塞墼兰焦堕墨堂至塑笙查旦釜堑鲞箜量塑・２６９・・实验研究・４种方法检测低水平乙型肝炎表面抗原比较吴坚敏张翊中图分类号Ｒ４４６。６２，Ｒ５１２。６＂２文献标识码Ａ文章编号１６７４－１１２９（２００８）０３－０２６９－０２ｆ摘要】且的比较４种方法对低水平乙型肝炎表面抗原检测的灵敏度与符合率。方法采用Ａｘｓｙｍ微粒子酶免分析（ＭＥＩＡ）、时间分辨荧光免疫分析ｆｆＲＦＩＡ）、酶联免疫吸附试验（ＥＵＳＡ）、胶体金免疫层析（ＧｍＡ）４种方法对２０４例ＨＢｓＡｇ浓度介于（０～５）ｐｓｒＬ血清标本及定值质控标本进行检测与比较。结果ＭＥＩＡ、ＴＲＦＩＡ、ＥＬＩＳＡ、ＧＩＣＡ检测ＨＢｓＡｇ的灵敏度分别为Ｏ．１２５ｐｄＬ、０．２５ｐｇ／Ｌ、０．５０雌皿和２．５０１ａ，ｇ／Ｌ，对２０４例ＨＢｓＡｇ浓度介于（ｏ～５）ＩＬｇ／Ｌ的血清阳性检出率为７４．５％、７０．６％、６３．２％、２２．１％。以ＭＥＩＡ及中和确认试验为准，豫ＦＩＡ、ＥＬＩＳＡ、ＧＩＣＡ３种方法对ＨＢｓＡｇ浓度在５ｎ矶以下的血清标本漏检率占阳性总检出者的５．９％、１６．４％和７０．４％。与ＭＥＩＡ的相符率为９５．１％、８６．８％、４７．５％。结论不同的方法对低水平ＨＢｓＡｇ检测灵敏度差异较大．ＨＢｓＡｇ浓度５斗ｇ／Ｌ以下的血清标本阳性检出率高低依次为ＭＥＩＡ．＞ＴＲＦＩＡ＞ＥＬＩＳＡ＞ＧＩＣＡ。【关键词】乙型肝炎表面抗原；低水平；检测方法；乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）为检测乙型肝炎病毒感染的最主要病原标志和直接证据之一．检测的方法较多．但灵敏度有一定差异。使低水乎ＨＢｓＡｇ标本出现不同定性检测结果【ｎ，因此．选择高灵敏度的检测方法。有重要的临床应用价值。我们对２０４例ＨＢｓＡｇ浓度在５纠Ｌｇ／Ｌ以下的血清标本用微粒子酶免分析（ＭＥＩＡｌ、时间分辨荧光免疫分析（ＴＲＦＩＡ）、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、胶体金免疫层析法（ＧＩ．ＣＡ）４种方法进行了检测．并作分析与比较。１材料与方法１．１标本以ＴＲＦＩＡ法作为初筛试验．收集本院门诊与住院病人血清２０４例，ＨＢｓＡｇ浓度介于（ｏ～５）一清，以１ｐｇ，Ｌ、５ｐｇ，Ｌ定值质控为参照，估算ＨＢｓＡｇ浓度，将２０４例血清标本分为（ｏ一１）肛ｇ，Ｌ和（１—５）斗Ｓ／Ｌ两组。把ＨＢｓＡｇ浓度＜ｌ斗ｇ／Ｌ的阳性定为弱阳性，＞１斗ｇ，Ｌ的阳性定为阳性。所有ＨＢｓＡｇ阳性标本均用ＭＥＩＡ乙肝表面抗原确认试剂进行中和试验．中和率≥５０％确认为阳性。１．５统计学处理采用ｒ检验。２结果２．１灵敏度比较将船ＳＡｇ（１ｐｇ／Ｌ）定值质控用ＰＢＳ—ＢＳＡ液倍比稀释至０．５灿ｇ／Ｌ、０．２５１山ｇ／Ｌ、０．１２５ｔｒｇ／Ｌ、０．０６３斗ｇ，Ｌ，用ＥＬＩＳＡ、ＴＲＦＩＡ与ＭＥＩＡ方法检测后，其灵敏度分别为Ｏ．５斗班、０．２５１ＬＬｇ／Ｌ和Ｏ．１２５１Ｊ，ｇ／Ｌ。将ＨＢｓＡｇ（５ｔ上ｇ／Ｌ）定值质控用ＰＢＳ—ＢＳＡ液倍比稀释至２．５斗ｇ／Ｌ、１．２５ｐ，ｇ／Ｌ、０．６３１ｚｇ／Ｌ用ＧＩＣＡ检测，结果其灵敏度为２．Ｓｔ，，ｇ／Ｌ。