浙江大学学报（农业与生命科学版） ３７（６）：６１７～６２３，２０１１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｅｉ．） 文章编号：１００８—９２０９（２０１１）０６—０６１７－０７ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８—９２０９．２０１１．０６．００５ 高絮凝活性芽孢杆菌的筛选及其絮凝特性研究 曹芳，余秀梅，郭娟利，何敏，潘康成 （四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川雅安６２５０１４） 摘要：采用平板分离法从土壤中分离芽孢杆茵，以发酵液对高岭土悬液探凝效果为指标筛选高絮凝 活性菌株，并通过细菌形态、生理生化特性和１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析进行鉴定；同时考察发酵液加入量、 Ｃａ抖浓度和ｐＨ对絮凝效果的影响以及微生物絮凝剂在发酵液中的分布．结果表明：从土壤中分离筛选 到１株具有高效絮凝活性的芽孢杆茵ＭＢＦＦ６，其絮凝率可达９５．７％；根据细菌茵落形态、生理生化特性 和１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析，确定该菌株为巨大芽孢杆菌；其最佳絮凝条件为加入的茵液体积分数２ ， Ｃａ。 浓度４．５ ｍｍｏ１．Ｌ＿。，ｐＨ ７．０；该微生物絮凝剂是细菌在生长过程中产生的胞外代谢产物，存在于 发酵液中． 关 键 词：微生物絮凝剂；芽孢杆菌；絮凝率；筛选；鉴定；絮凝特性 中图分类号：Ｑ ９３９．９ 文献标志码：Ａ ＣＡＯ Ｆａｎｇ，ＹＵ Ｘｉｕ—ｍｅｉ，ＧＵＯ Ｊｕａｎ—ｌｉ，ＨＥ Ｍｉｎ，ＰＡＮ Ｋａｎｇ—ｃｈｅｎｇ（Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ＆Ｈｕｍａｎ Ｈｅａｌｔｈ ｏｆ Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ） Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ａｎｄ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｆｏｒ ｉｔｓ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈ＠ａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ａｇｒｉｃ．＆Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．），２０１１，３７（６）：６１７～６２３ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ｂｙ ｓｔｒｅａｋ ｐｌａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ， ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ａｎ ｉｎｄｅｘ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｅｄ ｋａｏｌｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ．Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ａｎｄ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ｄｏｓａｇｅ，Ｃａ。 ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐＨ ｏｎ ｔｈｅ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ｎａｍｅｄ ＭＢＦＦ６，ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｏｉｌ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ；ｉｔｓ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ａｃｈｉｅｖｅ ９５．７ ；ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ｄｏｓａｇｅ ｏｆ ２ ．Ｃａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ４．５ ｍｍｏｌ・Ｌ一 ａｎｄ ｐＨ ７．０．