医院PCR实验室室内质控标准操作程序

随时了解并控制实验室检测的精密度变化。

2 适用范围

核酸扩增荧光定量检测实验室，其中包括使用Roche LightCycler定量PCR仪的实验室。 3 操作人

XXX 4 操作步骤

4.1 自制血清质量控制品

a）自制的质量控制血清来自临床收集的已知HBV阳性血清，每收集到一份冻存于－20℃。

b）预定室内质控品靶值为1×10copies/ml,总量20ml，计算各份血清的混合量。

c）室温下复融质控血清，按比例混合血清，充分混匀。 d）用0.5ml离心管盛装质控血清，每管100µl，分装100管，剩余血清根据废弃物处理及生物防护操作程序处理。 e）每10管质控品装一小袋，可分成10小袋。1小袋置于－20℃冰箱，其余9小袋置于－80℃超低温冰箱，用完1小袋，就从－80℃转移1小袋质控品到－20℃冰箱备用。

6

4.2 测定及计算RCV

取准备用于下一阶段室内常规室内质量控制的血清，每天随病人标本测定一管，20天后计算各项目的测定结果的 X、s和CV。此处的CV即RCV。

RCV的计算公式如下：

其中X为RCV测定中所得20份结果的均值。∑表示总和。 n表示结果的份数（或天数）。

其中各符号所代表的含义与X计算公式相同。n-1为自由度。

S计算也可以使用下面的公式

22

其中∑X为各检测结果平方值之总和。(∑X)为各检测结果之和的平方。

4.3 绘制RCV图

a）计算X+2s、X－2s、X+3s、X－3s并在纵坐标上标出的X、X+2s、X－2s、X+3s、X－3s的位置，并将其具体数值标在左侧标尺上。

b）用红笔画出X±2s线，用蓝笔画出X±3s线，即成为

一张“空图”。其中每一小格代表实际检测数值的1/10。还应填齐图纸上方的各项，如：试验项目，质控血清来源及批号，起止日期，主要仪器等。还应填上RCV中测定中所得的X、s、CV。测定过程中的特殊情况，应在备注栏内记录。

c）在图纸下方“日期”、“测定值”、和“操作者”栏内按原始记录填入相应内容，边填写边核对。注意数据顺序应严格按实际操作情况，不得颠倒。日期一栏内，应填写实际日期。未做测定的节假日，星期天在图上留出空格似更为合理，因为这样可以真实反应情况，便于分析误差原因。

d）画出每个检测值所对应的图点。每个图点在图上的横坐标为其日期（或

序号），而纵坐标（即与相距的小格数目）可按下式计算。

每个点的纵坐标＝ 该点对应的检测值 － 靶值(X)

图中每个小格所代表的检测数值 e）计算结果为正数，则点在X轴上方，反之，则在X轴下方。各点画在图上后，用直线将各点顺序连接，以便于观察。

4.4 室内质控图的使用方法 4.4.1 描点

a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。 对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。

b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。

c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。 4.4.2 图形分析

a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。 b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应及时向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。

4.4.3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源

a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一致性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的

质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。

b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。

c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6

天以上出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。

d）其他规律变化：（周期性等）

4.4.4 通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源 a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s进行比较。如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同侧表明检测的精密度发生了变化。

b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。

如果X逐在月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。

c）在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋势分析。

5．本SOP的变动程序

本SOP的变动，可由任一使用该文件的工作人员提出，报上级负责人决定。如通过则公布实行。

起草人 XXX

备注：此程序将于4月份开始正式运行。

目前主要以厂家提供的试剂盒中的阴性和临界阳性对照品为质控。

批准人 XXX 启用日期