第１２卷第６期 ２０１３年】１月 杭州师范大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖｏ１．１２ Ｎｏ．６ ＮＯＶ．２Ｏ１３ 温度对相同引种地三个秋茄居群遗传多样性的影响 杨 娟 ，马小伟 ，章宏琼 ，周 云 ，宋佳楠 ，朱忆思梦 ，张洪勤 ，施孟如。 （１．杭州师范大学发育与再生研究所，浙江杭州３１００３６；２．温州医科大学仁济学院．浙江温州３２５０３５； ３．温州医科大学生物学实验教学中心，浙江温州３２５０３５） 摘要：秋茄是世界分布最北的红树植物，研究温度对其遗传多样性的影响有助于阐明其抗冻机制．文章 同时应用ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ分子标记技术，对３个不同纬度地区秋茄居群的遗传多样性和遗传分化进行分析，根 据ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ数据计算遗传距离并进行聚类分析．２种方法均显示３个居群分为２大支：西门岛和象山港两 居群之间遗传距离最小，两者之间的遗传一致度最大，首先聚为一类；漳江口和象山港居群之间的遗传距离最 大，两者之间的遗传一致度最小，因此单独为一支．由于温度的原因对引种的秋茄进行了筛选，导致遗传多样性 减少． 关键词：秋茄；ＲＡＰＤ；ＩＳＳＲ；遗传多样性 中图分类号：Ｑ９４８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７４—２３２Ｘ（２０１３）０６ ０５４４ ０６ 红树林是处于亚热带、热带海洋与陆地过渡带的特殊生态系统，是海岸带的生态关键区，具有抵抗海 啸和台风、调节区域气候、维护生物多样性等重要生态功能＿１］．秋茄（Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅ１）是中国分布最广的 常见红树植物，其天然分布最北至福建福鼎市，人工种植最北至宁波象山港，全世界最北分布的红树植物 也是秋茄 ．国内外学者对秋茄在生态学 、生理学 ］、生物化学 、药物学 引、耐盐机理 、分子 。 等 多个方面开展了大量研究．林盛昌等口 采用月最低温度这一指标，以温差２℃划分，并结合野外考察资 料，把中国红树植物分为７个耐寒等级序列，其中秋茄自然分布纬度最高，具有极强的适应能力，为最耐寒 的种类．但向高纬度移植时经常发生的极端低温对其成功越冬产生了威胁口 ．对此，各有关国家开展了各 方面研究，但大多集中在生物化学、生态学、生理学ｌｌ 等领域，而关于分子生物学的研究也十分必要． 本研究选择秋茄作为研究对象，采用随机扩增多态性（Ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ＤＮＡ， ＲＡＰＤ）和简单序列重复间区（ｉｎｔｅｒ—ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ，ＩＳＳＲ）分子标记技术，探讨温度对来源于同一 地区３个秋茄居群的遗传多样性和遗传分化的影响，为高纬度选育抗冻秋茄品种提供技术理论基础． １ 材料与方法 １．１样品的采集与处理 秋茄叶片采自厦门漳江口、温州西门岛和宁波象山港（表１）．在选定的３个不同纬度居群中每隔５～ １０ ｍ选择长势良好的植株，每树采集当年生的展开完全的幼嫩叶片（倒二叶）１０片，用棉花蘸取足够的水 收稿日期：２Ｏ１３－０５—２２ 通倍作者：施孟如（１９７９），女，实验师，主要从事蛋白质组学和分子生物学研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｒｅａｍｌｉｋｅ００７＠１６３．ＣＯＮ 第６期 杨娟，等：温度对相同引种地三个秋茄居群遗传多样性的影响 ５４５ 分包住茎枝条的基部，保持叶片新鲜不变质，迅速放冰上保存，处理待测，并于一２Ｏ℃冰箱内保存． 表１取样地基本情况 Ｔａｂ．１ Ｂａｓｉｃ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ａｒｅａ １．