Ｔｈｅ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ ｗａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｗａｓ ａｎ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｂｒｏｔｈ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ； Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．； ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ｒａｔｅ； ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ； ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ 收稿日期 ２Ｏ１卜０１—２３ 基金项目 “教育江学者和创新团队发展计划”创新团队资助项目（ＩＲＴ０８４８）． 作者简介 曹芳（１９８５一），女，陕西榆林人，硕士研究生，主要从事微生物资源与利用研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｆｆｌｏｗｅｒ＠１６３．ｃｏｒｎ． 通信作者 潘康成，男，博士，教授，硕士生导师，主要从事发酵工程和动物微生态学研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｐａｎｋａｎｇｃｈｅｎｇ７１＠１２６．ｃｏｍ 浙江大学学报（农业与生命科学版） 第３ ７卷 目前，絮凝剂被广泛应用于各种工业生产 过程中，如废水处理，饮用水的净化以及食品和 发酵的下游处理ｎｊ．絮凝剂通常被分为３类：１） 无机絮凝剂，如硫酸铝和多聚氯化铝；２）有机合 成絮凝剂，如聚丙烯酰胺衍生物和聚乙烯胺；３） 天然絮凝剂，如聚氨基葡糖、海藻酸和微生物絮 凝剂 ］．微生物絮凝剂是由微生物在其生长过 程中产生的胞外多聚物质，具有高效、无毒、无 害、无二次污染和易降解等优点，近年来得到了 各国学者的广泛关注ｌ４剖．随着环境污染日益严 重，水体污染对全球动植物乃至人类的危害以 及对生态环境的破坏已引起人类的重视，养殖 水体首先被污染，也是被二次污染的重要污染 源，给水产养殖带来巨大的压力，因此养殖水体 需要大量的絮凝剂对其进行处理，而目前在污 水处理中，实际使用的絮凝剂以无机的聚合氯 化铝和有机合成的聚丙烯酰胺最为广泛．研 究 表明，老年痴呆症与现在广泛使用的无机 絮凝剂聚合氯化铝有关．聚丙烯酰胺单体不仅 具有强烈的神经毒性和“三致”（致癌，致畸，致 突变）毒性，而且不易降解，对人类的身体健康 产生了极大的威胁¨８ ；因此，开发一种安全、无 毒、无二次污染的新型絮凝剂具有极强的现实 意义．目前，已有利用微生态制剂中的有益菌进 行水体改良的报道，而把益生菌用作絮凝剂改 善养殖水体还未曾报道．本研究通过筛选具有 高絮凝活性的芽孢杆菌，考察影响絮凝效果的 指标以及微生物絮凝剂在发酵液中的分布，为 探索益生菌的益生性与絮凝活性相结合在养殖 水体净化中的作用提供依据． １ 材料与方法 １．１ 菌种来源 筛选菌株从四川Ｉ农业大学校园和实验农场 的土壤中分离得到．参考菌株为巨大芽孢杆菌 ＪＤＯ０８（登录号ＥＵ８７１７０８），由无锡阿尔宝尔生 物工程有限公司惠赠 ． １．２培养基 营养肉汤培养基：蛋白胨１０ ｇ，牛肉膏３ ｇ， ＮａＣ１ ５ ｇ，蒸馏水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０．１２１℃灭 菌３０ ｍｉｎ． 营养琼脂平板或斜面培养基：在营养肉汤 培养基中加入琼脂１５～２Ｏ ｇ．Ｌ～．１２１℃灭菌 ３０ ｍｉｎ． 发酵培养基：葡萄糖２０ ｇ，Ｋ２ＨＰＯ ５ ｇ， ＫＨ２ＰＯ４ ２ ｇ，ＮａＣ１ ０．１ ｇ，（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０．２ ｇ， 尿素０．５ ｇ，酵母膏０．５ ｇ，ＭｇＳＯ ・７Ｈ２０ ０．２ ｇ，蒸馏水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０．１２１℃灭菌 ３Ｏ ｍｉｎ． １．３菌种的分离与纯化 １．３．１ 土壤样品的预处理 取有机质丰富 的土壤装于已消毒的研钵中研磨，称１０ ｇ置于 ３００ ｍＬ已灭菌的三角瓶中，加入９０ ｍＬ灭菌 生理盐水，放入恒温振荡器中振荡３０ ｍｉｎ，然 后８Ｏ℃水浴１０ ｒａｉｎ以杀灭非芽孢杆菌，即为 １×１０ 稀释度的土壤悬液． １．３．２ 菌种的分离与纯化 取１ ｍＬ土壤 悬液于营养肉汤培养基中，３２ ｏＣ １５０ ｒ．ｍｉｎ 水浴振荡，富集培养４８ ｈ．移取１ ｍＬ细菌培养 液于装有９ ｍＬ灭菌生理盐水的试管中，混匀， 依次１Ｏ倍递进稀释成１×１０１～１×１Ｏ 稀释 度．取各稀释液０．２ ｍＬ涂布于营养琼脂平板 上，３２℃恒温需氧培养４８ ｈ．在无菌条件下，用 接种环挑取单菌落划线于营养琼脂平板上，３２ ℃恒温需氧培养２４ ｈ；多次划线分离，直到划 线后接连几次在平板上长出的菌落特征相似， 不存在异类，可作为纯化菌株；然后转接于营养 琼脂斜面上３２℃恒温需氧培养４８ ｈ，４℃冰箱 保藏备用． １．