212西北药学杂志 2008年8月 第23卷 第4期
石油醚萃取,石油醚萃取部位有特殊浓郁香味,冷藏
备用。
2.2 GC2MS分析条件 HP25毛细管柱(30m×0.25mm),柱温50～250℃(5℃/min),进样温度250℃,载气为氦气,分流比20∶1,进样量1μL。质谱条件:电离方式EI,离子源温度200℃,质量扫描范围30～500amu。2.3 测定结果 在上述实验条件下,用毛细管气相色谱法从藏木香中分离出43种组分,以面积归一化法测得脂肪油的各组分相对百分含量(表1),按上述GC2MS条件对脂肪油进行分析,得其总离子流图。
表1 藏木香脂肪油化学成分的GC2MS分析结果序号 保留时间/min16.5227.0338.3748.7559.0069.28710.21810.30910.93
1011121314151617181920212223242526272829303132333435363738394041424311.5111.5513.3514.5514.6715.1115.3015.5116.6517.7420.8522.3423.2723.4323.7125.4127.2727.3227.8428.3728.6829.1829.4830.9831.2432.7833.7033.8434.5334.6534.9136.5336.7436.81化合物 3,32二甲基辛烷癸烷十三烷十二烷未鉴定
2,42二甲基十一烷十八碳醇未鉴定
42甲基212[12甲基乙基]23环己烯212醇
62乙基十一烯C13H2842丙基242腈环己乙酯2反2环己甲酸42羟基22,22二甲基苯丙酮对2甲氧基苄基丙酮2,2,11,112四甲基十二烷hexylesorcinol22乙基苯丙酮丁香酚甲醚未鉴定
92(Z)2十八碳烯212醇α2甲基睾丸甾酮17
牻牛儿基丙酮甲基睾丸甾酮(-)姜烯丙酸睾丸酮新松香酸未鉴定丙酸睾丸甾酮
22[4a,82二甲基21,2,3,4,4a,5,6,72八羟基萘222烷基]丙基222烯212醇橙花醇丙酸酯
2,62二[1,12二甲基乙基]苯醌22(22苯基环己氧基)乙醇未鉴定未鉴定未鉴定土木香内酯异土木香内酯去氢夙毛菊内酯鼠尾草酚黄花乙酸内酯叶酸松香酸
42甲基十七烷酸亚麻酸分子式 相对分子质量相 对含量/%C10H221420.13C10H221420.05C13H281840.24C12H261700.06
0.05
C13H281840.03C18H38O2700.03
0.02C10H18O1540.02C17H21NO2C11H14O2C11H14O2C16H34C12H18O2C11H14OC11H14O2C18H36OC20H30O2C13H22OC20H30O2C15H24C22H32O3C20H30O2C22H32O3C15H24OC22H32O3C14H20O2C14H20O2
184271178178226194162178268302194302204344302344220344220220
0.010.010.050.020.010.020.010.010.010.020.050.020.020.020.020.080.030.050.030.020.010.020.080.090.2337.0532.440.341.790.040.020.030.200.04 对总离子流图中的各峰,经质谱扫描后得到质谱图,经计算机数据系统检索,人工谱图解析,按各色谱峰的质谱裂片图与文献核对,对基峰、质荷比和相对峰度等方面进行直观比较,分别对各个色谱峰加以确认[4],综合各项分析鉴定,确定了藏木香脂肪油的化学成分36种,结果见表1。3 讨论
表1表明,藏木香脂肪油共分出43个组分,已定性36个组分,占全部脂肪油含量的86.05%。藏木香脂肪油的主要成分为土木香内酯和异土木香内酯,占全部脂肪油含量的75.83%,如土木香内酯(alantolactone)37.05%、异土木香内酯(isoalantolactone)32.44%。其中土木香内酯化学结构与山道年类似,驱虫作用较山道年效果好而毒性较低。青海互助所产的藏木香为藏药中的上品,此项研究测定脂肪油中所含的土木香内酯为37.05%,异土木香内酯为32.44%。土木香内酯和异土木香内酯的含量远远高于文献报道的其它不同地区菊科植物土木香中所含土木香内酯和异土木香内酯的量[2,3],表明藏药藏木香具有很好的开发价值。参考文献:
[1] 中国科学院西北高原生物研究所.藏药志[M].西宁:
青海人民出版社,1991:261.