２主要实验仪器及试剂 ＮＡＮＯＤＲｏＰ ２０００为Ｔｈｏｒｍａｌ公司产品；Ｇｅｌ Ｄｏｃ电泳凝胶成像系统，ＤＴＣ２００ＰＣＲ仪均为Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司 产品；ＵＶ ２８００紫外可见分光光度计为上海尤尼柯公司产品；５４１７Ｒ低温离心机为Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ产品． ＩＳＳＲ引物、ＲＡＰＤ引物、１ Ｋｂｐ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ Ｍａｒｋｅｒ购自上海捷瑞生物公司，Ｔａｑ酶购自大连宝 生物． １．３方法 秋茄叶片总ＤＮＡ采用改良后的ＣＴＡＢ法口 提取，获得的ＤＮＡ由ＮＡＮＯＤＲＯＰ ２０００测定其浓度及 纯度．根据基因组ＤＮＡ浓度值将样品稀释至２０ ｎｇ／￣Ｌ用于ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ分析． ＲＡＰＤ—ＰＣＲ反应对１５个ＲＡＰＤ 引物进行筛选，从中选取８个扩增条 表２ ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ引物序列和最佳退火温度 Ｔａｂ．２ Ｐｒｉｍｅｒｓ ａｎｄ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｏｒ ＲＡＰＤ ａｎｄ ＩＳＳＲ 带清晰、重复性稳定的引物用于 ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ＲＡＰＩ）．ＰＣＲ的扩增（表２）．扩增体系 为每２５ Ｌ反应体积含：２．５ Ｌ １０× ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｍｇ ｆｒｅｅ）、２．０／，Ｌ ｄＮＴＰ ｍｉｘｔｕｒｅ（２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）、１．５ ／，Ｌ ＭｇＣ１２（２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）、２．０ Ｌ ｐｒｉｍｅ（１０ ｂ￣ｍｏｌ／Ｉ ），１．０ ｐ．Ｌ ＤＮＡ（３０ ～５０ ｎｇ），１．５ ｕＬ ＴａＫａＲａ Ｔａｑ（５ Ｕ／ｕＬ），加ｄｄＨ Ｏ至２５ Ｌ，用漩涡 混合器对所加的各组分进行混合；扩 增程序：９４℃预变性５ ｍｉｎ，之后进行 ４０个循环，每个循环包括９４℃变性ｌ ｍｉｎ、３６℃退火１ ｍｉｎ，７２℃延伸２ ｍｉｎ，最后于７２℃再延伸７ ｍｉｎ．将扩 增产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定． ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应对１５个ＩＳＳＲ引 物进行了筛选，从中选取９个扩增条 带清晰、重复性较好的引物用于ＰＣＲ 扩增（表２）．扩增体系为每２５ Ｌ反 应体积含：２．５／，Ｌ １０×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｍｇ ｆｒｅｅ）、２．０ Ｌ ｄＮＴＰ ｍｉｘｔｕｒｅ（２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ）、１．５ Ｌ ＭｇＣｌｚ（２５ ｍｍｏｌ／Ｌ）、２．０“Ｌ ｐｒｉｍｅ（１０ ｔｚｍｏｌ／Ｌ），１．０ ｔｚＬ ＤＮＡ（３０￣５０ ｎｇ），１ Ｕ ＴａＫａＲａ Ｔａｑ（５ Ｕ／ｕＬ），加ｄｄＨ２Ｏ 至２５ Ｌ；扩增程序：９４℃预变性５ ｍｉｎ，之后进行４５个循环，每个循环包括９４℃变性４５ ｓ、５２℃退火４５ Ｓ，７２℃延伸９０ Ｓ，最后于７２℃再延伸７ ｍｉｎ．将扩增产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定． 重复扩增和电泳２次，选取清晰的条带进行统计分析．电泳图谱的每条带ＤＮＡ片段均为１个分子标 ５４６ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２０１３钲 记代表１个引物的结合位点，根据分子标记的迁移率及有无来统计所有的二元数据．有带显性记为“ｌ”， 无带隐性记为“０”．ＰｏｐＧｅｎ３２软件计算各数据，并根据Ｎｅｉ’Ｓ遗传距离进行ＵＰＧＭＡ聚类分析，构建系 统树． ２ 实验结果 ２．１ 不同纬度秋茄居群的遗传多样性 ２．１．