４菌种的筛选 １．４．１初筛 将分离纯化后得到的菌株分 别接种于１００ ｍＬ发酵培养基（３００ ｍＬ三角 瓶）中，３０℃１５０ ｒ．ｍｉｎ 培养２４ ｈ．对所得培 养液进行絮凝活性的初步测定：在试管中加入 ５ ｇ．Ｌ 高岭土悬液１０ ｍＬ、质量体积比为１ 的ＣａＣ１ 水溶液ｌ ｍＬ、发酵液１ ｍＬ，轻摇，静 置１０ ｒａｉｎ，目测，使高岭土悬液絮凝成大颗粒 沉淀的菌株作为具有絮凝活性的菌株． １．４．２ 复筛 将初筛获得的菌株从斜面培 养基上接种到装有１００ ｍｌ 营养肉汤培养基的 ３００ ｍＬ三角瓶中，在摇床上以１５Ｏ ｒ．ｍｉｎ＿。、３７ ℃培养１６ ｈ作为种子液．取２ ｍＬ种子液接种 到１００ ｍＩ 发酵培养基（３００ ｍＬ三角瓶）中， 第６期 曹芳，等：高絮凝活性芽孢杆菌的筛选及其絮凝特性研究 １５０ ｒ．ｍｉｎ～、３０℃培养２４ ｈ，然后进行絮凝活 性测定，选择发酵液絮凝率最大的菌株作为后 续研究菌株． 匀，色泽较暗，边缘整齐，隆起．在生长后期 一般带黄色，长时间培养后生长物和培养基可 变成黑色．在显微镜下呈革兰阳性，菌体杆状， 两端钝圆，长链状或成对排列，芽孢椭圆中生． 其生理生化反应结果见表２．参考《伯杰细菌鉴 定手册》，根据ＭＢＦＦ６菌落培养特征、显微镜 下的细胞形态特征，以及生理生化特征，初步确 １．５絮凝活性的测定 参照文献Ｅ３］的方法进行． １．６菌株的初步鉴定 参考《伯杰细菌鉴定手册》［９ 对具有高效絮 凝活性的菌株菌落、细菌形态和生理生化特性 进行初步鉴定． １．７菌株的１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析 参照文献ＥｌＯ］的方法进行． １．８絮凝剂在发酵液中的分布 按照１．４．２节的方法培养细菌，发酵液以 ５ ０００ ｒ．ｒａｉｎ 离心３０ ｒａｉｎ，分离上清液和菌 体，用无菌水将菌体细胞洗涤２次，最后用蒸馏 水稀释成原发酵液体积的菌悬液，分别测定发 酵液、上清液和菌悬液对高岭土悬液的絮凝能 力，以确定所鉴定的具有高絮凝活性的菌株所 产絮凝剂的分布． １．９影响细菌絮凝剂絮凝效果的因素 选择发酵液加入量、Ｃａ。 浓度和高岭土悬 液的ｐＨ值，考察其对絮凝剂絮凝效果的影响． ２ 结 果 ２．Ｉ 高效絮凝活性芽孢杆菌的筛选 从土壤分离得到１０１株菌株，经初筛 获得具有絮凝活性的芽孢杆菌共６株．进一步 复筛后得到１株编号为ＭＢＦＦ６菌株具有高絮 凝活性，其絮凝率可达９５．７ （表１），因此，选 择ＭＢＦＦ６进行鉴定． 表１絮凝芽孢杆菌的筛选 Ｔａｂｌｅ １ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 嘉萼ＭＢＦＡｓ ＭＢＦＣＡ ＭＢＦＥ ＭＢＦＥ ＭＢＦＦｓ ＭＢＦＧ 絮凝率／ ６６．４ ６４．２ ７４．３ ７６．８ ９５．７ ６９．５ ２．２菌株ＭＢＦＦ６的初步鉴定 菌株ＭＢＦＦ６在营养琼脂平板上培养２４ ｈ，菌落呈乳白色，圆形光滑，湿润黏稠，质地均 定该菌株为巨大芽孢杆菌． 表２芽孢杆菌的生理生化特征 Ｔａｂｌｅ ２ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． 注：＋：阳性，一：阴性 ２．３ １６Ｓ ｒＤＮＡ测序分析 ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳检测，扩增产 物是一条大小约１．５ ｋｂ的特异性条带．将ＰＣＲ 反应产物回收并测序，其序列长度为１ ５０２ ｂｐ， ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＨＱ８４０７３２．将得到的１６Ｓ ｒＤＮＡ序列提交到ＮＣＢＩ核酸数据库中进行 ＢＬＡＳＴ在线分析．ＭＢＦＦ６菌株在前１００个命 中序列中有５１个命中Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ， 浙江大学学报（农业与生命科学版） 第３ ７卷 与ＧｅｎＢａｎｋ中巨大芽孢杆菌的１６Ｓ ｒＤＮＡ序 行系统发育分析，结果见图１．从系统发育树上 列相似性均达到９９ 以上，甚至高达９９．９ ， 可明显看出，ＭＢＦＦ６与Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ 而与同属中的其他菌种同源性在９２ ～９６ 的亲缘关系最近，遗传距离在０．００６～０．００９之 之间．与此同时，利用２个芽孢杆菌属的２２个 间，与属内其他菌种的遗传距离在０．０５４～ 菌种２５个菌株的１６Ｓ ｒＤＮＡ基因序列，采用 ０．１３０之间；因此，最终确定该菌为巨大芽孢 ＣｌｕｓｔａｌＸ １．８１软件和Ｐｈｙｌｏｄｒａｗ ０．８２软件进 杆菌． Ｂ．ｓｐ．