维普资讯 http://www.cqvip.com 第２９卷第２期 质谱学报 Ｖ０１．２９ Ｎｏ．２ ２００８年３月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｍａｒ．２００８ ＧＣ／ＭＳ研究茶叶中拟除虫菊酯类农药残留的提取方法 王 翔，宋国新，胡耀铭 （复旦大学分析测试中心，上海２００４３３） 摘要：针对茶叶中拟除虫菊酯类农药残留的提取方法进行研究，比较了加水浸泡对农残提取的影响。结果 表明，加水浸泡的样品农残提取率反而降低，通过对样品净化淋洗剂种类和体积的优化选择，总结出一套简 便实用的前处理方法。茶叶不用水浸泡，直接用５Ｏ ｍＬ Ｖ（丙酮）：Ｖ（正己烷）一１：１的溶液超声提取，提 取液过活性炭柱，浓缩后再过Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱，用１５ ｍＬ Ｖ（正己烷）：Ｖ（乙酸乙酯）一２：１的溶液淋洗，浓缩后用 ＧＣ／ＭＳ法测定。回收率为８１ ～１２０ ，ＲＳＤ为２．２ ～７．８ ，检测限为０．００２￣０．Ｏ１ ｍｇ・ｋｇ＿。。 关键词：拟除虫菊酯；农药残留；茶叶；提取方法；ＧＣ／ＭＳ 中图分类号：０ ６５７．６３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４—２９９７（２００８）０２—９７—０４ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ Ｍｕｌｔｉ－Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｔｅａ ｂｙ ＧＣ／ＭＳ ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｇ，ＳＯＮＧ Ｇｕｏ－ｘｉｎ，ＨＵ Ｙａｏ—ｍｉｎｇ （Ｔｈｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００４３３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｍｕｌｔｉ—ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｆｒｏｍ ｔｅａ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄ— ｉｅｄ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｄｄｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｉｎｔｏ ｓａｍｐｌｅｓ ｂｅｆｏｒｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｅｘｔｒａｃ— ｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｈｉｇｈｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｓ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ａｄｄｉｎｇ ｗａｔｅｒ．Ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄｓ ｉｎ ｔｅａ ｉｓ ｒｅａｃｈｅｄ ｂｙ ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈｏｉｃｅｓ ａｎｄ ｖｏｌｕｍｅｓ ｏｆ ｅｌｕｔｉｎｇ ｓｏｌｖｅｎｔｓ．