１ ＲＡＰＤ实验结果的分析 用筛选出的８个ＲＡＰＤ随 机引物在３个纬度秋茄居群２４ 个个体间扩增，得到的条带为 ０．３～３ ｋｂ．共扩增出１ １５２个 条带，多态性条带为３Ｏ条，图１ 为引物￥５８的扩增结果．根据 ＲＡＰＤ扩增结果计算，３个居群 的多态位点百分率在１７．４６％～ ５３．９７ ，平均值为３９．１５ （表 ３）．每个位点的平均等位基因数 为１．３４６ １±０．４６０ ０．Ｎｅｉ’Ｓ基因 Ｍａｒｋｅｒ：１００ ｂｐ Ｐｌｕｓ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ；泳道１～８：象山港居群８株不同秋茄样品；泳道９～ １６：西门岛居群８株不同秋茄样品；泳道１７～２４：漳江口居群８株不同秋茄样品． 多样性指数（Ｈ）是衡量群体遗 图１ ＲＡＰＤ引物￥５８的扩增结果 传多样性的指标．３个居群的Ｈ Ｆｉｇ．１ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ￥５８ 指数为０．０７５ ８～０．２２６ ５，总基 因多样度（Ｈｔ）和居群内基因多样度（Ｈｓ）分别为０．２５５ ６和０．１６６ ８．计算基因分化系数（Ｇｓｔ）为０．３４７ ４， 其中居群间的遗传变异占总的遗传变异的３４．７４ ，居群内的遗传变异占总变异的６５．２６ ，表明居群内 存在较高的遗传分化．３个居群之间的基因流（Ｎｍ）为１．２７６ ６，表明温秋茄居群间的基因交流较高．３个 居群的Ｓｈａｎｎｏｎ’Ｓ信息指数（ ）为０．１０８ ７～０．３２７ ６，平均值为０．２９０ ９，居群问的 指数为０．３２８ １（表 ３）．３个居群中，漳江口居群表现出相对较高的遗传多样性，象山港居群和西门岛居群表现出较低的遗传 多样性． 表３ ＲＡＰＤ标记的秋茄３个居群的遗传多样性 ＾ｊ＾Ｚ； Ｔａｂ．３ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉ㈣ ｏｎｓ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｐｏｐｕｌａｔｉ㈣ 枷湖 ｏｎｓ ｏｆ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｂｙ ＲＡＰＤ ２．１．２ ＩＳＳＲ实验结果的分析 ９个ＩＳＳＲ随机引物扩增３个秋茄居群共２４个个体．扩增的条带为０．１５～２．２ ｋｂ，共扩增出１ ３６８个条 带，多态性条带为２２条．图２为引物ＢＷＯ９４８１ＨＡＰ扩增结果．３个居群的多态位点百分率为２９．８２ ～ ５４．３９ ，平均值为４１。５２ ，ｏ４（表４）．每个位点的平均等位基因数为１．４１５ ２±０．４４４ ４．本实验中，３个居群 的Ｈ指数为０．０９６ ２～Ｏ．２４５ ３，总基因多样度和居群内基因多样度分别为０．２３０ ０和０．１７１ ７．基因分化 第６期 杨娟，等：温度对相同引种地三个秋茄居群遗传多样性的影响 ５４７ 系数为０．２５３ ５，其中居群间的 遗传变异占总遗传变异的 ２５．３５ ，居群内的遗传变异占 总变异的７４．６５ ９／６，表明居群内 存在较高的遗传分化．３个居群 之间的基因流为１．６２２ ８，表明 温秋茄居群问的基因交流较高． ３个居群的 指数为０．１４５ ０～ ０．３４７ ４，平均值为０．２４７ ２，居 群间的Ｊ指数为０．３４９ ５．３个 居群中，漳江口居群表现出较高 的遗传多样性，象山港居群和西 Ｍａｒｋｅｒ：ｉ００ ｂｐ Ｐｌｕｓ ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ；泳道１～８：象山港居群８株不同秋茄样品；泳道９～ 门岛居群表现出较低的遗传多 果一致． １ ６：西门岛居群８株不同秋茄样品；泳道１ ７～２４：漳江口居群８株不同秋茄样品． 图２ ＩＳＳＲ引物ＢＷ０９４８１ＨＡＰ的扩增结果 Ｆｉｇ．２ ＩＳＳＲ・ＰＣＲ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒ ＢＷ０９４８１ＨＡＰ 样性，此结果与ＲＡＰＤ实验结 表４ ＩＳＳＲ标记的秋茄３个居群的遗传多样性 Ｔａｂ．４ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｂｙ ＩＳＳＲ ２．２遗传相似性分析 遗传分化指数只能对居群分化的程度作出 评价，却不能判定居群间相互关系的远近，而遗 传相似系数和遗传距离的度量则可以说明每个 居群间彼此关系的远近．