ｓｔｒａｉｎ ＭＢＦＦ６（ＨＱ８４０７３２） Ｌ＿—’Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ ｓｔｒａｉｎ ＪＤ００８（ＥＵ８７１７０８、 Ｂ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ（ＥＵ７２３８ｌ８、 Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ（ＨＭ１０４２３２） ’Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ（ＥＦ１００９６８） ’Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ（ＤＱ３７１２２９、 ・Ｂ．１ｅｒｉｆｕｓ（ＡＢ０２１ｌ８９） —＿＿．Ｂ．ｍａｒｉｎｕｓ（ＡＢ０２ｌ １９０） ——————＿＿．Ｂ．ｍａｓｓｉＢｅｎｓ括（ＡＹ６７７ｌ ｌ６１ ｒ＿．Ｂ．ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ（ＡＢ２７ｌ７４２） ’。。。 ・Ｂ／ｕｓ／ｆｏｒｍ￣（Ｍ７７４８６） ？ ——’Ｂ・ｐｓｙｃｈｒ０ｐｈｉ ｓ（Ｘ６０６３４） ． — ．．一 ！ｔｔ Ｂ．ｇｌｏｂｉｓｐｏｒｕｓ（Ｘ６０６４４） ——————’Ｂ．ｉｎｓｏｌｆｉｕｕｓ（Ｘ６０６４２１ ————＿＿．Ｂ．ａｍｉｎｏｖｏｒａｎｓ（Ｘ６２ｌ７８） ｃ＿—’Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ（ＥＵ３４６６６３） Ｂ．ａｎｆｈｒａｃｉｓ（ＡＹ１３８３８２） 广——一一．Ｂ．１ｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ（ＥＵ８７１７０７） ｔ ｆ－＿’Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ（ＥＵ３４６６６２） 曰．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ｒＥＦ４３３４０８） —＿－．Ｂ．ｐｕｍｉｌｌｕｓ（ＥＵ６６０３６９） Ｂ．ａｌｃａｌｏｐｈｉｌｕｓ（ＡＪ２７７９０４） Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ（Ｄ１６２６７） Ｂ．ｎａｇａｎｏｅｎｓｉｓ（ＡＢ０２１ １９３） Ｃ．１ａｖａｌｅｎｓｅ（ＥＦ５６４２７７） 标尺表示遗传距离；括号内的字母和数字为菌株在ＧｅｎＢａｎｋ中的登录号． 图１ 芽孢杆菌的１６Ｓ ｒＤＮＡ系统发育树 Ｆｉｇ．１ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ｂａｓｅｄ Ｏｉｌ １６Ｓ ｒＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ２．４絮凝剂在发酵液中的分布 絮凝剂在发酵液中的分布见图２．从中可 以看出，发酵液的絮凝率为９１．６ ，上清液的 絮凝率为９５．５ ，菌悬液的絮凝率为４６．１％． 表明ＭＢＦＦ６菌株所产生的微生物絮凝剂是细 菌在其生长过程中产生的、并分泌到细胞外的 代谢产物． ２．５影响细菌絮凝剂絮凝效果的因素 ２．５．１ 菌株ＭＢＦＦ６发酵液加入量对絮凝效 发酵液 上清液 菌悬液 果的影响 为研究菌株ＭＢＦＦ６所产絮凝剂 的最佳投加量，在１００ ｍＩ 高岭土悬液中分别 图２ ＭＢＦＦ６菌株絮凝活性的分布 Ｆｉｇ．２ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｆｌｏｅｃｕｌａｎｔ ｆｒｏｍ ｓｔｒａｉｎ ＭＢＦＦ６ 按０．５ ９／６、１．０ 、２．０ 、３．０ 和４．０ 的体积 第６期 曹芳，等：高絮凝活性芽孢杆菌的筛选及其絮凝特性研究 料 照∞ ∞ ∞ ∞比例加入发酵液，其相应的絮凝率分别为 ４７．６ ９／６、５３．９ 、９３．２ 、８６．３ 和４７．６ ． 所采集的样品，首先需加热灭活非芽孢杆菌，然 后通过富集培养是该类微生物分离的关键．目 ＭＢＦＦ６对高岭土悬液的絮凝效果与菌液的投 加量之间关系显著，投加量从０ 到２ ，絮凝 的是使非优势种群的絮凝菌数量增加，同时淘 汰不需要的微生物，以增大筛选絮凝菌的几率 率与菌液投加量成比例递增，在投加量为２ 时絮凝效果最佳，但随投加量继续增大，絮凝率 和减少筛选分离的工作量，同时，在分离的实际 操作中采用观察菌落形态的方法，以提高菌种 反而降低．说明菌株ＭＢＦＦ６所产微生物絮凝 剂的最佳用量为２ ． ２．５．２ Ｃａ抖浓度对絮凝效果的影响 在 １００ ｍＬ高岭土悬液中加入２ ｍＬ细菌培养液 后，分别调节反应体系中的ＣａＣ１ 浓度为０、 １．８、２．７、３．６、４．５、５．４和６．３ ｍｍｏ１．Ｌ，ｐＨ ７．０，测得其相应的絮凝率分别为３０．５ 、 ５４．８ 、６３．４ ９／６、８５．７ 、９３．４ ９／６、８８．５ 和 ８４．２ ．当加入ＣａＣ１ 浓度为０～４．５ ｍｍｏ１． Ｌ 时，絮凝率逐渐升高，在浓度为４．５ ｍｍｏ１． Ｌ 时絮凝率达到最大，之后随着ＣａＣ１ 浓度 的增加，絮凝率逐渐降低． ２．５．３ 高岭土悬液ｐＨ对絮凝效果的影响 从图３中可以看出，高岭土悬液的ｐＨ值对芽 孢杆菌ＭＢＦＦ６絮凝剂絮凝效果的影响极为明 显，在酸性条件下絮凝效果较差，在碱性环境中 效果良好，当ｐＨ为７时絮凝效果最好，絮凝率 达到９５．１ ． ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ ｐＨ 图３ ｐＨ值对絮凝活性的影响 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐＨ ｏｎ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ３ 讨 论 ３．１ 高效絮凝活性芽孢杆菌的筛选与鉴定 微生物絮凝剂产生菌几乎包括所有微生物 种类叭。 ．对于分离具有絮凝活性的芽孢杆菌 筛选工作的成功率，提高工作效率． 目前对菌种的鉴定通常采用传统菌种鉴定 方法和分子水平上的分类鉴定方法．传统菌种 鉴定方法是从菌落形态、并通过一系列生理生 化反应来确定某个菌种的分类地位，由于鉴定 步骤繁多，很多反应是生物体的自然生理过程， 耗时长，传统方法的很多性状都是基于感官来 判断的，主观干扰很容易被引人，给鉴定工作带 来误差ＥｌＯ３．目前分子水平上的分类鉴定方法主 要利用１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析进行鉴定，其原理 首先是获得细菌ＤＮＡ模板进行扩增、测序，得 到１６Ｓ ｒＤＮＡ序列，然后在ＧｅｎＢａｎｋ上进行 ＢＬＡＳＴ在线比对，寻找同源性高的菌种．潘康 成等［１。。报道仅用１６Ｓ ｒＤＮＡ基因序列在 ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ同源性分析来确定细 菌的种属仍有缺陷，必须构建系统发育树以及 结合传统的细菌形态和生理生化特征，才能准 确对细菌种属定位；因此，本试验根据以上原理 及其鉴定方法的特点，采用传统细菌鉴定方法 的同时结合１６Ｓ ｒＤＮＡ序列分析对分离得到高 絮凝活性的芽孢杆菌ＭＢＦＦ６进行鉴定，最终 确定ＭＢＦＦ６菌株为巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）． ３．２絮凝剂活性的分布 本试验对絮凝活性分布的测定结果表明， ＭＢＦＦ６菌株所产生的微生物絮凝剂是细菌在 生长过程中产生的、并分泌到细胞外的代谢产 物，存在于发酵液中，而由于少量的代谢产物附 着在细菌细胞外侧，因此细菌菌悬液也具有一 定的絮凝效果．这一结果与罗平等［】划报道的短 芽孢杆菌产生的微生物絮凝剂的分布结果 类似． ３．３影响絮凝效果的因素 目前大量的研究表明，影响微生物絮凝效 果的因素较多，如发酵液的投加量、金属离子、 ｐＨ值、水温、搅拌方式等Ｉ１ ，尤其是发酵液的 浙江大学学报（农业与生命科学版） 第３ ７卷 投加量、金属离子、废水中的ｐＨ值最为显著， 因此本试验对这３种因子的影响进行了研究． 征以及细菌１６Ｓ ｒＤＮＡ基因序列同源性分析和 构建细菌系统发育树进行鉴定，确定菌株 ＭＢＦＦ６为巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ 试验结果表明ＭＢＦＦ６对高岭土悬液的絮 凝效果与菌液的投加量关系显著 投加量从 ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）．其最佳絮凝条件为加入的菌液 体积分数２ ，Ｃａ抖浓度４．５ ｍｍｏ１．Ｌ～，ｐＨ ７．０．该微生物絮凝剂是细菌在生长过程中产生 的胞外代谢产物，存在于发酵液中． ０ ９／６～２ ，絮凝率随菌液投加量成比例递增，在 投加量为２ 时絮凝效果最佳，但随投加量继 续增大，絮凝率反而降低．这一结果与邱忠平 等口明报道的假单胞菌ＬＢ１和李博等ｎ 报道的 短芽孢杆菌所产絮凝剂最佳投加量为３ 略有 不同，与夏四清等［１。 报道的枯草芽孢杆菌所产 絮凝剂最佳投加量为２％相同，这可能与菌株 特性、培养时间、高岭土的生产等有关． 微生物絮凝剂是一类天然的高分子物质，其 絮凝作用主要是利用吸附架桥机制，某些金属离 子的存在会对絮凝起促进作用．罗平等＿１ ９］研究 发现Ｃａ 、Ａ１抖等阳离子对短芽孢杆菌絮凝剂 活性有增强作用；刘紫鹃等 。。报道Ｃａ 、Ｍｎ抖 对巨大芽孢杆菌絮凝剂活性的增强作用最为显 著；ｗｕ等＿１。 报道Ｃａ 、Ｍｇ抖对枯草芽孢杆菌絮 凝剂活性在ｐＨ ４～８范围内有显著影响，尤其是 Ｃａ 的作用最为明显；因此，结合前人的试验结 果，本试验考察了不同Ｃａ 。。浓度对芽孢杆菌 ＭＢＦＦ６絮凝活性的影响，结果表明，当加入 Ｃａ 。。浓度为Ｏ～４．５ ｍｍｏ１．Ｌ 时，絮凝率逐渐升 高，在浓度为４．５ ｍｍｏ１．Ｌ 时絮凝率达到最大， 之后随着剂量的增加，逐渐降低． ｐＨ是影响絮凝活性的重要因素之一，它不 仅影响絮凝剂的表面电荷性质、形态结构、数量， 还影响水体中悬浮物质的电荷性质，从而影响它 们的相互作用．试验结果表明，高岭土悬液的ｐＨ 值对芽孢杆菌ＭＢＦＦ６所产絮凝剂絮凝效果的 影响极为明显，在酸性条件下絮凝效果较差，在 碱性环境中效果良好，当ｐＨ为７时絮凝效果最 好，絮凝率达到９５．１ ．主要原因是由于ｐＨ升 高可减小悬浮颗粒间的相互斥力，有利于絮凝剂 和悬浮颗粒之间形成架桥，促进絮凝沉淀． ４ 结 论 本试验从校园土壤中分离得到１株具有高 效絮凝活性的芽孢杆菌ＭＢＦＦ６，其对高岭土的 絮凝率达９５．