a-羟丁酸脱氢酶(a-HBDH)操作规程(SOP)

一、用途

本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中α－羟丁酸脱氢酶（α－HBDH）的活性。 二、临床意义 （一）概述

α－羟丁酸脱氢酶（α－HBDH），酶编号为EC 1.1.2.30。主要来源于心肌、肾和红细胞。其活性表示LDH中能利用α－羟丁酸为反应基质的酶活性，主要为LDH1和LDH2的活性。 （二）临床意义

血清а－羟丁酸测定主要用于酮症酸中毒的鉴别诊断及跟踪监护。同时还可用于心肌梗死、肝脏实质细胞病变、活动性风湿性心肌炎、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血等疾病的辅助诊断。 三、检验原理

α-酮丁酸＋NADH＋H

+

HBDHα-羟丁酸＋NAD

+

NADH的氧化速率与样品中α－HBDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的下降速率(－△A／min)，即可计算出样品中α－HBDH的活性。 四、样品

血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；

静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。

样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。

α－HBDH测定样品为不溶血的血清、血浆（肝素或EDTA抗凝）。样品应在低温条件下运输保存，样品中α－HBDH在2～8℃保存可稳定7天。 五、试剂 （一）试剂组成

R1：试剂1 还原型辅酶Ⅰ（NADH） R2：试剂2 α-酮丁酸 16.5 mmol/L 0.33mmol/L 不同批号试剂中各组份不能互换。 （二）试剂准备

R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。 （三）试剂的保存及稳定性

1. 不能冰冻试剂。

2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定期为瓶签标示的有效期。开瓶后的试剂应在2～8℃保存，稳定期为30天。

（四）试剂性能可接受的指标

空白吸光度：试剂空白在主波长340nm、副波长405nm处，10mm光径下，吸光度值≥1.000。 （五）试剂使用中的注意事项

1. 严格按照试剂说明书的要求使用试剂。

2. 试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的有效期。对超过有效期的试剂不能使用。

3. 严禁放置0℃以下保存。

4. 试剂开瓶后，如果长期放置，会吸收空气中的二氧化碳，导致pH 值下降，造成测定值不准确，因此请尽快使用。

5. 当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值＜1.000时，表明试剂已失效，应弃去。

6. 装载试剂时防止产生气泡，否则结果无法保证。 7. 不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能混用，否则试剂的稳定性将无法保证。 （六）预防危险发生的注意事项

使用时避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者附着到皮肤上的时候，请立即用大量清水冲洗，如有必要，

请接受医生的治疗。

（七）处理废弃物时的注意事项

试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。 六、操作步骤

1. 基本参数

方 法：速率法 样品/试剂：1/50 主波长：340nm 反应温度：37℃ 副波长：405nm 反应时间：10min 2. 操作 （1）二步法 加入物 样 品（μl） 校准品（μl）

空白（B） 校准（C） 测定（U） -- --

-- 6 -- 240

6 -- -- 240

蒸馏水/生理盐水

6

（μl） 试剂R1（μl）

240

混匀，37℃恒温5分钟。 试剂R2（μl）

60

60

60

混匀，37℃恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化率△A/min。

（2）一步法

工作液配制：根据测定所需试剂量，取R1和R2按4:1比例混合即为工作液。 加入物 样 品（μl） 校准品（μl） 蒸馏水/生理盐水（μl）

工作液（μl）

空白（B） 校准（C） 测定（U） -- -- 20 1000

-- 20 -- 1000

20 -- -- 1000

混匀，37℃恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化率△A/min。 3. 操作流程图

空白调零 时间:

延迟 5分钟 温度:37℃

测定读数 主波长:340nm

副波长:405nm

1分钟 1-2分钟 R1:240μl 样品:6μl R2:60μl

4. 计算

样品HBDH活性（U/L）△=

理论F值：F=-8199

A/min

×F

注：由于理论F值是在理想条件下计算出的，每个实验室使用仪器和测定条件都不一样，故如果用理论F值计算，可能存在偏差，应使用校准品进行校准。 七、参考值范围

72-182 U/L 八、注意事项

（一）本试剂尽管具有较好的抗交叉污染能力，但仍应根据仪器性能及实验室条件做好防止交叉污染的工作。 （二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品体积比例不变的条件下，适当增加或减少试剂与样品的用量。

（三）采用必要的预防措施使用试剂，试剂使用后应立即盖紧瓶盖，避免污染。

（四）准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控制。

（五）红细胞内HBDH含量比血清或血浆高数倍，样品应尽量避免溶血。

（六）药物、抗凝剂、促凝剂、分离胶等其他物质都可能对测定值造成无法预知的干扰。当怀疑标本存在这些干扰物质

的影响时，请停药后或采用无任何添加剂的血清进行测定。 九、安全性提示

血清等样品可能含有病毒、细菌等病源微生物，操作者有被感染的潜在危险性，操作时应采取防范措施；试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。