常见口腔微生物培养
【摘要】变形链球菌、血链球菌、乳杆菌、粘性放线菌、中间普氏菌、白色念珠菌是常见的口腔致龋菌。本实验主要作为大实验的一部分，以标准株为培养对象，设置了各种细菌的普通培养法以及外加原卟啉的培养基培养法。
【关键词】变形链球菌 血链球菌 乳杆菌 粘性放线菌 中间普氏菌 白色念珠菌 培养
1材料与仪器
菌株选择
变形链球菌ATCC 25175
血链球菌ATCC 10556[1]
-
嗜酸乳杆菌ATCC 4356[1][3]
粘性放线菌ATCC 15987[2]
中间普氏菌ATCC 25611[2]
白色念珠菌ATCC 90038
试剂与培养基
磷酸缓冲液PBS
无原卟啉培养液：
BHI液体培养基：将粉末溶于100ml纯水中，待溶解后调，高压灭菌，4℃冰箱保存备用。[3]
，
BHI 平板： BHI 粉末、 琼脂溶解于100ml纯水中，待溶解后调，高压灭菌，4℃冰箱保存备用。
MRS 液体培养基： MRS 粉末溶解于100ml纯水中，调 pH ，高压灭菌，4℃保存备用。[3]
MRS 平板： MRS 粉末溶解于100ml纯水中，加入2g琼脂，调 pH ，高压灭菌，4℃保存备用。
SDA培养基：蛋白胨 1g，葡萄糖 4g，琼脂 2g 加蒸馏水至 100mL，调节至 左右，121℃高压蒸汽灭菌 15min，冷却后加青霉素（50μg/ml），倒板，置 4℃备用。[4]
YPD液体培养基：蛋白胨 2g，葡萄糖 2g，酵母粉 1g 加蒸馏水至 100mL，调节至 ，121℃高压蒸汽灭菌 15min，冷却后加青霉素（50μg/ml），置 4℃备用。[4]
加原卟啉培养液：
[5][6]，取原卟啉IX（亦可以换成锌原卟啉或者原卟啉二钠盐等形式）加水定容到500ml，
配制成1g/L的溶液
在以上各种液体培养基中再加入，1g/L的原卟啉溶液配成约3μg/L的培养基。
:
【注：BHI配方表：每100ml水加入牛心浸出液25ml，牛脑浸出液20ml，胰蛋白胨，酵母提取物，葡萄糖，盐酸半胱氨酸溶液，VPI盐液，刃天青（%）。[2]
MRS培养液配方：每100ml纯水加入胰蛋白胨，牛肉膏，酵母提取物，柠檬酸铵，葡萄糖，醋酸钠，磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸锰，加入吐温-80 ， ml.[3]
本实验采用简易的混合粉直接配制。】
培养环境
无菌、厌氧（85%N2，10%H2、5%CO2）,37℃[1]
'
主要仪器
厌氧培养箱（Bugboxdual，America）
无菌操作台
2培养
变形链球菌培养
用固体培养基分离纯化
用接种环取变形链球菌ATCC 25175接种于BHI固体培养基，37℃培养24小时。
—
扩大培养
挑取单菌种分别接种到无原卟啉的BHI液体培养基与含原卟啉的BHI液体培养基，37℃恒温培养24小时。
血链球菌培养
分离提纯并扩大培养血链球菌ATCC 10556，步骤同。
粘性放线菌培养
分离提纯并扩大培养粘性放线菌ATCC 15987，步骤同。
}
中间普氏菌培养
分离提纯并扩大培养中间普氏菌ATCC 25611，步骤同。
乳杆菌培养
用固体培养基分离纯化
用接种环取。。
扩大培养
*
挑取单菌种分别接种到无原卟啉的MRS液体培养基与含原卟啉的MRS液体培养基，37℃恒温培养24小时。
白色念珠菌培养
用固体培养基分离纯化
用接种环取白色念珠菌ATCC 90038接种于SDA固体培养基，37℃培养24小时。
扩大培养
挑取单菌种分别接种到无原卟啉的YPD液体培养基与含原卟啉的YPD液体培养基，
37℃恒温培养24小时。
'
【参考文献】
[1]陶睿. Pleurocidin及其优化多肽抑制常见致龋菌的研究[D].第四军医大学,2012.
[2]杨暤. 茶多酚联用奥硝唑对牙周可疑致病菌的体外抑菌活性研究[D].重庆医科大学,2012.
[3]王勤花. 乳酸杆菌对变形链球菌体外作用研究[D].重庆医科大学,2012.
[4]郑璐. 白色念珠菌生物被膜体外模型的建立及分析[D].重庆医科大学,2010.
[5]王自明,张阳德,何剪太,林伶. 药物诱导大鼠大肠癌组织原卟啉Ⅸ积聚的定量分析[J]. 中国现代医学杂志,2010,01:38-41.
[6]黄维,李元娜,刘倩,吴海龙,李耀群. 两种荧光方法分析血样中锌原卟啉和原卟啉[J]. 分析化学,2009,08:1142-1146.
