苦豆子总生物碱的单次给药毒性试验

苦豆子总生物碱的单次给药毒性试验

（内蒙古医科大学新药安全评价研究中心曹晓东张谦张微肖云峰王芳研究中心呼和浩特010018）

摘要：昆明种小鼠灌胃苦豆子总碱，进行单次毒性试验，记录急性中毒症状，剖检组织病理学检查发现靶器官并以Bliss法计算苦

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豆子总生物碱的半数致死量。得到苦豆子总碱半数致死量为301.75mg·kg。实验结果表明，苦豆子总碱经口途径给药的主要靶器官是肺脏、肝脏、肾脏和脑。关键词：苦豆子总碱单次给药靶器官中图分类号：R284.2

文献标识码：B

文章编号：1672-8351（2018）06-0142-02

进食、饮水，前三天密切观察并记录小鼠情况，以后每天的

10点和16点各观察一次，观察给药后14d内小鼠的行为外观以及死亡数并记录，根据动物死亡数量确定LD50。2病料采集

小鼠濒死或死亡后，称重并及时解剖，将心脏、肝脏、肺脏、脑和肾脏放入固定液固定，HE染色,光学显微镜观察选取制作效果阅片并拍照。3实验结果及分析

3.1小鼠中毒症状观察：对照组小鼠生长及行为正常，体重增加。1、2组小鼠，大多行为活动正常，状态良好，部分出现前肢震颤、俯卧、精神沉郁。4、5、6组则大多停止进食及饮水，一部分小鼠活动量明显减少、身体蜷缩并不断抖动、弓背抱腹、全身震颤等症状；一部分小鼠给药后在笼内上蹿下跳，精神亢奋、活动增加、偶见强直性痉挛。

死亡小鼠耳部血管全部充血怒张，部分出现俯卧、发抖症状的小鼠在一天内死亡。解剖死亡小鼠，发现小鼠肺脏水肿、气肿、大脑与小脑实质水肿，大脑表面肿胀光滑。肝脏眼观肿大，边缘钝圆，颜色暗红。其他脏器眼观无明显异常。3.2病理检查结果：肺脏病理切片病理检查发现（见图1），肺泡内有少量嗜酸性液体渗出、炎性细胞浸润，肺图1图2泡水肿、出血。脑组织病理切片病理检查可见（见图2），脑组织有充血、水肿、红细胞渗出和局部坏死灶，神图3图4经细胞核固缩胞质透

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内蒙古自治区新药筛选工程

苦豆子（SophoraalopecuroidesL）又名苦豆草，在草原地区家畜常因食用大量苦豆子草而发生急性中毒，所以又被称为醉马草。属于多年生蔷薇目豆科槐属中旱生植物。苦豆子主要分布于西北方荒漠和半荒漠地区，在我国主要分布于华北、西北以及河南、。入药部位为种子，味苦、性寒。中医上主要治疗痢疾，胃痛，白带过多，湿疹，疮疖和顽癣。目前从苦豆子中提取分离及鉴定的生物碱共22种，其中有12种已确定结构。苦豆子总生物碱在其药理作用中起主要作用。

1苦豆子总生物碱的急性毒性试验和半数致死量（LD50）的测定1.1实验动物及饲养：小白鼠（昆明种），雌雄各半，购于内蒙古大学实验动物中心。体重18耀25g。雌雄分别饲养，每笼5只。小鼠自由采食及饮水，饲养温度18益耀25益，相对湿度40%耀70%，实验前于饲养室适应性饲养一周。1.2实验药物及器材1.2.1药物：饱和苦味酸溶液，苦豆子总生物碱，10%中性，梯度酒精、苏木素、伊红染液、石蜡、二甲苯、中性树脂胶、配制浓度为8%（5%苦豆子总生物碱+3%SDS）。1.2.2器材：剪子，镊子，刀片，广口瓶，小鼠灌胃器，电子天平，LeicaRM2230切片机，显微镜（奥林巴斯）1.3试验方法：预实验：昆明小鼠，灌胃给药，首先对预试验第1组2只给药500mg/kg，小鼠全死，给第2组2只给药50mg/kg，全未死，初步摸索出小鼠的死亡剂量，根据预试验结果，定有效灌药量为0.03mL，0.05mL，0.1mL，0.15mL，0.2mL和0.25mL，有效灌胃体积为0.5mL，生理盐水稀释。1.4苦豆子总碱半数致死量（LD50）的测定：试验方法：昆明小鼠雌雄各半，称重，剔除体重或健康状况不符合要求的的小鼠，随机分为7组每组10只。灌胃前8h禁食不禁水，按照剂量不同分为6个剂量组，根据预实验制定的灌胃量进行灌胃，最后一组为空白组，每只灌胃0.5mL生理盐水。灌胃给药一次，灌胃后不

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*通讯作者[8]胡素连，蒋晓煌，蒋孟良，等.用镇痛与刺激实验优选乳香最佳