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｗａｔｅｒ ｉｍｍｅｒｓｉｎｇ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ５０ ｍＬ ｏｆ Ｖ（ｈｅｘａｎｅ）：Ｖ（ａｃｅｔｏｎｅ）一１：１，ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ｃｌｅａｎｉｎｇ ｕｐ ｗｉｔｈ ｃｏｌｕｍｎｓ ｏｆ ａｃｔｉｖａ— ｔｅｄ ｃａｒｂｏｎ ａｎｄ Ｆｌｏｒｉｓｉｌ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．１５ ｍＬ ｏｆ Ｖ（ｈｅｘａｎｅ）：Ｖ（ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）一２：１ ｗａｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｅｌｕｔｅ ｔｈｅ Ｆｌｏｒｉｓｉｌ ｃｏｌｕｍｎ，ｔｈｅｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＧＣ／ＭＳ．Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｒａｎｇｅ ｆｒｏｍ ８１％ｔｏ １２０ ，ＲＳＤｓ ａｒｅ ２．２ 一７．８ ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｒｅ ０．００２－ ０．０１ ｍｇ・ｋｇ＿。． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ；ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅ；ｔｅａ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ；ＧＣ／ＭＳ 拟除虫菊酯类农药因具有广谱、高效、低毒 重威胁人类健康，并直接影响我国茶产品的出 的优点，被广泛用于茶叶生产中的害虫防治，但 口，对此已引起相关方面的高度重视。特别是 如果使用不当造成茶产品中的农药高残留会严 ２００６年５月，日本实施的“肯定列表制度”将茶 收稿日期：２００７—０８—２７；修回１３期：２００７—１１—２０ ． 作者简介：王翔（１９８３￣），男（汉族），江苏泰兴人，硕士研究生。Ｅ－ｍａｉｌ：０６２０３７００１＠ｆｕｄａｎ．ｅｄｕ．ｃａ 通信作者：胡耀铭（１９６５￣），男（汉族），上海人，高级工程师，从事色谱质谱分析研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｍｈｕ＠ｆｕｄａｎ．ｅｄｕ．ｃａ 维普资讯 http://www.cqvip.com
９８ 质谱学报 第２９卷 叶的农残限量指标从８３项增加到２７６项，因此 茶叶中的农残检测是当前的一个研究热点。 正确的样品前处理是进行茶叶中农残检测 的关键，而样品提取率的高低直接影响到检测方 法的准确性。楼国柱等｜＿１。 比较了单一和混合溶 剂对茶叶农残提取的影响，认为用 （丙酮）：Ｖ （石油醚）一１：１的溶液提取效果最好；而日本 环境厅等口 认为，在有机溶剂提取前加水浸 泡有利于茶叶组织内农残的提取，但缺少提取方 面的比较数据。因此本工作拟对茶叶中拟除虫 菊酯类农残的提取进行研究，设计在加水浸泡与 无水情况下，用混合溶剂提取高农残茶样品，通 过优化Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱淋洗剂的种类和体积，总结出 一套简便实用的前处理方法。 ｌ 实验部分 １．１仪器与试剂 Ｆｏｃｕｓ－ＤＳＱ气相色谱一质谱联用仪：美国热 电公司产品；ＶＦ－５ｍｓ石英毛细管色谱柱（３０ １ＴＩ ×０．２５ ｍｍ，０．２５ Ｆｍ）；超声波振荡清洗仪 （ＨＳ６１５Ｏ）；食品粉碎机；氮吹浓缩仪（ＨＧＣ一 １２Ａ）；具塞玻璃层析柱（２５０ ｍｍ×１０ ｍｍ）；Ｋ—Ｄ 浓缩器。 正己烷、丙酮、乙酸乙酯和乙醚（农残级）；无 水硫酸钠（分析纯，６５０℃灼烧４ ｈ后冷却备 用）；Ｆｌｏｒｌｓｉｌ（分析纯，６２０℃灼烧４ ｈ后备用，使 用前１４０℃烘２ ｈ，趁热加５ 水火活）；活性炭 （用３．