[2] 戴斌,丘翠嫦.木香挥发油气相色谱2质谱分析[J].
中药材,1995,18(3):1392142.
[3] 国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草藏药卷
[M].上海:上海科学技术出版社,2002:46.
[4] 梁勇,典灵辉,方昆阳,等.甘草挥发性成分GC2MS分析
[J].西北药学杂志,2005,20(1):325.
(收稿日期:2008201209)
从海带中提取褐藻糖胶工艺的研究
肖 策,李多伟3,逄敏洁,史江华(西北大学生命科学学
院,陕西西安710069)
摘要:目的 以海带为原料研究褐藻糖胶的提取工艺。方法通过单因素和正交试验,摸索海带粒度、提取温度、提取溶剂、提取时间、料液比和醇沉体积分数对提取纯化褐藻糖胶的影响。结果 提取纯化褐藻糖胶的最佳条件为:在20目的海带粉中加入15倍pH2的15g・L-1CaCl2溶液,在60℃下提取1.5h,提取液浓缩后加乙醇至体积分数为65%,使褐藻糖胶沉淀、离心、洗涤并干燥。结论 采用该工艺从海带中提取纯化褐藻糖胶,成本低且效果较好。关键词:海带;褐藻糖胶;提取工艺中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:100422407(2008)0420212203
作者简介:肖策,男,硕士研究生。
通讯作者:李多伟,男,副教授,硕士生导师,Tel:029288302013
E2mail:duoweili104@sina.com
C15H20O2C15H20O2C15H20O2C20H30O2C22H32O4C19H19N7O6C20H30O2C18H36O2C18H30O22322322323023604413022842783
西北药学杂志 2008年8月 第23卷 第4期213
海带(LaminariajaponicaAresch)是褐藻门海带目海带科海带属的一种大型海藻,是食药两用的褐藻类植物。我国的海带年产量最高达40万吨,居世界首位。海带中含有多种生物活性成分,如海带氨酸、褐藻酸、甘露醇和多糖等,因此,近年来国内外对海带的保健功能的研究比较重视。
褐藻糖胶(fucoidan)存在于所有褐藻中的细胞间多糖,1913年由Kylin首次从褐藻掌状海带中提取出来,是一种杂多糖,除了含有岩藻糖和硫酸根外,还含有半乳糖、木糖、甘露糖和糖醛酸等。海带中褐藻糖胶的含量一般为0.3%～1.5%。研究表明,褐藻糖胶具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗氧化、抗疲劳、降脂、抗凝血、降血糖、放射防护等多方面的生物活性,是本世纪海洋药物研究的热点之一[1]。
海带价格低廉,而陕西省拥有众多的天然药化企业,以此为出发点,笔者研究从海带中提取褐藻糖胶的生产工艺,以期为陕西省天然药化企业生产褐藻糖胶提供科学依据。1 仪器与试药1.1 仪器 W201恒温水浴锅,上海申生科技有限公司生产;TDL25型离心机,上海安亭科学仪器厂生产;2550紫外分光光度计,日本岛津公司生产;BP211D电子天平,上海精密科学仪器有限公司。1.2 材料 西安市售海带干品,经去沙、去杂、烘干、粉碎处理后贮藏备用。1.3 试剂 浓硫酸、苯酚、乙醚、丙酮和葡萄糖(均为分析纯);乙醇为化学纯。2 试验方法2.1 提取纯化方法 海带→清洗→干燥→粉碎→过筛→高浓度甲醇浸提→处理后的海带粉→烘干→酸性溶剂浸提→离心→取上清液调节pH至中性→体积分数70%乙醇沉淀→乙醚、丙酮洗涤→干燥→褐藻糖胶粗品。2.2 测定方法 褐藻糖胶含量测定采用苯酚2硫酸法[2]:用分析纯葡萄糖作标准曲线(计算多糖含量时乘以校正系数0.9),回归方程为Y=0.031+0.623X(相关系数r=0.9997,在0.1～0.6范围内线性关系良好),其中Y为多糖含量,X为OD值。3 结果与分析3.1 提取溶剂对提取率的影响 取10g藻粉,料液比为1∶10,调pH为1,1.5,2,2.5和3,50℃热水浴中浸提1h,离心,取上清液加乙醇至体积分数为70%使褐藻糖胶沉淀后离心、洗涤、干燥,得褐藻糖胶粗品。