北方药学2018年第15卷第6期

表2应用GCs的疾病分布（n=1300）

疾病种类肿瘤/癌症眼科疾病呼吸系统疾病耳鼻喉疾病皮肤病自身免疫病儿科疾病风湿性疾病感染其他

例数105376728528210472表3不同疾病中不合理表现形式（n=183）

不合理表现疗程不当联合用药不当给药剂量不当药物选择不当给药间隔不当无指征给药

总计

内科肿瘤

184933124

外科手术

36006952（4.00）1

内科非肿瘤

904842（3.23）138

总计63（4.84）17（1.31）53（4.08）4（0.31）

834180

（%）构成比

8.0828.925.546.5421.696.388.005.553.156.15

181确、用药过程中减量过快等。但GCs在妊娠中期合并胎膜早破

者、初发耳聋者及地塞米松在腹部大手术后的应用合理性存在争议。

为促进GCs合理应用，提出以下几点改进措施：淤谨遵用药原则：依据病情进行个体化给药；结合疾病特点及各种GCs适应症选择合适药物；只需短期治疗者（如术后水肿）不可长期用药，停药后病情易反复的需逐渐停药，疗程要足；避免用于妊娠期或哺乳期女性，儿童减少长效制剂应用，老年患者注意预防骨质疏松症[4]。于加强用药常识宣传：通过发放GCs安全用药宣传册、公示栏张贴海报、举行讲座等方式对患者及其家属进行用药教育，有效减少GCs不当应用。盂监测不良反应：服用GCs过程中，及时进行安全评估，对血脂、血糖、血压、骨密度等风险指

[5]

标加强监测，预防各种不良反应。榆加大监管力度：健全GCs合理使用管理制度，通过开展GCs合理用药培训，不定期调查GCs应用状况等方式监督并指导GCs合理使用。虞重视临床医师参与：临床医师通过参与查房、监测不良反应、定期对住院病历及门诊处方GCs使用情况进行点评等，促使GCs合理使用。

综上可知，严格把握GCs治疗适应症，合理制定治疗方案，提高GCs滥用危害意识，规范GCs使用行为，促使合理用药。参考文献[1]刘颖，张关敏，张艳华.某肿瘤专科医院住院患者糖皮质激素类药物使用情况分析[J].中国药学杂志，2014，49（3）：250-252.[2]卢协勤，王萍，蔡惠惠，等.我院2013年7耀12月糖皮质激素类药物使用分析[J].中国医药导报，2014，11（30）：92-97.[3]卫生部.糖皮质激素类药物临床应用指导原则[S].2011.[4]倪丹红，王萍，尹桃.某院糖皮质激素用药现况及合理性分析[J].中国药师，2014，17（8）：1356-1359.[5]李淑珍，杨静，宋超，等.我院2013年上半年糖皮质激素类药物临床使用分析[J].中国药房，2014，25（2）：113-115.

3讨论

我院常用GCs有吸入用布地奈德混悬液、注射用甲泼尼龙琥珀酸钠、醋酸曲安奈德注射液、地塞米松磷酸钠注射液等，主要用于治疗肿瘤、呼吸系统疾病、儿科疾病、感染等，大部分患者用药疗程臆5d。GCs不合理用药主要表现为疗程不当、联合用药不当、给药剂量不当、药物选择不当、给药间隔不当和无指征给药，其影响因素有入院病情危重、忽略禁忌症、相对适应症不明

（6.85）183（14.08）26（2.00）

20（1.54）

（上接142页）

表2Bliss法计算半数致死量统计表明。肾脏病理组织切片病理检查（见图3）肾小管腔内有大量红细胞渗出，肾小球细胞核凝集、细胞坏死，肾小管上皮不完整，细剂量对数剂动物数死亡数死亡百实验机回归机胞核固缩胞质透明。肝脏组织切片病理检查（图4）显示，肝细胞（mg/kg）（%）率单位率单位量（只）（只）分率肥大，多见肝细胞核凝集、固缩，肝细胞坏死、肝血窦充血变宽。

961.98231000---3.17443.3苦豆子生物碱毒性实验结果：统计给药后14d内各组动物

1602.2041103304.4763.9887

死亡数，使用Bliss法计算苦豆子总生物碱半数致死量。得到此

3202.5051104404.7475.0936

试验的回归方程y（Probit）=-4.1015+3.6705Log（D），计算出的

4802.6812107705.5245.7399

苦豆子总碱半数致死量LD50=301.75mg/kg；Feiller法校正的

02.8062109906.2816.1985

LD5095%的可信限=221.22~3.mg/kg；LD5=107.52mg/kg，

8002.90311010100---6.5542LD95=846.83mg/kg。

301.75mg/kg。试验发现苦豆子总碱急性毒性靶器官为肺脏、肝表1急性毒性试验死亡小白鼠数目

脏、肾脏和脑，对各个器官的损害程度不同。苦豆子总碱的毒性（只）苦参碱剂量mg/kg死亡数（只）死亡率（%）组别小鼠数

主要体现在神经毒性和对肺脏、肝脏和肾脏等主要解毒器官的

第1组109600损害。第2组10160330本次提取的苦豆子总碱半数致死量为LD50=301.75mg/kg，第3组10320440

主要靶器官是肺脏、肝脏、肾脏和脑。小鼠灌胃给予大量苦豆子

第4组10480770

总碱后，导致机体多器官的机能代谢障碍，小鼠多出现运动减

第5组100990

少、抽搐、发抖等特征，然后由于机能代谢紊乱而死亡。

第6组1080010100

参考文献

第7组10000[1]国家食品药品监督管理总局.药物单次给药毒性研究技术指导原则[Z]2014-5-13.4实验讨论

喻志芳.苦豆子的研究进展[J].天津药学，1998，10（1）：苦豆子总碱在其种子中含量很高，是苦豆子的主要生物活[2]杨家新，

性成分和药理活性成分。本试验得到苦豆子总碱半数致死量为43-461