０ ｍｏｌ・Ｉ 盐酸浸泡过夜，蒸馏水洗涤至 中性，１２０℃烘干备用）。 农药标准品：六氯苯（内标）、联苯菊酯、氯氰 菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯，浓度为ｉ００ ｍｇ・ Ｌ～，购自农业部环境保护科研检测所。 １．２实验方法 １．２．１ 提取准确称取５．０ ｇ茶叶粉碎样品于 ｉ００ ｍＬ具塞三角瓶中，加入１５ ｍ１ Ｖ（正己烷） ： （丙酮）一１：１混合溶液，超声振荡１５ ｒａｉｎ， 重复提取３次，并用５ ｍＬ混合液清洗残渣，合 并提取液约５Ｏ ｍＬ。 １．２．２净化用活性炭柱和Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱分别去 除提取液中的色素和油脂。活性炭层析柱自下 而上依次填人少许脱脂棉、１ ｇ无水硫酸钠、２ ｇ 活性炭、２ ｇ无水硫酸钠，先用１Ｏ ｍＬ Ｖ（正己 烷）： （丙酮）＝＝＝１：１混合液预淋洗，弃去预淋 液，在液面近干时倒人提取液，最后再加入５ ｍＬ 正己烷洗脱，将洗脱液于Ｋ－Ｄ浓缩器上浓缩至 近１ ｍＬ，备用。Ｆｌｏｒｉｓｉｌ拄由下至上依次填入少 许脱脂棉、１ ｇ无水硫酸钠、４ ｇ Ｆｌｏｒｉｓｉｌ、２ ｇ无水 硫酸钠，同上先预淋洗层析柱，倒入上述备用的 浓缩液后，用１５ ｍＬ Ｖ（正己烷）：Ｖ（乙酸乙 酯）一２：１混合液以２ ｍＬ・ｍｉｎ 洗脱，洗脱 液Ｋ—Ｄ浓缩至近１ ｍＬ，加入２．０ Ｌ ０．１ ｇ・ Ｌ 六氯苯内标，待ＧＣ／ＭＳ测定。 １．２．３ ＧＣ／ＭＳ测定 载气：氦气（９９．９９ ）； 进样口：２８０℃；离子源（ＥＩ，７０ ｅＶ）：２３０℃；接 口温度：２５０℃；程序升温：６Ｏ℃保持１ ｍｉｎ，以 ３Ｏ℃・ｍｉｎ 升至１５０℃，再以１Ｏ℃・ｍｉｎ 升 至３００℃，保持１２ ｍｉｎ；不分流进样，进样量１．０ ＦＬ；全扫描方式检测；内标法定量。 ４种拟除虫菊酯类农药标准品总离子色谱 图示于图１，其中氯氰菊酯、氰戊菊酯分别有４ 个和２个同分异构体峰。 图１农药标准品总离子色谱图ＩＴＩＣ） １．联苯菊酯；２～５．氯氰菊酯； ６～７．氰戊菊酯；８．溴氰菊酯 Ｆｉｇ．１ ＴＩＣ ｏｆ ｔｈｅ ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ ｓｔａｎｄａｒｄｓ １．ｂｉｆｅｎｔｈｒｉｎ；２～５．ｃｙｐｅｎｍｅｔｈｒｉｎ， ６～７．ｆｅｎｖａｌｅｒａｔｅｌ ８．ｄｅｌｔａｍｅｔｈｒｉｎ ２结果与讨论 ２．１提取剂的优化 楼国柱等 。 比较了单一和混合溶剂对茶叶 农残提取的影响，得出用Ｖ（丙酮）：Ｖ（石油醚） 一１：１混合液提取的效果最好。而Ｏｇａｗａ 等 认为采用蒸馏水浸泡使茶叶细胞组织吸水 膨胀，有利于组织中残留的农药析出，但没有提 取方面的比较数据。因此，本实验设计用Ｖ（正 己烷）： （丙酮）一ｌ：ｌ混合液和Ｖ（正己烷）： 维普资讯 http://www.cqvip.com
第２期 王 翔等：ＧＣ／ＭＳ研究茶叶中拟除虫菊酯类农药残留的提取方法 ９９ Ｖ（乙酸乙酯）一１：１混合液作提取剂，在加水 浸泡与不加水两种情况下，分别提取茶叶样品中 的除虫菊酯类农残，比较它们的提取效率。 准确称取２０．０ ｇ粉碎均匀的高农残茶叶样 品，平均分成４组，分别加入Ａ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ２四 个具塞三角瓶中。Ｂ１、Ｂ２先加入１５ ｍＬ饱和食 盐水，浸泡１ ｈ。Ａ１、Ｂ１和Ａ２、Ｂ２分别加入５Ｏ 除提取液中的色素和油脂，过活性炭柱后的淋洗 液先浓缩再过Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱，可以提高Ｆｌｏｒｉｓｉｌ的 吸附效率，减少淋洗剂的用量。 ２．２．１ Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱条件优化 称取５．０ ｇ空白 茶叶粉碎样品，提取后过活性炭柱，Ｋ—Ｄ浓缩至 １．０ ｍＬ，加入１０．