２，２低水平ＨＢｓＡｇ血清标本阳性检出率比较４种方法对２０４例血清标本检测结果见表１，可见２０４表ｌ４种方法对２０４例血清检测阳性例数（９计峥ｇ，Ｌ之间。１．２ＨＢｓＡｇ定值质控血清浓度分别为１“玑、５ｐｇ／Ｌ（卫生部临床检验中心提供１。１．３试剂与仪器ＡＸＳＹＭ全自动免疫分析仪及配套试剂。为美国ＡＢＢＯＴＹ公司产品：ＡＴ一２００３时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂．为上海新波生物技术有限公司产品；ＷＥＬＬＳＣＡＮ酶标仪；酶联与金标试剂均为北京万泰生物有限公司产品。１．４方法严格按照试剂盒说明操作。判断标准：ＭＥＩＡ法Ｓ烈≥２为阳性。ＥＵＳＡ、ＴＲＦＩＡ法Ｓ烈≥２．１为阳性，ＧＩＣＡ法用肉眼判断有明显条带为阳性。分别用４种方法检测２０４例血清标本与定值质控血作者单位：３１５４００浙江省余姚市人民医院作者简介：吴坚敏，１９６６出生．男，浙江余姚市人，大专学历，主管技师。发表论文５篇。与ＭＥＩＡ组比：｝・只＜０．０１；・Ｐ＜０．０５；籼．０５。与ＥＬＩＳＡ组比：ａｐ＜０．０１；嘞．０５。例５ｐ班以下血清标本的ＨＢｓＡｇ阳性检出率依次为ＭＥＩＡ＞７ＩＲｎＡ＞ＥＵＳＡ＞ＧＩＣＡ。２．３３种方法检测结果比较见表２．１５２例ＭＥＩＡ万方数据 ・２７０・表２３种方法对２０４例血清检测结果比较阳性标本均经中和试验确认为阳性．其中’ｒＲＦＩＡ有９例未检出．这９例低水平标本ＭＥＩＡ测量Ｓ／Ｎ值在４．１～９．４之间；ＥＬＩＳＡ有２５例未检出。这２５例低水平标本ＭＥＩＡ测量Ｓ／Ｎ值在４．１。１８．５之间：而ＧＩＣＡ法则有１０７。例未能检出．仅能检出ＭＥＩＡ测量Ｓ／Ｎ值在３６．７以上的阳性标本。在ＭＥＩＡ检测为阴性的标本中．ＴＲＦＩＡ有１例弱阳性，ＥＵＳＡ有２例弱阳性。ＧＩＣＡ未检出阳性；对将被ＭＥＩＡ判为阴性这３例标本再经ＭＥＩＡ确认试剂进行中和试验．结果仍为阴性。以ＭＥＩＡ及其中和确认试验为准，ＴＲ．ＦＩＡ、ＥＬＩＳＡ、ＧＩＣＡ，３种方法对ＨＢｓＡｇ浓度在５¨ｇ／Ｌ以下的血清标本漏检率占阳性总检出的５．９％ｆ９／１５２）、１６．４％（２５／１５２）、７０．４％（１０７／１５２）；与ＭＥＩＡ的相，是公认的诊断ＨＢＶ感染的理想方法，因此把它看作参照方法。本资料也显示其测定ＨＢｓＡｇ的灵敏度高于另外三种方法。可达０．１２５１Ｊ．ｇ／Ｌ，对ＴＲＦＩＡ、ＥＬＩＳＡ测定弱阳性标本均能检出。可避免漏检。对５“ｇ，Ｌ以下阳性标本均被中和试验确认为阳性，说明其具有极好的准确性。ＴＲＦＩＡ法是一种能定量检测ＨＢＶ标志物．特异性及灵敏度都较高的新的检测方法。灵敏度高于ＥＵＳＡ。达０．２５１ｘｇ／Ｌ，对ＨＢｓＡｇ浓度在５斗∥Ｌ以下的阳性血清的检出率为９４．１％，与ＭＥＩＡ比较灵敏度接近．漏检的一些低水平的阳性标本浓度均在１斗ｇ，Ｌ以下，与ＭＥＩＡ符合率为９５．１％，在低于１“ｇ，Ｌ的弱阳性标本中约有２。１３％（ｉ／４７）的假阳性。ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ感染血清学标志物是目前国内普遍应用的实验室诊断方法阁。