用ｐｏｐｇｅｎｅ３２软件分 咖 瑚㈣粼珈㈣姗伽 枷啪 ，，＾ １Ｊ１１ｌ 表５ ＲＡＰＤ标记的秋茄居群间的Ｎｅｉ’Ｓ无偏差遗传距离 （对角线以下）及遗传相似系数（对角线以上） Ｔａｂ．５ Ｎｅｉ’Ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏｎａ１）ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ａｂｏｖｅ ｄｉａｇｏｎａ１）ｂｙ ＲＡＰＤ 析ＲＡＰＤ与ＩＳＳＲ实验结果，计算秋茄居群问 的Ｎｅｉ’Ｓ无偏差遗传距离（Ｄ）和遗传一致度． 表５为根据ＲＡＰＤ结果计算所得秋茄居群 问的Ｎｅｉ’Ｓ无偏差遗传距离（Ｄ）和遗传一致度． 结果显示：３个秋茄居群问的Ｎｅｉ’Ｓ无偏差遗传 距离在０．０１４ ６～０．１４０ ８；其中西门岛和象山港两居群 之间遗传距离最小（ｏ．０１４ ６），两者之间的遗传一致度 最大（０．９８５ ５）；漳江口和西门岛之问的遗传距离最大 象山港居群 西门岛居群 （Ｏ，１４０ ８），两者之间的遗传一致度最小（Ｏ．８６８ ６）．依 据Ｎｅｉ’Ｓ的遗传距离对不同居群进行ＵＰＧＭＡ聚类，分 漳江臼居群 图３ ＲＡＰＤ标记的秋茄居群间 析结果（图３）表明：３个居群分为２大支，象山港与西 门岛两个居群的遗传距离最小，首先聚为一类；漳江口 居群与其它居群遗传距离最远，单独为一支． Ｎｅｉ’Ｓ无偏差的ＵＰＧＭＡ聚类图 Ｆｉｇ．３ Ｎｅｉ’Ｓ Ｕｎｂｉａｓｅｄ Ｍｅａｓｕｒｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｄｅｎｇｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂｙ ＲＡＰＤ ５４８ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２０１３ ＩＳＳＲ结果用ｐｏｐｇｅｎｅ３２软件计算秋茄居群间的Ｎｅｉ’Ｓ无偏差遗传距离（Ｄ）和遗传一致度．由表６结 果可知：３个秋茄居群间的Ｎｅｉ’Ｓ无偏差遗传距离在０．０６９ ３～０．１３７ ３；其中西门岛和象山港两居群之间 遗传距离最小（０．０６９ ３），两者之间的遗传一致度最大（０．９３３ １）；漳江ＶＩ和象山港之间的遗传距离最大 （０．１３７ ３），两者之间的遗传一致度最小（０．８７１ ７）．依据Ｎｅｉ’ｓ的遗传距离对不同居群进行ＵＰＧＭＡ聚类 分析，结果表明：３个居群分为２大支，象山港与西门岛两个居群的遗传距离最小，首先聚为一类；漳江口 居群与其它居群遗传距离最远，单独为一支（图４）． 表６ ＩＳＳＲ标记的秋茄居群问的Ｎｅｉ’ｓ无偏差遗传距离 （对角线以下）及遗传相似系数（对角线以上） Ｔａｂ．６ Ｎｅｉ’Ｓ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ（ｂｅｌｏｗ ｄｉａｇｏｎａ１）ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ（ａｂｏｖｅ ｄｉａｇｏｎａ１）ｂｙ ＩＳＳＲ 象山港居群 西门岛居群 漳江口居群 图４ ＩＳＳＲ标记的不同纬度秋茄居群间 Ｎｅｉ’ｓ无偏差的ＵＰＧＭＡ聚类图 Ｆｉｇ．４ Ｎｅｉ’ｓ Ｕｎｂｉａｓｅｄ Ｍｅａｓｕｒｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｄｅｎｇｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｂｙ １ＳＳＲ ３ 讨 论 遗传多样性的产生是由于遗传信息在外界或内在因素作用下，在复制过程中出现差错（如ＤＮＡ片段 的缺失、倒位、转座或易位等），从而导致了各种不同的遗传变异．植物居群遗传变异的分布与该物种的地 理分布情形、生态特征有关｜１ ，植物群体遗传多样性水平表明了一个物种在特定环境中基因的丰富程 度，是物种适应环境和遗传进化的基础． 物种的遗传多样性水平可以为其现状和保护价值的评估以及迁地保护提供非常重要的信息．本实验 结果表明３个居群内存在较高的遗传分化．而居群的遗传结构从一定意义上说是基因流和遗传漂变两种 力量相互作用的结果．