０肛Ｌ １００ ｍｇ・Ｌ 的贮备液， 配成１．０ ｍｇ・Ｌ 的加标基质。过Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱， ｍＬ Ｖ（正己烷）：Ｖ（丙酮）一１：１混合液和５Ｏ 用若干体积的不同淋洗剂淋洗柱子，浓缩后加内 ｍＬ Ｖ（正己烷）：Ｖ（乙酸乙酯）一１：１混合液， 按２．２．１提取。其中Ｂ组通过充分机械振荡， 以正己烷液一液萃取方式获得有机相。３次平行 样取平均值，所得结果列予表１。 表１ 不同提取剂农残提取效率对比表 Ｔａｂｌｅ １ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｌｅｓ ０ｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ 注；ＮＤ为未检出 在Ａ组中，Ａ１（正己烷／丙酮）比Ａ２（正己 烷／乙酸乙酯）的提取效率高，其原因是丙酮的极 性相对较强，相应增强了其对细胞的穿透力，因 此提取效率相对较高。而Ｂ组（加水）的提取效 率远低于Ａ组（不加水），与文献［３—４］报道的结 果不同，与所用溶剂的极性和溶剂与水的作用有 关。当向Ｂ组中加入Ｖ（正己烷）：Ｖ（丙酮）一１ ：１混合液时，提取液即分为两层，上层为正己 烷，下层为丙酮／水混合相。尽管加水使茶叶组 织膨胀，但却阻止了正己烷与叶片的直接接触， 只能先通过丙酮提取，再分配到正己烷中，而丙 酮／水混合相的极性大，水与农药不互溶，致使其 提取不完全；而且农药在液液分配中会残留一部 分在丙酮／水混合相中，使其提取率降低。而Ｂ２ 中乙酸乙酯和正己烷与水都不互溶，水层直接隔 绝了有机相与茶叶的接触，因此其提取率低。实 验结果表明，用Ｖ（正己烷）：Ｖ（丙酮）一１：１ 混合液不加水浸泡，直接提取农残的效果最好。 ２．２净化步骤的优化 实验设计分别用活性炭柱和Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱去 标进样分析。 ２．２．２淋洗剂优化 由文献［３，６—７］可知，单一 溶剂淋洗的效果较差，而拟除虫菊酯类农药是弱 极性物质，且实验过程中为达到环保要求尽量避 免使用毒性大的溶剂，因此选用下列混合溶剂： Ｖ（正己烷）：Ｖ（丙酮）一４：１、Ｖ（正己烷）：Ｖ （乙酸乙酯）＝４：１、Ｖ（正己烷）：Ｖ（乙醚）一 １：１、Ｖ（正己烷）：Ｖ（丙酮）：Ｖ（乙醚）一３： １：１。淋洗体积选为２５ ｍＬ，实验结果示予 图２。 ‘ １・ ０． ０． ０． ０． ０． 联苯菊脂氯氰菊脂氰戊菊脂溴氰菊脂 园止己烷／ 利 国止己烷／乙醚 园正己烷／乙酸乙酯 圈止己烷／ 酮／乙醚 图２不同淋洗剂淋洗效率对比图 Ｆｉｇ．２ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｌｕｔａｎｔｓ 通过实验发现，Ｖ（正己烷）：Ｖ（乙酸乙酯） 一４：１淋洗效率最高。在此基础上再优化体积 比，分别选取体积比为２：１、４：１、９：１混合液 淋洗柱子，由图３可知，Ｖ（正己烷）：Ｖ（乙酸乙 酯）一２：１的淋洗效率最高。取１．０ ｍＬ １ ｍｇ ・Ｌ 加标基质过Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱，用２５ ｍｌ Ｖ（正己 烷）：Ｖ（乙酸乙酯）：２：１混合液淋洗，每５ ｍＬ收集一管，在氮吹仪上浓缩至近１ ｍＬ，加入 ２．０ Ｌ内标，ＧＣ／ＭＳ测定，检测数据列于表２， 只需１５ ｍＬ混合溶液即可把目标物全部淋洗 下来。 ２．３回收率与检测限 准确称取５．０ ｇ空白茶叶粉碎样品，吸取 １００ ｍｇ・Ｌ 贮备液分别配成０．０２和０．２ ｍｇ・ ｋｇ 的加标样品进行回收率实验。按以上最优 维普资讯 http://www.cqvip.com
