标题：乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 文件编号：001 生效日期：2011年11月30日 编制人： 批准人： 版本号：A 修订号：01 发布日期：2011年11月30日 发布部门：管理层 审核人： 乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 1原理
在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗原（HbsAg），配以酶标记抗体（HbsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。 2试剂：
2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）
2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司 2.3包装规格：96Test/Kit
2.4试剂盒组成：HbsAg预包被微孔板（包被HbsAg），HbsAb酶标抗体（含HRP标记HbsAg）, HbsAb阳性对照（含HbsAbde 阳性血清），HbsAb阴性对照血清（正常人血清），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含2M H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。 3样本采集：
取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及
18
标题：乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 文件编号：001 生效日期：2011年11月30日 编制人： 批准人： 版本号：A 修订号：01 发布日期：2011年11月30日 发布部门：管理层 审核人： 溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。 4所需仪器
4.1全自动酶免分析仪 4.2新鲜蒸馏水或去离子水
4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm） 4.4微量移液器
4.5 37℃恒温箱或水浴箱 4.6洗板机或洗瓶 5检验方法
5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。 5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。 5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。 5.4加样：分别在相应孔中加入50ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul；轻拍混匀。 5.6温育：置37℃温育25min。
5.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s的浸泡时间）。
5.8显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗置15min。
19
标题：乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 文件编号：001 生效日期：2011年11月30日 编制人： 批准人： 版本号：A 修订号：01 发布日期：2011年11月30日 发布部门：管理层 审核人： 5.9终止：每孔加入终止液50ul，混匀。
5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照调零,30min钟内完成测定），并记录结果。 6结果判定与分析
临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD均值*2.1；阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。
结果判定：样本OD值S/C.O.>=1者为HbsAb阳性 样本OD值S/C.O.<1者为HbsAb阴性 阴性对照均值>0.1或阳性对照均值<0.4时，
实验无效，应重新试验。
7质量控制
每次试验用HBsAb的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至从新试验使其在控。 8参考范围 阴性或阳性 9临床意义
在血清或血浆中HbsAb的存在表明感染乙型肝炎病毒或曾感染乙型肝炎病毒。
10操作性能 灵敏度为ng/ml，特异性高 11方法的局限性
11.1此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测，不适
20
标题：乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA） 文件编号：001 生效日期：2011年11月30日 编制人： 批准人： 版本号：A 修订号：01 发布日期：2011年11月30日 发布部门：管理层 审核人： 合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。
11.2该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗体。 11.3试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时，验证试剂盒中的组分是否有效 。 12注意事项
12.1每板设阴、阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗原，其余各步相同。
12.2洗涤时各孔均须加满，防止孔内有游离酶未能洗净。 12.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，是液体混匀。 12.4所用样品、废液和废弃物都应按传染源处理。 12.5所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质，应有合适的生物安全保证制度。
12.6样本显色深浅与样品中抗体的含量没有一定的正相关。
12.7不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
21