居群间存在的基因流的强弱对群体遗传分化具有重要影响，当Ｎ ＞１时，基因流 能发挥其均质化作用，可防止由遗传漂变引起的居群间的遗传分化；如果Ｎｍ％ｌ，基因流成为遗传分化的 主要原因，低水平的基因流可能造成群体对局部生态环境的适应，进而促使群体间的遗传隔离，导致种群 间明显的遗传分化．植物居群间的基因流是借助于花粉、种子、孢子、植株个体以及其他携带遗传物质的物 体为媒介进行的，其中花粉和种子扩散是自然植物种群最主要的基因流．而地理隔离是阻止花粉和种子扩 散等基因流的最主要因素．本研究中居群间的Ｎｍ均远大于１，可能是不同居群地理间隔不大，尤其是西 门岛居群与象山港居群从漳江口居群引种，所以不同居群间发生基因交流的频率较高．加上本实验采样地 的，从而造成种群间的分异不明显． 多态位点百分率可以作为遗传多样性高低的指标［１引．本研究ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ分析结果均显示，３个 居群的多态位点百分率依次为漳江口居群＞西门岛居群＞象山港居群，表明３个居群中，漳江口居群具有 较高的遗传多样度．秋茄基因组的多样性是其广泛适应性的决定因素，许多研究表明，低温是红树植 物向高纬度分布的重要因子口 ，秋茄在高纬度引种过程中，主要的环境制约因子是温度，特别是最低月均 温．而本研究所采用的西门岛及象山港秋茄样品均由漳江口引种，由于三地纬度及平均温度等自然环境条 件差异较大，其居群经自然选择，不适应低温秋茄植株被淘汰，而适应低温的秋茄保留下来并产生了相应 的适应性．聚类分析结果表明：３个居群分为２大支，西门岛和象山港两居群首先聚为一类；漳江口居群单 独为一支．实验结果符合３个秋茄居群的地理分布． 本研究结果表明，向更高纬度地区引种红树植物时可选择与抗冻秋茄遗传关系和生理特性接近的树 种．由于温度的影响，同地引种的秋茄在遗传多样性上已经发生了一定的变化，生产在温度较低地方的秋 茄居群遗传多样性更小，但同时为低纬度引种筛选出有着优良遗传基因的品种． 第６期 参考文献： 杨娟，等：温度对相同引种地三个秋茄居群遗传多样性的影响 ５４９ ［１］Ｎａｇｅｌｋｅｒｋｅｎ Ｉ，Ｂｌａｂｅｒ Ｓ Ｊ Ｍ，Ｂｏｕｉｌｌｏｎ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｈａｂｉｔａｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅｓ ｆｏｒ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌ ａｎｄ ｍａｒｉｎｅ ｆａｕｎａ：ａ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］． Ａｑｕａｔｉｃ Ｂｏｔａｎｙ，２００８，８９（２）：１５５～１８５． Ｅ２３仇建标。黄丽，陈少波，等．强潮差海域秋茄生长的宜林ｌ临界线［Ｊ］．应用生态学报，２０１０，２１（５）：１２５２—１２５７． ［３］Ｃｈｅｎ Ｇ Ｚ，Ｍａｏ Ｓ Ｙ，Ｔａｍｅ Ｎ Ｆ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ ｏｎ ｙｏｕｎｇ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｐｌａｎｔｓ ｇｒｏｗｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ，ｌ９９５，２９５：２６３—２７３． ［４］Ｂａｎｄａｒａｎａｙａｋｅ Ｗ Ｍ．Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｕｓｅｓ ｏｆｍａｎｇｒｏｖｅｓ［Ｊ￣．Ｍａｎｇｒｏｖｅｓ ａｎｄ Ｓａｌｔ Ｍａｒｓｈｅｓ，１９９８，２（３）：１３３—１４８． Ｃ５２王文卿，林鹏．红树植物体内元素分布特点与抗盐机理口］．林业科学，２００３，３９（４）：３０—３６． ［６］叶庆华，吴韩志，彭兴跃，等．用流式细胞仪研究秋茄叶肉细胞大小和叶绿素含量与海水盐度的关系ＥＪ３，海洋科学，２００３，２７（８）：６７—７１． ［７］Ｈｕａｎｇ Ｗ，Ｆａｎｇ Ｘ Ｄ，Ｌｉ Ｇ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓａｌｔ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ［Ｊ］．