１００ 质谱学报 第２９卷 化条件提取、净化、检测样品，每个浓度平行测定 １．Ｏ ５次，结果列于表３。 表２淋洗体积曲线数据 Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ ｅｌｕｔｉｎｇ ａｍｒｖｅｓ 丁 ０．８ ０．６ ０．４ ０．２ ０．Ｏ 联苯菊脂氯氰菊脂氰戊菊脂溴氰菊脂 圈 ：Ｖ＝９：１ 囡 ：Ｖ＝２：ｌ ｆ ：Ｖ＝４：ｌ 图３正已烷／乙酸乙酯不同体积比的淋洗效率图 Ｆｉｇ．３ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｖｏｌｕｍｅ ｒａｔｉｏｓ ｏｆ ｈｅｘａｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ 表３添加回收率（，ｌ＝５）与检测限 Ｔａｂｌｅ ３ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（，ｌ＝５）ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ ］ ］ ］ ３ 结 论 通过实验发现，茶叶经加水浸泡后，用、， （正己烷）：Ｖ（丙酮）＝１：１的混合液超声提 取，不仅步骤增多，操作繁琐，而且提取效率也不 如溶剂直接提取，这与文献报道的结果不一致， ｒａｐｈｙ Ａ，１９９６，７５４：３６７—３９５ 楼国柱，徐倩，白晓荣，等．不同提取剂对茶叶中 多种农药残留检测影响的研究［Ｊ］．食品科学， ２００４，２５（１２）：１６５—１６８． 李拥军，黄志强，戴华，等．茶叶中多种拟除虫菊 酯类农药残留量的气相色谱一质谱测定［Ｊ］．分析化 学，２００２，７（３０）：８６５—８６８． ＯＧＡＷＡ Ｍ，ＳＡＫＡＩ Ｔ，（）ＨＫＵＭＡ Ｋ，ｅｔ ａ１． 可能是水阻止了有机溶剂与茶叶的直接接触，不 利于菊酯类农残的提取。本实验将茶样品用 （正己烷）：Ｖ（丙酮）＝：：１：１的混合液直接超声 提取，提取液再分别过活性炭柱和Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱除 去其中的色素和油脂，只需１５ ｍＩ Ｖ（正己烷） Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ＧＰＣ ｃｌｅａｎ－ｕｐ ａｎｄ ＧＣ／ ＭＳ－ＳＩＭ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｏｏｄ Ｈｙｇｉｅｎｉｃ Ｓｏｃｉｅ— ｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ，１９９７，３８（２）：４９－６１． ：Ｖ（乙酸乙酯）一２：１的？昆合液淋洗Ｆｌｏｒｉｓｉｌ 柱，即可将农药全部淋洗下来。回收率为８１ ～朱坚，汪国权，陈正夫，等．食品中危害残留物的 １２０ ，ＲＳＤ为２．２ ～７．８ ９／６，检测限为０．００２ 现代分析技术［Ｍ］．上海：同济大学出版社，２００３： ２００—２１０． ～Ｏ．０１ ｍｇ・ｋｇ＿。，可以很好地满足当前茶叶中 除虫菊酯类农药残留的检测要求。 参考文献： ［１］ＣＨＥＮ Ｚ Ｍ，ＷＡＮＧ Ｙ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ— ｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｙｒｅｔｈｒｉｎ ａｎｄ 林竹光，金珍，刘勇，等．ＧＣ—ＮＣＩ—ＭＳ分析茶 叶中１７种有机氯和拟除虫菊酯农药残留［Ｊ］．高 等学校化学学报，２００５，２６（１２）：２ ２１８－２ ２２２． 李胜清，田 华．固相萃取一气相色谱法用于蔬菜中 拟除虫菊酯类农药残留的检测研究［Ｊ］．分析科学 学报，２００５，２１（３）：２８９—２９１． ｐｙｒｅｔｈｒｏｉｄ ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｃｒｏｐｓ，ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓａｍｐｌｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ—