实验结果表明,提取溶剂为pH2时,提取率最大,以后随着pH继续增大,提取率开始下降,所以实验选取pH2提取多糖。
我们在提取试验中发现,虽然pH2盐酸提取率
最高,但溶剂极易被海带吸收,所以提取时实际料液比远未达到1∶10,而CaCl2可与海带中的褐藻酸钠生成不易膨胀的褐藻酸钙,从而抑制了海带的膨胀。因此我们考虑,如果采用适当质量浓度CaCl2溶液,用盐酸将其pH调至2,应有更好的效果。所以,我们又做了如下实验。取10g藻粉,使料液比为1∶10,分别采用5,10,15,20和25g・L-1CaCl2溶液分别调至pH为2,于60℃水浴中浸提2h,离心,上清液用70%乙醇沉淀,再离心、干燥,得褐藻糖胶粗品。
实验结果表明,选用pH2的15g・L-1溶液为提取溶剂时,粗褐藻糖胶提取率最大。3.2 最佳提取条件的筛选 提取溶剂选用pH2的
-1
15g・LCaCl2溶液,经单因素试验研究,选择海带粒度、提取温度、提取时间、料液比作为影响因素,指标为褐藻糖胶提取率,做正交试验,见表1和2。
表1 因素水平表水平
123A,温度/℃506070因 素B,粒度/目C,时间/h101.0201.5302.0(以纯褐藻糖胶计)
D,料液比/mL∶g1∶101∶201∶30表2 正交试验法提取海带中褐藻糖胶的方案与结果实验号A,温度/℃B,粒度/目C,时间/minD,料液比/mL∶g提取率/mg・g-1111114.40212227.15313334.284212312.285223113.45623128.15731325.90832133.50933214.45p15.2777.5275.3507.433p211.2938.0337.9607.067p34.6175.6277.8776.687
A2B2C2D1R6.6762.4062.6100.746表3 方差分析结果
方差来源离差平方和
温度81.214粒度9.659时间13.203料液比(误差)0.836自由度方差
240.60724.829526.601520.418F
97.146
11.55415.7931.00显著性显 著不显著不显著不显著注:F0.05(2,2)=19 F0.01(2,2)=99
直观分析和方差分析结果表明,影响褐藻糖胶提取率的因素主次顺序为提取温度>提取时间>粒度>料液比,其中提取时间、料液比和粒度对提取率影响不明显。结合操作可行性,最终确定褐藻糖胶浸提最佳条件为A2B2C2D1,即在20目的海带粉中加入海带质量15倍的提取溶剂60℃浸提1.5h。3.3 醇沉体积分数对褐藻糖胶纯度及提取率的影响取50g藻粉,料液比为1∶15,于60℃水浴中浸提1.5h后,离心,取上清液加乙醇至体积分数为60%,65%,
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70%,75%和80%沉淀,再离心、干燥,得褐藻糖胶粗品。
实验结果表明,65%乙醇体积分数下褐藻糖胶纯度最高,70%乙醇体积分数下褐藻糖胶提取率最高。综合考虑,我们选用65%乙醇体积分数沉降褐藻糖胶,既可以减少乙醇用量节约成本,又可以得到纯度
最高且提取率较高的褐藻糖胶。4 讨论
①在提取试验中发现,海带粉末在水和盐酸溶液中吸水且膨胀,致使提取溶剂体积减少,而在CaCl2溶液中提取溶剂体积几乎没有减少。这是因为海带中含有的褐藻酸钠遇水则膨胀,而CaCl2可与褐藻酸钠生成不易膨胀的褐藻酸钙,从而抑制了海带的膨胀。因此,使用混有盐酸的CaCl2溶液提取褐藻糖胶,可以解决提取时海带粉末易吸水膨胀这一难题。
②王作芸等在提取铜藻中褐藻糖胶的实验中发现pH4是最佳条件[3];宗虎民等在提取裙带菜假根中褐藻糖胶的实验中发现pH5是最佳条件[4];本实验pH2左右为最佳,这可能是因为不同种的藻甚至是同种而不同产地的藻类中褐藻糖胶溶解特性不同而造成的。
