｏｌｅ： Ａ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｓａｕｄｉ Ｐｈａｒｍ Ｊ（２０１１），ｄｏｉ：１０．１ｏ１６￣． ｊｓｐｓ．２０１ １．１０．００１． ［收稿日￣］２０１２—０３—１０ ［修回日￣］２０１２—０５—０８ 编辑／张惠娟