Ｂｉｏｌｏｇｉａ Ｐｌａｎｔａ— ｒｕｍ，２００３，４７（４）：５０１—５０７． Ｅ８３ Ｋｈａｎ Ｎ １，Ｓｕｗａ Ｒ，Ｈａｇｉｈａｒａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｈｏｔｏｎ ｆｌｕｘ ｄｅｎｓｉｔｙ ｉｎ ａ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｓｔａｎｄ ｏｆ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ（Ｉ ．） Ｄｒｕｃｅ［Ｊ］．Ｊ Ｆｏｒ Ｒｅｓ，２００４，９：２０５—２１０． ［９２陈鹭真，王文卿，林鹏．潮汐淹水时间对秋茄幼苗生长的影响ＥＪ］．海洋学报，２００５，２７（２）：１４１—１４７． ［１Ｏ］Ｋｈａｎ Ｎ Ｉ，Ｓｕｗａ Ｒ，Ｈａｇｉｈａｒａ Ａ，ｅｔ ｎｚ．Ａｌｌｏｍｅｔｒｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｆｏｒ ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ ａｂｏｖｅｇｒｏｕｎｄ ｐｈｙｔｏｍａｓｓ ａｎｄ ｌｅａｆ ａｒｅａ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ（Ｉ ．）Ｄｒｕｅｅ ｔｒｅｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｎｋｏ Ｗｅｔｌａｎｄ，Ｏｋｉｎａｗａ Ｉｓｌａｎｄ，Ｊａｐａｎ￣Ｊ］．Ｔｒｅｅｓ，２００５，Ｉ９：２６６—２７２． ［１１］杨盛昌，林鹏．潮滩红树植物抗低温适应的生态学研究＿Ｊ］．植物生态学报，１９９８，２２（１）：６０—６７． ［１２］陈鹭真，王文卿，张宜辉，等．２００８年南方低温对我国红树植物的破坏作用［Ｊ］．植物生态学报，２０１０，３４（２）：１８６—１９４． ［１３］周涵韬，林鹏．中国红树科７种红树植物遗传多样性分析厂Ｊ］．水生生物学报，２００１，２５（４）：３６２—３６９． ［１４］Ｒｏｇｅｒｓ Ｏ ｓ，Ｂｅｎｄｉｅｈ Ａ Ｊ．Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＤＮＡ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ，ｐｌａｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ［Ｍ］／／Ｇｅｌｖｉｎ Ｓ Ｂ，Ｓｃｈｉｌｐｅ Ｒ Ａ，Ｖｅｒｎａ Ｄ Ｓ．Ｐｌａｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉ～ ｏｌｏｇｙ ｍａｎｕａ１．Ｄｏｒｄｅｃｈｔ：Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｅｒｓ，１９８８：ｌ一１Ｏ． ［１５］Ｌｏｖｅｌｅｓｓ Ｍ Ｄ，Ｈａｍｒｉｃｋ Ｊ Ｉ ．Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｅｃｏｌ Ｓｙｓｔ，１９８４，１５：６５—９５． ［１６］张文彪，金则新，李均敏．不同生境夏蜡梅群体遗传多样性的ＲＡＰＤ分析［Ｊ］．植物研究，２００７，２７（３）：３１３． ［１７］林鹏．红树林［Ｍ］．北京：海洋出版社，１９８４：ｌ＿１０４． Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｈｒｅｅ Ｋａｎｄｅｌｉａ Ｃａｎｄｅｌ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｓｙｍｐａｔｒｉｃ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ Ｓｉｔｅ ＹＡＮＧ Ｊｕａｎ ，ＭＡ Ｘｉａｏｗｅｉ ，ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇｑｉｏｎｇ ，ＺＨＯＵ Ｙｕｎ ，ＳＯＮＧ Ｊｉａｎａｎ ， ＺＨＵ Ｙｉｓｉｍｅｎｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇｑｉｎ ，ＳＨＩ Ｍｅｎｇｒｕ。 （１．Ｉｎｓｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｒｅｎｊｉ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ ３２５０３５，Ｃｈｉｎａ；３，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｅａｃｈｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｅｎｚｈｏｕ ３２５０３５，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｉｓ ｔｈｅ ｎｏｒｔｈｅｒｎｍｏｓｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｎｇｒｏｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｒｅｅ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｙｍｐａｔｒｉｃ ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｓｉｔｅ ｉｓ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏ ｃｌａｒｉｆｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｆｒｅｅｚｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．ＲＡＰＤ ａｎｄ ＩＳＳＲ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌａｔｉｔｕｄｅｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ａｎｄ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄａｔａ ｏｆ ＲＡＰＤ ａｎｄ ＩＳＳＲ．Ｂｏｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｓｅ ｔｈｒｅｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ．Ｘｉｍｅｎ Ｉｓｌａｎｄ ａｎｄ Ｘｉａｎｇｓｈａｎｇａｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｏｎｅ ｇｒｏｕｐ，ｂｅｃａｕｓｅ ｔｈｅ ｓｍａｌｌｅｓｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｍ．Ｚｈａｎｇｊｉａｎｇｋｏｕ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ａ ｇｒｏｕｐ，ｂｅｃａｕｓｅ ｔｈｅ ｌａｒｇｅｓｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｉｎｉｍｕｍ ｇｅｎｅｔｉｃ ｉａｅｎｔｉｔｙ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｚｈａｎｇｊｉａｎｇｋｏｕ ａｎｄ Ｘｉａｎｇｓｈａｎｇａｎｇ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ ｒｅａｓｏｎ ｗｈｙ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｄｒｏｐｓ ｏｆｆ ｉｓ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｆａｌｌ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｋａｎｄｅｌｉａ ｃａｎｄｅｌ；Ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ＤＮＡ；ｉｎｔｅｒ—ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