③醇沉体积分数对褐藻糖胶纯度的影响规律为:60%和65%乙醇体积分数下粗多糖纯度随醇体积分数增高而增高,65%乙醇体积分数下褐藻糖胶纯度最高,高于65%时褐藻糖胶纯度随醇体积分数增高而减少,高于75%时褐藻糖胶纯度不再明显变化。这是因为当乙醇体积分数高于65%时,开始沉降出褐藻淀粉,至75%时褐藻淀粉基本沉降完全。参考文献:
[1] 钱风云,傅德贤,欧阳藩.海带多糖生物功能研究进展
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分离及提纯[J].水产学报,1985,9(1):71277.[4] 宗虎民,刘长发,韩蕾,等.裙带菜假根中褐藻糖胶的提
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪AstragalusCompl2
anatusR.Br.的干燥成熟种子,在历代本草中曾以白蒺藜、沙苑蒺藜子、潼蒺藜、沙蒺藜等名称入药。具有温补肝肾、固精、缩尿、益肝明目的功能,为滋补强壮药。近年来以沙苑子酒、茶、奶糖和蜂王浆等用作保健药品。
沙苑子主要含有氨基酸、多肽、蛋白质、黄酮类、三萜类、有机酸类、鞣质、甾醇及铁、锌、锰、铜等微量元素[1]。其中黄酮是沙苑子的主要有效成分,包括沙苑子苷、沙苑子新苷、沙苑子杨梅苷、鼠李柠檬素232βO22D2葡萄糖苷、紫云英苷等[224]。由于受品种、产地、气候和生态环境等因素的影响,不同产地的沙苑子药材所含黄酮类成分有一定差异。药理研究表明沙苑子总黄酮有明显的降低血清胆固醇、三酰甘油,减轻肝脂肪变形作用、保肝、抑瘤、抗脂质过氧化,还可降低脂蛋白2胆固醇含量。1 实验材料1.1 仪器 光电分析天平TG328B(上海天平仪器厂);JA3002N电子天平(上海精密科学仪器有限公司);水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司,型号DK29821型);烘箱(重庆实验设备厂,型号DG/202002型);紫外2可见分光光度仪(日本岛津;UV22401)。1.2 试药 药材(购于西安中药集团,经鉴定均符合《中国药典》2005年版一部各药材项下的有关规定);芦丁对照品(购自中国药品生物制品检定所,批号008029705);氢氧化钠(天津市津北精细化工有限公司);亚钠(重庆化学试剂厂);银(天津市博迪化工有限公司);乙醇等。2 实验方法2.1 正交试验设计 根据文献资料,可知影响醇提工艺的主要因素是加醇量(A)、提取次数(B)、提取时
4
间(C)、乙醇体积分数(D),故采用L9(3)正交试验对其进行考察,根据预实验来确定各水平之间的梯度,设计因素水平表,见表1。
表1 醇提沙苑子中总黄酮试验因素水平表水平
123A,乙醇用量/倍8取[J].天然产物研究与开发,2006,18:100321006.
(收稿日期:2008201210)
沙苑子中总黄酮的提取工艺研究
庞来祥,刘 燕,刘小民,郭 涛(第四五一医院,
陕西西安710054)
摘要:目的 优选沙苑子最佳提取工艺。方法 通过正交试验以浸出物得率和总黄酮含量为指标确定沙苑子最佳提取工艺。结果 最佳工艺为用8倍量体积分数40%乙醇,加热回流2次,每次1.5h。结论 该提取方案合理、可行。关键词:沙苑子;总黄酮;正交实验中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:100422407(2008)0420214203
因 素B,回流次数/次C,回流时间/hD,乙醇体积分数/%326021.55011402.2 样品溶液的制备 取沙苑子药材9份,每份20
g,按正交试验条件提取。将药材置于圆底烧瓶中,水
浴加热回流提取,合并提取液,回收乙醇至无醇味,将药液用蒸馏水定容于50mL量瓶中,摇匀,备用。2.3 总浸出物的考察 将上述129号样品溶液分别精密吸取2mL,置于已恒重过的蒸发皿中,水浴蒸干,转移到烘箱中,于105℃下烘干至恒重,得到总浸出物(%),结果见表2。