７ ．通过细菌形态、生理生化特 Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ： ［１］Ｓｈｉｈ Ｉ Ｌ，Ｖａｎ Ｙ Ｔ，Ｙｅｈ Ｌ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００１，７８（３）：２６７—２７２． ［２］ Ｓａｌｅｈｉｚａｄｅｈ Ｈ， Ｓｈｏｊａｏｓａｄａｔｉ Ｓ Ａ． Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔｓ Ｒｅｃｅｎｔ ｔｒｅｎｄｓ ａｎｄ ｂｉ０ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ［Ｊ］． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｄｖａｎｃｅｓ，２００１，１９（５）：３７１ ３８５． ［３］ Ｚｈａｎｇ ｚ Ｑ，Ｌｉｎ Ｂ，Ｘｉａ Ｓ Ｑ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｂｉｏｆｌｏｅｃｕｌａｎｔ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ－ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ ｃｏｎｓｏｒｔｉａ ｕｓｉｎｇ ｂｒｅｗｅｒｙ ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ ａｓ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２００７，１９（６）：６６７—６７３． ［４］ｗｉｃｋｒａｍａｓｉｎｇｈｅ ｓ Ｒ，Ｌｅｏｎｇ Ｙ Ｋ，Ｍｏｎｄａｌ Ｓ，ｅｔ ａ１． Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｃａｔｉｏｎｉｃ ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｏｗｄｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，２１（４）：３７４—３７９． ［５］Ｇａｏ Ｑ，Ｚｈｕ Ｘ Ｈ，Ｍｕ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｉｎｇ Ｒｕｄｉｔａｐｅｓ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎａｒｕｍ ｃｏｎｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ ｍｕｄ ｔＯ ｐｒｏｄｕｃｅ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，１００（２１）： ４９９６—５００１． ［６］ＸＵＥ Ｈｕａ—ｑｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｗｅｉ—ｃａｉ（薛华庆，王伟财）． Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｂｉｏｆｌｏｅｃｕｌａｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］． Ｍｏｄｅｒｎ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｔｒａｄｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（现代商贸工业），２００９ （４）：３０３—３０５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［７］ Ａｒｅｚｏｏ Ｃ．Ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’Ｓ ｄｉｓｅａｓｅ ＥＪ］． Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２００２，１７：１７－２０． ［８］ Ｒｕｄｅｎ Ｃ．Ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｒｉｓｋ ｅｘｐｅｒｔ ｒｉｓｋ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｂｌｉｃ ｄｅｂａｔｅ ＥＪ］．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００４，４２（３）：３３５—３４９． ［９］Ｇａｒｒｉｔｙ Ｇ Ｍ，Ｂｅｌｌ Ｇ Ａ，Ｌｉｌｂｕｒｎ Ｔ Ｇ．Ｂｅｒｇｅｙ’Ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ［Ｍ］．