与前两方法相比，ＥＬＩＳＡ法灵敏度稍差，为０．５斗ｇ，Ｌ，对ＨＢ—ｓＡｇ浓度在５“ｇ／Ｌ以下的阳性血清检出率为８３．６％，与ＭＥＩＡ比差异明显（Ｐ＜Ｏ．０５），尤其对１汕ｇ，Ｌ以下标本差异更显著（Ｐ＜０．０１），ＨＢｓＡｇ低于１斗ｇ／Ｌ血清标本漏检率达３８．２％（２１７５５）。在低于１¨ｇ／Ｌ弱阳性标本中约有５．５６％（２／３６）假阳性．因此对ＥＬＩＳＡ和ＴＲＦＩＡ检测的弱阳性标本应复查。ＧＩＣＡ检测ＨＢ．ｓＡｇ具有简便、快速、可单份操作的优点，本法特异性虽好（１００％），但灵敏度较低悯（２．５阻ｓ／Ｌ），对ＨＢｓＡｇ浓度在５肛ｇ／Ｌ以下的血清假阴性率达７０．４％ｆ１０７／１５２），与前三法比差异显著（Ｐ＜Ｏ．０１），浓度低于１斗ｇ，Ｌ者漏检率达１００％；故对低浓度者不宜用此法。参考文献【Ｉ】陆永绥，张伟民主编．临床检验管理与技术规程叫】．杭州：浙江大学出版社，２００４，７２５－７２７．【２】陈瑜，钟步云，徐根云，等．低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及符率为９５．１％（１９４／２０４）、８６．８％（１７７／２０４）、４７．５％（９７，２０４）。３讨论乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一．而应用免疫技术测定ＨＢＶ特异性抗原抗体是ＨＢＶ感染诊断的主要手段。ＨＢｓＡｇ作为诊断乙型肝炎病毒感染的重要指标．其结果越来越引起人们广泛注意。特别是一些低水平的ＨＢｓＡｇ血清。由于多种因素的影响容易造成时阴时阳的结果。陈瑜等［２１报告低浓度ＨＢｓＡｇ人群占有不小比例（５“玑以下占总人群的２．３４％．占ＨＢｓＡｇ阳性人群的２３．１６％１因我国ＨＢＶ感染众多．故此类低水平ＨＢｓＡｇ人群不容忽视。如果漏检．可能导致ＨＢＶ通过手术、输血等途径传播等严重后果。因此重视低水平ＨＢｓＡｇ血清的检出对临床诊断及流行病学具有重要意义。本研究发现，不同方法对低水平ＨＢｓＡｇ的检测灵敏度差异较大，尤其对小于１“玑的低水平ＨＢｓＡｇ阳性血清标本。差异非常明显：５斗ｇ／Ｌ以下的血清ＨＢｓＡｇ阳性检出率ＭＥＩＡ＞ＴＲＦＩＡ＞ＥＵＳＡ＞ＧＩＣＡ．与罗娅等１３】报导一致，与刘金彪等ｌａｌ报导稍有差异．这可能和不同厂家试剂盒灵敏度高低有关。应尽量选择灵敏方法和优质的试剂．提高检测的灵敏度．以减少低水平ＨＢｓＡｇ血清标本的漏检率。ＡＸＳＹＭ免疫分析仪采其临床意义［１１．中华检验医学杂志，２００ｌ，２４：３９０１．［３】罗娅，周智，刘杞．乙型肝炎病毒标志物低水平复制的检测及方法学比较【Ｊ】．中华肝脏病杂志，２００２，２（２）：１３２－１３３．１４１刘金彪，吴大富，田文武，等．两种方法检测血清低水平乙肝病毒表面抗原比较硼．中国医药导报，２００７，４（１４）：９４．【５】陶其敏，魏来．我国病毒性肝炎病原学诊断的发展和展望忉．中华检验医学杂志，２００３。２６：７２３～７２５．【６】曾章新，刘文星，朱忠勇，等．胶体金免疫层析法检灏乙型肝炎表面抗原的评价Ｌ乃．中华医学检验杂志，１９９９，２２：３２７—３２９．用ＭＥ从检测ＨＢＶ血清学标志物具有极赢灵敏度阻万方数据
