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常规考马斯亮蓝染色试剂盒

来源:华佗小知识
 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com

常规考马斯亮蓝染色试剂盒

简介:

常规考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝R250染色和脱色方法,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。常规考马斯亮蓝染色试剂盒中的染色液和脱色液经过改良,不含有毒的甲醇,含有刺激性气味的乙酸。采用常规染色脱色方法累计时间达到2~3h后可以观察到蛋白条带,采用快速染色脱色方法20min左右即可观察到蛋白条带。

组成:

操作步骤(仅供参考):

(一)常规染色脱色方法

1、PAGE电泳后取凝胶放入适量Commassie Blue Stain中,确保染色液充分覆盖凝胶。 2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温染色1h或更长时间。具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚,温度较低,则染色时间宜适当延长。凝胶较薄,温度较高,则染色时间可以适当缩短。

3、倒出染色液,该染色液可以回收重复使用2~3次。

4、加入适量Commassie Blue脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。

5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动,室温脱色。期间更换脱色液2~4次,直至蓝色背景基本上全部被脱去,并且蛋白条带染色效果达到预期。

6、完成脱色后把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。 (二)快速染色脱色方法

1、PAGE电泳结束后取胶放入Commassie Blue stain中,微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。通常对于胶浓度大于10%的胶比较坚韧,在发生煮沸时不易破损;对于胶浓度小于10%的胶,宜尽量避免煮沸,以免出现胶碎裂的情况。 2、随后在染色液温度较高的情况下,在室温摇床上摇动。 3、倒出染色液,染色液可以回收重复使用2~3次。

编号 PT0020 名称 600ml 100ml 500ml 1份 Storage RT RT 试剂(A): Commassie Blue Stain 试剂(B): Commassie Blue脱色液 使用说明书 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com

4、加入适量Commassie Blue脱色液,确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 5、微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾,立即停止加热。

6、随后在脱色液温度较高的情况下,在摇床上摇动5~10min。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。

8、完成脱色后,把凝胶保存在水中,用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨,可以把胶保存在含20%甘油水溶液中,长期保存可以制备干胶。

注意事项:

1、 染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热,可以大大加快染色速度。但

加热时宜尽量避免沸腾,以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。

2、 如果希望染色的背景更低,希望获得更加清晰的蛋白条带,可以加入适量的室温蒸馏水

进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。

3、 常规染色脱色方法耗时较长,但检测灵敏度更高,染色效果更加稳定。快速染色脱色方

法通常检测灵敏度略低,并且在微波炉加热的过程中有时会出现暴沸导致凝胶碎裂的情况,需特别注意。

4、 本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。 5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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