２ｎｄ ｅｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００４． ［１Ｏ］ＰＡＮ Ｋａｎｇ－ｃｈｅｎｇ，ＧＡＯ Ｃｈｕａｎ～ｑｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｊｕｎ—ｌｉ， ｅｔ ａ１．（潘康成，高传庆，张钧利，等）．Ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 第６期 曹芳，等：高絮凝活性芽孢杆菌的筛选及其絮凝特性研究 ６２３ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｙ １ ６Ｓ ｒＤＮＡ ＣＪ］．Ｆｅｅｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ（饲料工业），２０１０（８）：２４—２７．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ａ１．（邱忠平，茆灿泉，刘源月，等）．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｆｌｏｅｃｕｌａｔｉｏｎ ［１１］ Ｌｉａｎ Ｂ，Ｃｈｅｎ Ｙ，Ｚｈａｏ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍ“ｃ ｇ砌Ｄ “ ： ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（环境工程学报），２００９（７）：１１８５—１１８８．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ Ｄ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，９９ （１１）：４８２５—４８３１． ［１７］ｕ Ｂｏ，ＺＨＡＯ Ｍｉｔｒ，ＰＥＮＧ Ｙｕａｎ－ｊｕ（李博，赵敏，彭元 举）．Ｔｈｅ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ａ ｂｉ０ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ—ｐｒ０ｄｕｃｉｎｇ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｏｆ ｉｔｓ ｃｕｌｔｕｒｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ［１２］ Ｐｒａｓｅｒｔｓａｎ Ｐ，Ｄｅｒｍｌｉｍ Ｗ，Ｄｏｅｌｌｅ Ｈ，ｅｔａ１．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ， ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｙ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｐｏｌｙｍｅｒ ｆｒｏｍ ｎｅｗｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ＿ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉａｍｕｓｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ（佳木斯大 ｃｌｏａｃａｅＷＤ７ Ｉ－Ｊ］．ＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＰｏｌｙｍｅｒｓ，２００６，６６（３）： ２８９—２９７． 学学报：自然科学版），２００９，２７（２）：３０１—３０５．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１３］ Ｗｕ Ｊ Ｙ，Ｙｅ Ｈ Ｆ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ０ｎ ａｎｄ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｒｔ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ［１８］ＸＩＡ Ｓｉ－ｑｉｎｇ，ＤＩＮＧ Ｘｉ—ｍｉｎｇ，ＣＨＡＮＧ Ｙｕ－ｇｕａｒｔｇ，ｅｔ ａ１．（夏四清，丁西明，常玉广，等）．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＤＹＵ１ ｉｓｏｌａｔｅ 口］Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，４２（７）：１１１４－１１２３ Ｐｒｏｃｅｓｓ ［１４］ ＬＵＯ Ｐｉｎｇ，ＺＯＵ Ｘｉａｏ—ｂｉｎｇ，ＬＵＯ Ｇｕ—ｙｕａｎ（罗平，邹 小兵，罗固源）． Ｃｈａｒａｃｔｅ ｒｉｓｔｉｃ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ 口］．Ｃｈｉｎａ Ｗａｔｅｒ＆Ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ（中国给水排水）， ２００９（１）：１４—１７．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ［Ｊ］．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｗａｔｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（水处理技术），２００５（６）：２０—２３．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［１９］ＬＵＯ Ｐｉｎｇ，ＬＵＯ Ｇｕ—ｙｕａｎ，ＺＵＯ Ｚｈａｏ—ｈｏｎｇ（罗平，罗 固源，左赵宏）．Ｆｌｏｅｃｕｌａｔｉｏｎ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ［１５］ ＷＥＩ Ｘｉａｏ—ｊｉｎ，ＬＩ Ｊｉｎｇ，ＨＥ Ｘｕ—ｗｅｎ（魏晓金，李静，何 绪文）．Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃｏｋｉｎｇ ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔｓ Ｄ］． Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（中国工程科学），２００９（２）：８８—９１． （ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ｂｒｅｖｉｓ ＲＬ－２口］．Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｗａｔｅｒ＆Ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ（工业 用水与废水），２００６（４）：６卜６３．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ［２Ｏ］ＬＩＵ Ｚｉ～ｊｕａｎ，ＬＩＵ Ｚｈｉ—ｐｅｉ，ＹＡＮＧ Ｈｕｉ—ｆａｎｇ（刘紫鹃， 刘志培，杨惠芳）．Ｂｉｏｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ Ａ２５［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ（环 境科学学报），２００１（Ｓ１）：４７—５２．（ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ） ｎｇ，ＭＡＯ Ｃａｎ—ｑｕａｎ。ＩＡＵ Ｙｕａｎ—ｙｕｅ，ｅｔ ［１６］ ＱＩＵ Ｚｈｏｎｇ—ｐｉ，．ｔ；．．Ｔ ０．ｔ。欢迎订阅《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》是浙江大学主办的全国性、综合性、学术性期刊．主要刊 登农业基础科学和应用科学研究论文．内容涵盖农业和生命科学各个领域，包括作物遗传育种．种 质资源；植物保护；生理生态；作物栽培；土壤肥料；园艺；农产品的贮藏．保鲜．加工；畜牧．兽医；以 及生命科学方面的专论，研究论文，快讯等．读者对象主要是国内外农业科学研究人员，农业院校的 教师和研究生，以及综合性大学等有关农业科学的研究与管理人员．本刊近年的影响因子、总被引 频次两项重要指标均名列全国农业高校学术期刊的前列；２００１年入选中国期刊方阵；２００４年在教 育部全国高校科技期刊评比中荣获壹等奖，全国优秀农业期刊评比壹等奖，２００５年又获第三届国家 期刊奖百种重点期刊奖，２００６年再次荣获全国农业期刊评比壹等奖，首届中国高校优秀科技期刊 奖；荣获中信所２００８年度“中国百种杰出学术期刊”；２００９年荣获“高校科技期刊优秀编辑质量奖”； ２Ｏ１Ｏ年获“第三届中国高校精品科技期刊奖”；第二届“ＲＣＣＳＥ中国权威学术期刊”；现为全国综合 性农业科学类核心期刊．目前被美国《化学文摘》（ＣＡ），美国《剑桥科学文摘》（ＣＳＡ），俄罗斯《文摘杂 志》（ＡＪ），英国《国际农业和生物科学中心文摘》（ｃＡＢＩ），英国《动物学记录》（ＺＲ），联合国粮农组织 ＦＡＯ（（农业索引》（Ａｇｒｉｎｄｅｘ）及中国科学引文数据库，《中国学术期刊文摘》，中国期刊网《中国学术 期刊（光盘版）》数据库，万方数据资源系统数字化期刊群数据库等国际国内重要检索系统收录． 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》为双月刊，Ａ４开本，１２０页，国内外公开发行．国内统一 刊号：ＣＮ ３３—１２４７／Ｓ，国际标准刊号：ＩＳＳＮ １００８—９２０９，邮发代号：３２－４８，国外代号：ＢＭ４１０８．定价每 期１５．Ｏ０元／人民币，全年定价９Ｏ．Ｏ０元／人民币．
